第四章植物组织培养的基本程序 甘肃农业大学农学院果树科学系 2012年3月1日
主要内容 第一节初代培养 第二节继代培养 第三节生根培养 第四节试管苗的驯化移栽
第一节初代培养 初代培养的概念 匐外植体的选择 圓外植体的消毒与接种 圓污染及其防治 匐褐化及其控制 匐初代培养的要求
第一爷初代培养 一、初代培养的概念 口概念 将外植体进行表面灭菌后接种到 培养基上，诱导出无菌试管培养 物的过程；也称为启动培养。 是进行试管繁殖的第一个阶段。 口目标 建立无菌繁殖体系
第一爷初代培养 二、外植体的选择 1.外植体的取材部位 组织培养中，外植体几乎包括了植 物体的各个部位，如茎尖、茎的切段、 髓、皮层及维管组织、髓细胞、表皮及 亚表皮组织、树木的形成层、块茎的贮 藏薄壁组织、花瓣、根、叶、子叶、鳞 茎、胚珠和花药等。 在生产实践中必须选取最易表达全能性的部位，加大培养成功 的机会，以利降低生产成本
第一爷初代培养 2外植体选择的要求 口材料部位的影响：对大多数植物来讲，茎尖是较好的 部位，茎段则是组织培养应用最广泛的材料。 口取材季节的影响：一般在生长旺盛季节取材所带杂菌 最少、成功率高。 口器官的生理状态和发育年龄：一般生理年龄越小，越 容易诱导根和芽的发生。 ▣材料大小的影响：材料越小，成活率越低、污染率越 低
《 第一节初代培养 3外植体的采集方法 ▣选择优良的种质：良好的性状或者特殊的基因型。 口选择健壮的母株：防治病毒病等。 口晴天早晨采集：雨后不宜采集。 口采集工具要消毒。 口枝条采集时剪去叶片。防治失水。 口低温保湿携带，不宜长距离运输。带回实验室应立即冲 洗消毒
第一节初代培养 三、外植体的表面灭菌 1.消毒剂 既要杀死材料表面的杂菌，又对外植体的损伤很小，使其正常生长。 外植体消毒常用灭菌剂 灭菌剂 使用浓度 持续时间(min) 去除的难易 灭菌效果 酒精 70-75% ≤0.5 中 好 84消毒液 15% 10~30 易消毒剂 好 氯化汞 0.1~0.2% 4~15 较难 最好 H202 3% 5~30 中 较好 次氯酸钠 2% 30~60 易 很好 次氯酸钙 0.1-1% 5-30 易 很好 抗茵素 9~10% 5~30 中 较好
第一爷初代培养 2外植体消毒程序 清洗与流水冲洗 消毒方法 基段消毒培养过用 剪切2cm 70%酒精≤30s D清洗与流水冲洗23h 70%酒精30S 表面消毒剂 无菌水冲洗3-5次 5%84消毒液 无菌水冲洗 或0.1%升汞 接种 35次 再生 培养 消毒剂消毒
第一爷初代培养 3接种 口每个培养容器只接1个外植体。 接的越多，污染率越高，成功率越低。 口按无菌操作要求进行。 口封口后转至培养室培养