第31卷第8期沈阳药科大学学报Vol. 31No.82014年8月Journal of Shenyang Pharmaceutical UniversityAug. 2014 p.649文章编号：1006-2858（2014）08-0649-05HPLC法测定人血浆中奥沙普秦含量及其药物动力学谢伟，关博（1.西宁市第二人民医院，青海西宁810003：2.辽宁省金秋医院，辽宁沈阳110016）摘要：目的建立HPLC法测定人血浆中奥沙普秦（oxaprozin，Oxa）浓度的方法，并研究其在健康受试者体内的药物动力学。方法采用固相萃取法提取样品，以布洛芬为内标物，采用Diamonsil-Cr（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇20mmolL-醋酸铵水溶液（pH=3.0±0.2）（体积比为63:27），流速为1.0mL·min，柱温为30℃，检测波长为280nm。结果0xa在0.5~150.0mgL内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9969），日间和日内精密度RSD均小于6.5%，提取回收率大于68.4%。主要药物动力学参数为：p（84±12）mgL，tm（3.2±1.4）h，z（49±4）h，AUC（2383±327）mg*hL-，AUC（2468±346）mgh·L-。结论HPLC法适用于临床测定奥沙普秦在人体中的浓度。关键词：奥沙普秦：健康受试者：药物动力学：高效液相色谱法中图分类号：R917文献标志码：A奥沙普秦（oxaprozin，Oxa）是新型的芳基丙酸1仪器与材料类非留体抗炎药，1993年在美国批准上市，具LC-OAT高效液相色谱仪（日本Shimadzu公有抗炎、镇痛、解热等作用，目前临床上用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、强直司），SPD-→OAT紫外检测器（日本Shimadzu公司），LCsolutionLite色谱工作站（日本Shimadzu性脊椎炎、肩关节周围炎、痛风及外伤和手术后消炎镇痛。公司），AUW120D电子分析天平（日本Shimadzu目前，国内虽已有方法报道采用乙睛沉淀蛋公司），FA1004电子分析天平（上海恒平科学仪白法、有机试剂液液萃取法提取血浆奥沙普器有限公司），XW-80A涡旋混合器（上海沪西科秦，应用于体内样品的测定。其中沉淀蛋白方法学仪器厂），台式离心机（上海安亭科学仪器厂），提取后血浆中残余蛋白质较多，色谱基线较高，对OasisMax固相萃取小柱（60mg，美国Waters公司）。仪器及色谱柱有一定的影响：采用乙醚等有机溶剂液液萃取的方法对环境污染较大，提取过程中奥沙普秦分散片（福州世纪星制药有限公也容易产生乳化现象，影响提取的稳定性。阎小司），奥沙普泰标准品（批号：100353-201001，中国青等曾采用Cs（500mg）固相萃取小柱提取样药品生物制品检定所），布洛芬标准品（批号：100179-201103，中国药品生物制品检定所），水品，该实验方法选用C.填料，对酸性物质的提取效果不佳且Ci.填料的容量因子较OasisMax固相（二次重蒸水，自制），甲醇（色谱纯，美国Sigma萃取柱小。本文作者根据奥沙普秦分子的理化性公司），甲酸（色谱纯，天津科密欧化学仪器试剂质呈酸性（PKa=4.3），选择了OasisMax固相萃有限公司），醋酸铵（色谱纯，美国Sigma公司），取小柱萃取样品。与硅胶柱相比，Oasis吸附剂的氨水（分析纯，天津市百世化工有限公司），盐酸表面积增大2.0~3.0倍，容量因子大大提高，所（分析纯，天津市百世化工有限公司），空白血浆以作者选择OasisMax（60mg）固相萃取小柱提取（西宁市血液中心提供）。样品，建立奥沙普秦体内药物动力学研究，收稿日期：2014-01-08作者简介：谢伟（1974-），男（满族），辽宁本溪人，副主任医师，主要从事脊柱外科研究，Tel.0971-5130017，E-mailobal12074@163.com?1994-2014 China Academic JournalElectronic Publishing House.All rights reserved.http:/www.cnki.net
