1.质粒DNA的小量快速制备 2.质粒DNA的限制性内切酶酶切 3.DA的琼脂糖凝胶电泳

1.鉴定。鉴定所培养的单菌落中是否含有重组质粒,或仅含有自身环化的质粒。如 前所述,前者电泳后会出现大小不等的两条DNA条带,一条为线性质粒载体的DNA,另 条为插入的目的基因;后者仅有一条载体的DNA条带。比如 DDPCR、 RACEPCR、细 胞库筛选、基因重组,等

上海中医药大学：《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教学资源（PPT实验课件）酶切电泳回收（酶切重组质粒电泳分离所插入的DNA）

上海中医药大学：《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教学资源（PPT实验课件）重组质粒

复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学课件_实验二 重组质粒的提取及鉴定

1.放大某一基因片段,用于探针、基因功能检测、报道基因研究等。方法是:把某 DNA片段插入到相应的载体(比如质粒、噬菌体、哺乳类细胞表达载体等),给予扩 增,用以标记探针、测序、cDNA库建立、基因功能检测等多种分子生物学实验

利用插入突变的方式获得了一株衣藻不运动突变体ift81,该突变体表现出鞭毛缺失或者短鞭毛的性状.基因序列分析表明,外源基因aphⅧ插入了突变体中IFT81(intraflagellar transport,IFT)基因的第五个外显子内,并导致该外显子原有的52个碱基对被替换.把含有完整IFT81基因的重组质粒导入突变体ift81后,其鞭毛恢复为野生型且可以检测到IFT81-HA融合蛋白的表达,这证明突变体的鞭毛缺陷确实是由于IFT81基因突变所导致.电镜观察显示突变体中鞭毛的显微结构发生改变,免疫荧光实验证实IFT81蛋白主要定位于基体和鞭毛部位.上述结果表明:IFT81蛋白缺失会导致衣藻鞭毛组装缺陷,在鞭毛组装所需蛋白的运输过程中,IFT81蛋白是必不可少的

1.重组质粒的鉴定。当质粒的重组或其它载体重组后,通常会发生质粒的重组失 败,包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选,把重组成功的质粒找出来。在目前常用的 质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗性基因,一旦重组成功,质粒环化(包括自身环 化),抗生素抗性基因表达,被转化的大肠杆菌便具备抗相应抗生素的能力,可以含该抗生 素的培养基中生长传代,不然,重组失败,大肠杆菌便不能抵抗该抗生素而死亡

把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫 载体(Vector).细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子, 并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制 和转录能力能在子代细胞中保持恒定的拷贝数并表达所携带的遗传信息

1.Cacl2法制备感受态细胞 2.目的基因与载体的连接 3.重组质粒转化大肠杆菌并筛选转化体