第十一次课堂讨论后汇总问题2016-1129 、溶原性转变使表面性质和致病性都改变,表面性质与致病性是否关联? 答:没有关联,在不同菌种有不同的表现 2、高频感染使入与入gal为1:1的补偿机制。 答:什么意思? 3、自然转化是亲缘较近的菌之间发生的,且需要DNA链的互补配对,其结果是形 成与原DNA完全相同的序列?不是的话,又是如何实现的,是的话有什么意义? 答:其结果是可以发生基因同源重组,可以实现基因互补。 4、整合的F基因错误切割可以F因子,其错误切割的方式只有一种吗?还是有其 它的切割方式? 答:每一次错切都不一样,是随机发生的。 1、真核生物质粒游离态能否发生表型效应? 答:能。 2、UV--原生质体融合,是否会稳定存在? 答:没看明白 3、HGT在动物中也存在(人中也存在很多),如今医疗将病毒等威胁排除后,是 否会影响人类进化? 答:只能推测。病毒的存在对人类的意义是什么么? 1、溶源菌中,基因已经整合到宿主上,为什么说性状会随噬菌体的消失而消失? 答:噬菌体还会脱离宿主基因组,自发的或诱发的。 2、为什么转化时 dsDNA需要同源整合而质粒DNA不需要? 答:因为质粒具有自主复制能力 3、HFT中提到了双重溶源菌,但是入dgal和入同属入噬菌体,在感染到一个细胞 后,会对另一个出现排斥,所以是如何生成双重溶源菌的?
第十一次 课堂讨论后汇总问题 2016-11-29 第一组： 1、 溶原性转变使表面性质和致病性都改变，表面性质与致病性是否关联？ 答：没有关联，在不同菌种有不同的表现。 2、 高频感染使入与入 gal 为 1：1 的补偿机制。 答：什么意思？ 3、 自然转化是亲缘较近的菌之间发生的，且需要 DNA 链的互补配对，其结果是形 成与原 DNA 完全相同的序列？不是的话，又是如何实现的，是的话有什么意义？ 答：其结果是可以发生基因同源重组，可以实现基因互补。 4、 整合的 F 基因错误切割可以 F’因子，其错误切割的方式只有一种吗？还是有其 它的切割方式？ 答：每一次错切都不一样，是随机发生的。 第二组： 1、 真核生物质粒游离态能否发生表型效应？ 答：能。 2、 UV----原生质体融合，是否会稳定存在？ 答：没看明白。 3、 HGT 在动物中也存在（人中也存在很多），如今医疗将病毒等威胁排除后，是 否会影响人类进化？ 答：只能推测。病毒的存在对人类的意义是什么么？ 第三组： 1、 溶源菌中，基因已经整合到宿主上，为什么说性状会随噬菌体的消失而消失？ 答：噬菌体还会脱离宿主基因组，自发的或诱发的。 2、 为什么转化时 dsDNA 需要同源整合而质粒 DNA 不需要？ 答：因为质粒具有自主复制能力。 3、 HFT 中提到了双重溶源菌，但是入 dgal 和入同属入噬菌体，在感染到一个细胞 后，会对另一个出现排斥，所以是如何生成双重溶源菌的？
答:野生型先整合,缺陷型噬菌体可以通过单交换或同源重组再整合到基因组上 种接合杂交的子代基因型 答:注意HFR与F-接合后多数是F-。其他是F+ 1、流产转导中外源DNA为什么不进行交换,整合和复制有什么机制阻碍它对宿主 DNA进行整合? 答:1)与同源整合的要求有关。单交换不能实现基因互补,在筛选环节被淘汰。2) 在发生整合或重组之前,转入的基因被DNA酶降解了。 2、肥胖与肠道细菌有关,肠内厚壁菌门多于拟杄菌门导致更能吸收食物中的热量 而导致肥胖,但是现在的减肥药都没有这个现象为原理制作,是有什么问题在应用 上么? 答:某些益生源是含有益生菌群所需的营养,所以促进益生菌生长。也有提出使用 特殊菌群的,有如喝酸奶调节肠道微生物一样。 第五组: 1、如何将双重溶源菌与其它细菌分离? 答:可以用双抗进行筛选,前体是分别用2中抗性基因标记野生和缺陷噬菌体 、为何HKF-杂交后的受体细胞大多数仍为F-? 答:因为Hfr重组基因的顺序是:F因子上的转移起始位点一一一宿主基因 F因子的大部分基因,基因比较大,转移过程中的中断导致F因子的大部 分基因不被转移到受体细胞,所以是F一。 第六组 1、噬菌体基因会接到人体核基因组,但随着噬菌体消失,人体性状消失(溶源转 化)转导DNA不能进行重组和复制,所以受体菌的转导DNA不能遗传么? 答:没看明白。 为什么同种菌无法免疫其它个体产生的细菌素 答:因为它们有共同的细菌素受体,也反应了细菌素有一定的种属特异性