书 收稿日期: 2014-01-08 作者简介: 谢伟( 1974-) ，男( 满族) ，辽宁本溪人，副主任医师，主要从事脊柱外科研究，Tel． 0971-5130017，E-mail oba112074@ 163． com。 文章编号: 1006-2858( 2014) 08-0649-05 HPLC 法测定人血浆中奥沙普秦 含量及其药物动力学 谢 伟1 ，关 博2 ( 1. 西宁市第二人民医院，青海 西宁 810003; 2. 辽宁省金秋医院，辽宁 沈阳 110016) 摘要: 目的 建立 HPLC 法测定人血浆中奥沙普秦( oxaprozin，Oxa) 浓度的方法，并研究其在健康受 试者体内的药物动力学。方法 采用固相萃取法提取样品，以布洛芬为内标物，采用 Diamonsil-C18 ( 150 mm × 4. 6 mm，5 μm) 色谱柱，流动相为甲醇-20 mmol·L － 1 醋酸铵水溶液( pH = 3. 0 ± 0. 2) ( 体积比为 63∶ 27) ，流速为 1. 0 mL·min － 1 ，柱温为 30 ℃，检测波长为 280 nm。结果 Oxa 在 0. 5 ～ 150. 0 mg·L － 1 内与峰面积呈良好线性关系( r = 0. 996 9) ，日间和日内精密度 ＲSD 均小于 6. 5% ，提 取回收率大于 68. 4% 。主要药物动力学参数为: ρmax ( 84 ± 12) mg·L － 1 ，tmax ( 3. 2 ± 1. 4) h，t1 /2 ( 49 ± 4) h，AUC0→t ( 2 383 ± 327) mg·h·L － 1 ，AUC0→∞ ( 2 468 ± 346) mg·h·L － 1 。结论 HPLC 法适用于临 床测定奥沙普秦在人体中的浓度。 关键词: 奥沙普秦; 健康受试者; 药物动力学; 高效液相色谱法 中图分类号: Ｒ 917 文献标志码: A 奥沙普秦( oxaprozin，Oxa) 是新型的芳基丙酸 类非甾体抗炎药［1］，1993 年在美国批准上市，具 有抗炎、镇痛、解热等作用，目前临床上用于治疗 风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、强直 性脊椎炎、肩关节周围炎、痛风及外伤和手术后消 炎镇痛。 目前，国内虽已有方法报道采用乙腈沉淀蛋 白法［2］、有机试剂液液萃取法［3］提取血浆奥沙普 秦，应用于体内样品的测定。其中沉淀蛋白方法 提取后血浆中残余蛋白质较多，色谱基线较高，对 仪器及色谱柱有一定的影响; 采用乙醚等有机溶 剂液液萃取的方法对环境污染较大，提取过程中 也容易产生乳化现象，影响提取的稳定性。阎小 青等［4］曾采用 C18 ( 500 mg) 固相萃取小柱提取样 品，该实验方法选用 C18填料，对酸性物质的提取 效果不佳且 C18填料的容量因子较 Oasis Max 固相 萃取柱小。本文作者根据奥沙普秦分子的理化性 质呈酸性( PKa = 4. 3) ，选择了 Oasis Max 固相萃 取小柱萃取样品。与硅胶柱相比，Oasis 吸附剂的 表面积增大 2. 0 ～ 3. 0 倍，容量因子大大提高，所 以作者选择 Oasis Max( 60 mg) 固相萃取小柱提取 样品，建立奥沙普秦体内药物动力学研究。 1 仪器与材料 LC-10AT 高效液相色谱仪( 日本 Shimadzu 公 司) ，SPD-10 AT 紫外检测器( 日本 Shimadzu 公 司) ，LC solution Lite 色谱工作站( 日本 Shimadzu 公司) ，AUW120D 电子分析天平( 日本 Shimadzu 公司) ，FA1004 电子分析天平( 上海恒平科学仪 器有限公司) ，XW-80A 涡旋混合器( 上海沪西科 学仪器厂) ，台式离心机( 上海安亭科学仪器厂) ， Oasis Max 固相萃取小柱( 60 mg，美国 Waters 公 司) 。 奥沙普秦分散片( 福州世纪星制药有限公 司) ，奥沙普秦标准品( 批号: 100353-201001，中国 药品生物 制 品 检 定 所) ，布 洛 芬 标 准 品 ( 批 号: 100179-201103，中国药品生物制品检定所) ，水 ( 二次重蒸水，自制) ，甲醇( 色谱纯，美国 Sigma 公司) ，甲酸( 色谱纯，天津科密欧化学仪器试剂 有限公司) ，醋酸铵( 色谱纯，美国 Sigma 公司) ， 氨水( 分析纯，天津市百世化工有限公司) ，盐酸 ( 分析纯，天津市百世化工有限公司) ，空白血浆 ( 西宁市血液中心提供) 。 第 31 卷 第 8 期 2 0 1 4 年 8 月 沈 阳 药 科 大 学 学 报 Journal of Shenyang Pharmaceutical University Vol. 31 No. 8 Aug． 2014 p. 649
650沈阳药科大学学报第31卷取室温融化的血浆样品200μL，分别加入2方法与结果20μL流动相、内标溶液，加入200μL2.1：色谱条件1.0mol·L-盐酸酸化，加水1.0mL，涡旋混合30色谱柱：DiamonsilCi（150mmx4.6mm，s上样，加入到活化、平衡后的固相萃取小柱上，先以500μL质量分数为5%的氨水清洗2次，再5μm），流动相：甲醇-20mmol·L醋酸铵水溶液用500μL甲醇清洗2次，弃去清洗液，以500μL（pH=3.00±0.20）（体积比63：27），流速：质量分数为2%的甲酸甲醇溶液洗脱样品2次合1.0mLmin，柱温：30℃，检测波长：280nm，进并洗脱液，置氮气流下吹干，残渣加入200μL流样量：20μL。动相复溶，涡旋混合30s，12000rmin-离心32.2溶液配制min，取上清液20μL进样分析。2.2.1标准溶液的制备2.4分析方法验证精密称定Oxa对照品，置100mL量瓶中，用2.4.1专属性试验流动相溶解、稀释至刻度，制得Oxa对照品储备液取6个不同受试者空白血浆，不加内标溶液；（5.00gL-）。分取对照品储备液适量，用流动空白血浆中加入一定质量浓度的Oxa标准溶液和相稀释制成5.0、10.0、50.0、100.0、200.0、500.0、内标溶液：受试者服药后某个时间点血浆加入内1000.0、1500.0mg·L-的0xa系列标准溶液，置标溶液，上述样品自“加入200L1.0mol·L-盐冰箱冷藏（4℃）备用。酸酸化”后均按"2.3”条处理后，进样分析得色谱2.2.1内标溶液的制备图见图1。Oxa和内标布洛芬的保留时间分别为精密称定布洛芬标准品，置50mL量瓶中，用7.4min和4.8min，且内源性物质不干扰待测物流动相溶解、稀释至刻度，制得内标溶液和内标的测定。（50.0mgL-），置冰箱冷藏（4℃）备用。2.3血浆样品的预处理与测定cAB21M246081046D24681002810t/mint/mint/min1Internal standard:2OxFig.1Chromatogramof blank human plasma(A),blankplasma spiked with standard solution of Oxaprozin(0.5 mgL-') and internal standard(B),sample after oral administration of Oxaprozin dispersible tablet(C)图1空白血浆（A）、空白血浆加对照品和内标溶液（B）和口服给药后样品（C)的HPLC色谱图2.4.2标准曲线的绘制芬的峰面积比值为纵坐标（），用加权最小二乘法进行回归运算，权重系数为1/x，连续测定取室温融化的空白血浆200μL，分别加入3d，求得直线回归方程：y=7.846×10-3p+20uL系列标准溶液及内标溶液配制成相当于血浆质量浓度分别为0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、1.200×10-2（r=0.9969），本方法0xa在0.50~50.0.100.0和150.0mgL-的血浆样品，分别加150.0mg·L-1内线性关系良好，定量下限为0. 50 mg-L-1。