答：野生型先整合，缺陷型噬菌体可以通过单交换或同源重组再整合到基因组上。 4、 三种接合杂交的子代基因型。 答：注意 HFR 与 F-接合后多数是 F-。其他是 F+。 第四组： 1、 流产转导中外源 DNA 为什么不进行交换，整合和复制有什么机制阻碍它对宿主 DNA 进行整合？ 答：1）与同源整合的要求有关。单交换不能实现基因互补，在筛选环节被淘汰。2） 在发生整合或重组之前，转入的基因被ＤＮＡ酶降解了。 2、 肥胖与肠道细菌有关，肠内厚壁菌门多于拟杆菌门导致更能吸收食物中的热量 而导致肥胖，但是现在的减肥药都没有这个现象为原理制作，是有什么问题在应用 上么？ 答：某些益生源是含有益生菌群所需的营养，所以促进益生菌生长。也有提出使用 特殊菌群的，有如喝酸奶调节肠道微生物一样。 第五组： 1、 如何将双重溶源菌与其它细菌分离？ 答：可以用双抗进行筛选，前体是分别用２中抗性基因标记野生和缺陷噬菌体。 2、 为何 HfrXF-杂交后的受体细胞大多数仍为 F-？ 答：因为Ｈｆｒ重组基因的顺序是：Ｆ因子上的转移起始位点―――宿主基因 组―――Ｆ因子的大部分基因，基因比较大，转移过程中的中断导致Ｆ因子的大部 分基因不被转移到受体细胞，所以是Ｆ－。 第六组： 1、 噬菌体基因会接到人体核基因组，但随着噬菌体消失，人体性状消失（溶源转 化）转导 DNA 不能进行重组和复制，所以受体菌的转导 DNA 不能遗传么？ 答：没看明白。 第七组： 1、 为什么同种菌无法免疫其它个体产生的细菌素。 答：因为它们有共同的细菌素受体，也反应了细菌素有一定的种属特异性
2、什么情况下转入的DNA会被降解 答:没有保护的结合蛋白或未来得及发生重组 3、影响普遍性转导成功率的因素有哪些? 答:宿主基因组与噬菌体基因组有类似的pac包装识别位点,基因片段大小合适, 包装前没有被全部降解。所以感染噬菌体的时间点和时长很重要 1、沙门氏菌Lτ22A-携带P22噬菌体溶原性;非溶原性(1、无噬菌体生成,控制变 量。2、表型改变,易于观察) 2、ga+转导子不稳定,1-10%a变成ga-,aα交换后形成稳定转导子,而部分二倍 体因转入质粒失去α恢复ga|-表型 此处的整理没有看明白。 1、快转感受态如何制作?为何无需40℃热激及37℃复苏? 答:不太清楚。需要注意快与转化效率不一样。如果转化质粒,其实对感受态的要 求并不高,尤其是有筛选标记时、不要求转化效率时。 噬菌体(满足普遍性转导要求),如何鉴别确定这样的噬菌体?以用作基因工 程工具? 答:通过营养缺陷性受体菌、野生型供体菌和待检测噬菌体,设计转导实验,检测 是否能够获得重组菌。用作基因工程载体的噬菌体都是经过改造的,商业化的。 3、海洋中多为古生菌且变化较慢的原因是什么?(猜想是环境较稳定) 答:可能是。实际上海洋中非古生菌非常多,只是以前没有研究较好古生菌的方法, 所以最新发现了其中存在嗜中温的海洋古生菌。 1、低频转导和高频转导分别适用于?低频转导率高为何还要高频? 答:1)正常转导是低频转导,需要提高重组率时采用高频转导。2)因为后者获得 非常高的重组体。 2、F因子雌性与三种雄性同时存在时,有没有优先级? 答:理论上F+菌株最容易与F-接合,因为现成的、无缺陷的F质粒随之可用
2、 什么情况下转入的 DNA 会被降解？ 答：没有保护的结合蛋白或未来得及发生重组。 3、 影响普遍性转导成功率的因素有哪些？ 答：宿主基因组与噬菌体基因组有类似的ｐａｃ包装识别位点，基因片段大小合适， 包装前没有被全部降解。所以感染噬菌体的时间点和时长很重要。 第八组： １、沙门氏菌 LT22A---携带 P22 噬菌体溶原性；非溶原性（1、无噬菌体生成，控制变 量。2、表型改变，易于观察） ２、gal+转导子不稳定，1-10% α变成 gal-，αα 交换后形成稳定转导子，而部分二倍 体因转入质粒失去 α 恢复 gal-表型。 此处的整理没有看明白。 第九组： 1、 快转感受态如何制作？为何无需 40℃热激及 37℃复苏？ 答：不太清楚。需要注意快与转化效率不一样。如果转化质粒，其实对感受态的要 求并不高，尤其是有筛选标记时、不要求转化效率时。 2、 噬菌体（满足普遍性转导要求），如何鉴别确定这样的噬菌体？