入200μL1.0mol·L-1盐酸酸化，加水1.0mL，涡旋混合30s后上样，加入到活化、平衡后的固相2.4.3定量下限萃取小柱上，先以500uL质量分数为5%的氨水取室温融化的空白血浆200μL，分别加入清洗2次，再用500μL甲醇清洗2次，弃去清洗20μL标准溶液及内标溶液配制成相当于血浆质液，以500μL质量分数为2%的甲酸甲醇溶液洗量浓度为0.50mg·L-的血浆样品，自“加入200μL1.0molL-盐酸酸化”后，按“2.4.2”条脱样品2次合并洗脱液，置氮气流下吹于残渣加入200μL流动相复溶，涡旋混合30OS操作，6样本分析，连续测定3d，并根据当日标准曲线计算每一样本测得浓度。结果表明，本试验12000rmin-！离心3min，取上清液20uL进样分析，每浓度双样本分析，求得标准曲线。以Oxa所建立方法测定血浆中奥沙普秦的定量下限可达的质量浓度（mgL-"）为横坐标（p）、Oxa与布洛0.50mgL-（见表1）。?1994-2014 China Academic Journal Electronic Publishing House.All rights reserved.http://www.cnki.net
2 方法与结果 2. 1 色谱条件 色谱 柱: Diamonsil C18 ( 150 mm × 4. 6 mm， 5 μm) ，流动相: 甲醇 － 20mmol·L － 1 醋酸铵水溶液 ( pH = 3. 00 ± 0. 20 ) ( 体 积 比 63 ∶ 27 ) ，流 速: 1. 0 mL·min － 1 ，柱温: 30 ℃，检测波长: 280 nm，进 样量: 20 μL。 2. 2 溶液配制 2. 2. 1 标准溶液的制备 精密称定 Oxa 对照品，置 100 mL 量瓶中，用 流动相溶解、稀释至刻度，制得 Oxa 对照品储备液 ( 5. 00 g·L － 1 ) 。分取对照品储备液适量，用流动 相稀释制成 5. 0、10. 0、50. 0、100. 0、200. 0、500. 0、 1 000. 0、1 500. 0 mg·L － 1 的 Oxa 系列标准溶液，置 冰箱冷藏( 4 ℃ ) 备用。 2. 2. 1 内标溶液的制备 精密称定布洛芬标准品，置 50 mL 量瓶中，用 流 动 相 溶 解、稀 释 至 刻 度，制 得 内 标 溶 液 ( 50. 0 mg·L － 1 ) ，置冰箱冷藏( 4 ℃ ) 备用。 2. 3 血浆样品的预处理与测定 取室温融化的血浆样品 200 μL，分别加入 20 μL 流 动 相、内 标 溶 液，加 入 200 μL 1. 0 mol·L － 1 盐酸酸化，加水 1. 0 mL，涡旋混合 30 s 上样，加入到活化、平衡后的固相萃取小柱上， 先以 500 μL 质量分数为 5% 的氨水清洗 2 次，再 用 500 μL 甲醇清洗 2 次，弃去清洗液，以 500 μL 质量分数为 2% 的甲酸-甲醇溶液洗脱样品 2 次合 并洗脱液，置氮气流下吹干，残渣加入 200 μL 流 动相复溶，涡旋混合 30 s，12 000 r·min － 1 离心 3 min，取上清液 20 μL 进样分析。 2. 4 分析方法验证 2. 4. 1 专属性试验 取 6 个不同受试者空白血浆，不加内标溶液; 空白血浆中加入一定质量浓度的 Oxa 标准溶液和 内标溶液; 受试者服药后某个时间点血浆加入内 标溶液，上述样品自“加入 200 μL 1. 0 mol·L － 1 盐 酸酸化”后均按“2. 3”条处理后，进样分析得色谱 图见图 1。Oxa 和内标布洛芬的保留时间分别为 7. 4 min 和 4. 8 min，且内源性物质不干扰待测物 和内标的测定。 1—Internal standard; 2—Oxa Fig． 1 Chromatogram of blank human plasma ( A) ，blank plasma spiked with standard solution of Oxaprozin ( 0. 5 mg·L － 1 ) and internal standard( B) ，sample after oral administration of Oxaprozin dispersible tablet( C) 图 1 空白血浆( A) 、空白血浆加对照品和内标溶液( B) 和口服给药后样品( C) 的 HPLC 色谱图 2. 4. 2 标准曲线的绘制 取室温融化的空白血浆 200 μL，分别加入 20 μL系列标准溶液及内标溶液配制成相当于血 浆质量浓度分别为 0. 5、1. 0、5. 0、10. 0、20. 0、 50. 0、100. 0 和 150. 0 mg·L － 1 的血浆样品，分别加 入 200 μL 1. 0 mol·L － 1 盐酸酸化，加水 1. 0 mL，涡 旋混合 30 s 后上样，加入到活化、平衡后的固相 萃取小柱上，先以 500 μL 质量分数为 5% 的氨水 清洗 2 次，再用 500 μL 甲醇清洗 2 次，弃去清洗 液，以 500 μL 质量分数为 2% 的甲酸-甲醇溶液洗 脱样品 2 次合并洗脱液，置氮气流下吹干残渣加 入 200 μL 流 动 相 复 溶，涡 旋 混 合 30 s， 12 000 r·min － 1 离心 3 min，取上清液 20 μL 进样 分析，每浓度双样本分析，求得标准曲线。以 Oxa 的质量浓度( mg·L － 1 ) 为横坐标( ρ) 、Oxa 与布洛 芬的峰面积比值为纵坐标( y) ，用加权最小二乘 法［5］进行回归运算，权重系数为 1 /x 2 ，连续测定 3 d，求得直线回归方程: y = 7. 846 × 10 － 3 ρ + 1. 200 × 10 － 2 ( r = 0. 996 9) ，本方法 Oxa 在 0. 50 ～ 150. 0 mg·L － 1 内线性关系良好，定 量 下 限 为 0. 50 mg·L － 1 。 2. 4. 3 定量下限 取室温融化的空白血浆 200 μL，分别加入 20 μL标准溶液及内标溶液配制成相当于血浆质 量浓度 为 0. 50 mg·L － 1 的 血 浆 样 品，自“加 入 200 μL 1. 0 mol·L － 1 盐酸酸化”后，按“2. 4. 2”条 操作，6 样本分析，连续测定 3 d，并根据当日标准 曲线计算每一样本测得浓度。结果表明，本试验 所建立方法测定血浆中奥沙普秦的定量下限可达 0. 50 mg·L － 1 ( 见表 1) 。 650 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 31 卷
651第8期谢伟等：HPLC法测定人血浆中奥沙普秦含量及其药物动力学Table1 LLOQ/Accuracy and precision of oxaprozin in plasma (n =6)表1血浆中奥沙普秦的定量下限和准确度与精密度(n=6)RSD/%iSample No.Padla / (mg-L-")Accuracy/%Intra-dayInter-day5.6180.50.4997.96.5181.51.51100.64.25.91880.079.999.86.41.718120.0101.23.94.3121.02.4.4准确度与精密度试验2.5药物动力学试验取室温融化的空白血浆200μL，分别加入选择18名健康男性受试者，年龄在18~4020μL标准溶液及内标溶液配制成相当于血浆质周岁，2周内未服用任何其他药品，经体检合格并量浓度为1.5、80.0、120.0mgL-的血浆样品即签署知情同意书，禁食12h后口服奥沙普秦分散质量控制样品（qualitycontrolsample，QC）低、中、片1片（400mg），250mL温开水送服，给药4h高3个浓度，自“加入200μL1.0mol·L-盐酸酸后可饮水，6h后统一进标准餐。于口服给药前化”后，按“2.4.2”条操作，每浓度各6样本分析，和给药后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、随行标准曲线连续测定3d。根据QC的浓度，求24.0、48.0、96.0、168.0和216.0h，由前臂静脉得本方法的准确度、日内和日间精密度，结果见取血5mL，置肝素试管中，离心15min表1。本分析方法的日内、日间精密度RSD均不大（3500rmin-"），分离血浆，存于-20℃冰箱中于6.5%，准确度RE在±3.0%之间，均符合有关待测。规定网。根据18名受试者口服奥沙普秦分散片后各时2.4.5提取回收率试验间点中Oxa血药质量浓度，绘制Oxa的平均血药质取室温融化的空白血浆200μL，自“加入量浓度－时间曲线。图2为18名受试者的平均药200μL1.0mol·L-盐酸酸化”后，按2.4.2”条-时曲线。