以用作基因工 程工具？ 答：通过营养缺陷性受体菌、野生型供体菌和待检测噬菌体，设计转导实验，检测 是否能够获得重组菌。用作基因工程载体的噬菌体都是经过改造的，商业化的。 3、 海洋中多为古生菌且变化较慢的原因是什么？（猜想是环境较稳定） 答：可能是。实际上海洋中非古生菌非常多，只是以前没有研究较好古生菌的方法， 所以最新发现了其中存在嗜中温的海洋古生菌。 第十组： 1、 低频转导和高频转导分别适用于？低频转导率高为何还要高频？ 答：1）正常转导是低频转导，需要提高重组率时采用高频转导。2）因为后者获得 非常高的重组体。 2、 F 因子雌性与三种雄性同时存在时，有没有优先级？ 答：理论上 F+菌株最容易与 F-接合，因为现成的、无缺陷的 F 质粒随之可用
3、普遍性转导中两种形式是与DNA片段有关还是概率事件。 答:与DNA判断有关,因为与同源重组发生的难易度有关 细菌为何要消耗大量染色体资源进行自然转化?对细菌有什么好处? 答:通过自然转化可以获得新的性状,如肺炎链球菌的致病性。 牛羊瘤胃中的微生物是如何获得的?代代相传还是自己重建? 答:从饲料中自然带入的。之后会有部分留在瘤胃内,所以内部菌群是一个动态平 冷冻干燥保种时,种子细胞中的游离水是否全部失去了?其细胞结构不会因此 而破坏吗? 答:因为加入保护剂如脱脂奶粉或DMSO,可以防止形成冰晶,不会破坏细胞结构。 但是还是会损失一部分细胞的,所以保存时细胞要达到一定数量。游离水基本很少 了 3、为什么目前发现感染植物的细菌都是杆菌?这只是巧合么 答:不知道啊! 1、基因重组时载体与目的基因的结合为什么要加 POLYA或 polyT? 答:载体与目的基因连接一般都是限制性酶切后粘性末端的连接。如果是平末端连 接,需要制造人工接头,可以是 POLYA/ polyT,或者 pol y C/ pol yG。 为什么局限性转导只能传递供体菌核染色体上的个别基因? 答:因为局转的噬菌体多是定点整合在宿主(供体)基因组上,当不正确切离时只 能误切整合位点附近的基因,所以是个别基因 高频转导时如何对溶源菌进行诱导的? 答:UV或芥子气等可以损伤DNA的理化方法。 水华和赤潮都是由蓝细菌、绿藻、原生动物过量繁殖产生,为什么颜色差别很 大? 答:因为里面生存的微生物不一样,产生的色素不同
3、 普遍性转导中两种形式是与 DNA 片段有关还是概率事件。 答：与 DNA 判断有关，因为与同源重组发生的难易度有关。 4、 细菌为何要消耗大量染色体资源进行自然转化？对细菌有什么好处？ 答：通过自然转化可以获得新的性状，如肺炎链球菌的致病性。 第十一组： 1、 牛羊瘤胃中的微生物是如何获得的？代代相传还是自己重建？ 答：从饲料中自然带入的。之后会有部分留在瘤胃内，所以内部菌群是一个动态平 衡。 2、 冷冻干燥保种时，种子细胞中的游离水是否全部失去了？其细胞结构不会因此 而破坏吗？ 答：因为加入保护剂如脱脂奶粉或 DMSO，可以防止形成冰晶，不会破坏细胞结构。 但是还是会损失一部分细胞的，所以保存时细胞要达到一定数量。游离水基本很少 了。 3、 为什么目前发现感染植物的细菌都是杆菌？这只是巧合么？ 答：不知道啊！ 第十二组： 1、 基因重组时载体与目的基因的结合为什么要加 POLYA 或 polyT？ 答：载体与目的基因连接一般都是限制性酶切后粘性末端的连接。如果是平末端连 接，需要制造人工接头，可以是 POLYA／polyT，或者ｐｏｌｙＣ／ｐｏｌｙＧ。 2、 为什么局限性转导只能传递供体菌核染色体上的个别基因？ 答：因为局转的噬菌体多是定点整合在宿主（供体）基因组上，当不正确切离时只 能误切整合位点附近的基因，所以是个别基因。 3、 高频转导时如何对溶源菌进行诱导的？ 答：UV 或芥子气等可以损伤ＤＮＡ的理化方法。 第十三组： 1、 水华和赤潮都是由蓝细菌、绿藻、原生动物过量繁殖产生，为什么颜色差别很 大？ 答：因为里面生存的微生物不一样，产生的色素不同
2、转染相对于转化有何优缺点? 答:转染是采用脂质体包裹DNA,与无细胞壁的细胞融合,多用于哺乳动物细胞 转化可以用于任何细胞
2、 转染相对于转化有何优缺点？ 答：转染是采用脂质体包裹 DNA，与无细胞壁的细胞融合，多用于哺乳动物细胞。 转化可以用于任何细胞