经WinNonlin5.2.1数据统计软件进行操作至“置氮气流下吹干”后，残留物加入低、中、处理，得到有关药物动力学参数，详见表2。高3个质量浓度（15.0、800、1200mg·L-1）的标120mM准溶液和内标溶液各20μL，流动相160μL，涡旋10080混合30s取20μL进样分析。每浓度各6样本分60吨8m)/析，所得结果与当日质量控制样品比较，求得提取40回收率。低、中、高3个浓度的提取回收率分别为20F(76.8±2.6)%、(75.4±5.2)%、（68.4±02754811081351621892168.6)%，内标的提取回收率为（62.1±5.6)%。t/h2.4.6样品稳定性试验Fig.2mean plasma concentration-time curve of oxapro-取室温融化的空白血浆200μL，加入20μLzin aftertheoral administration of oxaprozindispersible标准溶液分别制备低、高2个质量浓度（1.50、tabletinhealthhuman120.0mgL-"）的样品，每浓度18个模拟血浆样图2健康受试者口服奥沙普秦分散片后平均药时曲线品，考察血浆样品冷冻（-20℃）保存25d长期3讨论稳定性、室温放置6h、冷冻－融化反复3次、处理后样品室温放置12h样品稳定性。模拟血浆样a.提取条件的选择：文献报道曾采用沉淀蛋白和液液萃取的方法提取奥沙普秦，但是根品取出于室温融化后，分别加入20μL内标溶液，自“加入200μL1.0mol·L-"盐酸酸化”后，按据作者条件考察结果显示，沉淀蛋白和液液萃取“2.4.2”条操作，进样分析，样品稳定性结果分别方法的提取回收率均低于固相萃取方法。文献与QC比较，RE值均在±15%之内（n=3），说明[4]中报道曾采用Cx（500mg）固相萃取小柱提取样品，对酸性物质的提取效果不佳，重现性不稳样品稳定性良好。?1994-2014 China Academic Journal Electronic Publishing House.All rights reserved.http://www.cnki.net
Table 1 LLOQ/Accuracy and precision of oxaprozin in plasma( n = 6) 表 1 血浆中奥沙普秦的定量下限和准确度与精密度( n = 6) Sample No. ρadded /( mg·L － 1 ) x 珋 Accuracy /% ＲSD/% Intra-day Inter-day 18 0. 5 0. 49 97. 9 5. 6 6. 5 18 1. 5 1. 51 100. 6 4. 2 5. 9 18 80. 0 79. 9 99. 8 6. 4 1. 7 18 120. 0 121. 0 101. 2 3. 9 4. 3 2. 4. 4 准确度与精密度试验 取室温融化的空白血浆 200 μL，分别加入 20 μL标准溶液及内标溶液配制成相当于血浆质 量浓度为 1. 5、80. 0、120. 0 mg·L － 1 的血浆样品即 质量控制样品( quality control sample，QC) 低、中、 高 3 个浓度，自“加入 200 μL 1. 0 mol·L － 1 盐酸酸 化”后，按“2. 4. 2”条操作，每浓度各 6 样本分析， 随行标准曲线连续测定 3 d。根据 QC 的浓度，求 得本方法的准确度、日内和日间精密度，结果见 表 1。本分析方法的日内、日间精密度 ＲSD 均不大 于 6. 5% ，准确度 ＲE 在 ± 3. 0% 之间，均符合有关 规定［6］。 2. 4. 5 提取回收率试验 取室温融化的空白血浆 200 μL，自“加 入 200 μL 1. 0 mol·L － 1 盐酸酸化”后，按“2. 4. 2”条 操作至“置氮气流下吹干”后，残留物加入低、中、 高 3 个质量浓度( 15. 0、800、1 200 mg·L － 1 ) 的标 准溶液和内标溶液各 20 μL，流动相 160 μL，涡旋 混合 30 s 取 20 μL 进样分析。每浓度各 6 样本分 析，所得结果与当日质量控制样品比较，求得提取 回收率。低、中、高 3 个浓度的提取回收率分别为 ( 76. 8 ± 2. 6 ) % 、( 75. 4 ± 5. 2 ) % 、( 68. 4 ± 8. 6) % ，内标的提取回收率为( 62. 1 ± 5. 6) % 。 2. 4. 6 样品稳定性试验 取室温融化的空白血浆 200 μL，加入 20 μL 标准溶液分别制备低、高 2 个质量浓度( 1. 50、 120. 0 mg·L － 1 ) 的样品，每浓度 18 个模拟血浆样 品，考察血浆样品冷冻( － 20 ℃ ) 保存 25 d 长期 稳定性、室温放置 6 h、冷冻 － 融化反复 3 次、处理 后样品室温放置 12 h 样品稳定性。模拟血浆样 品取出于室温融化后，分别加入 20 μL 内标溶液， 自“加入 200 μL 1. 0 mol·L － 1 盐酸酸化”后，按 “2. 4. 2”条操作，进样分析，样品稳定性结果分别 与 QC 比较，ＲE 值均在 ± 15% 之内( n = 3) ，说明 样品稳定性良好。 2. 5 药物动力学试验 选择 18 名健康男性受试者，年龄在 18 ～ 40 周岁，2 周内未服用任何其他药品，经体检合格并 签署知情同意书，禁食 12 h 后口服奥沙普秦分散 片 1 片( 400 mg) ，250 mL 温开水送服，给药 4 h 后可饮水，6 h 后统一进标准餐。于口服给药前 和给药后 0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、6. 0、8. 0、12. 0、 24. 0、48. 0、96. 0、168. 0 和 216. 0 h，由前臂静脉 取 血 5 mL，置 肝 素 试 管 中，离 心 15 min ( 3 500 r·min － 1 ) ，分离血浆，存于 － 20 ℃ 冰箱中 待测。 根据 18 名受试者口服奥沙普秦分散片后各时 间点中 Oxa 血药质量浓度，绘制 Oxa 的平均血药质 量浓度 － 时间曲线。图 2 为 18 名受试者的平均药 － 时曲线。经 WinNonlin5. 2. 1 数据统计软件进行 处理，得到有关药物动力学参数，详见表 2。 Fig． 2 mean plasma concentration-time curve of oxaprozin after the oral administration of oxaprozin dispersible tablet in health human 图 2 健康受试者口服奥沙普秦分散片后平均药时曲线 3 讨论 a. 提取条件的选择: 文献报道曾采用沉淀蛋 白［2］和液液萃取［3］的方法提取奥沙普秦，但是根 据作者条件考察结果显示，沉淀蛋白和液液萃取 方法的提取回收率均低于固相萃取方法。文献 ［4］中报道曾采用 C18 ( 500 mg) 固相萃取小柱提 取样品，对酸性物质的提取效果不佳，重现性不稳 第 8 期 谢 伟等: HPLC 法测定人血浆中奥沙普秦含量及其药物动力学 651
652沈阳药科大学学报第31卷Table2Pharmacokineticparameters of Oxaprozinin一个单位，使奥沙普秦的峰形得到很大程度的改health human after oral administration Oxaprozin dis-善，且保留时间稳定。persible tablet根据FDA相关文件关于奥沙普秦钾片表2健康受试者口服奥沙普秦分散片后药物动力学参数（DAYPROALTA）说明显示食物能延缓奥沙普秦isParameter吸收约45min但是并不影响血药浓度，所以作者tun2/h49 ±4要求受试者在服用奥沙普秦分散片6h后达到峰f /h3.2 ±1.4值后进食。Mnr/h50.1 ±5.7根据前处理方法选择的是固相萃取的方法，Pamr (μg-L")84 ±12很大程度上提高了药物的提取回收率，且样品中AUCo-/(μg*h-L-")2 383 ±327的内源性物质减少，基线降低，所以本研究中OxaAUCo/(μg.h.L-")2 468 ± 346的定量下限（LLOQ）确定为0.5mg·L-，在测定受试样品中，只有2名受试者的尾点低于定量下定，根据分子的理化性质呈酸性，作者选择了Wa-限，提高了定量分析的准确度。ters的OasisMax固相萃取小柱，该小柱采用的填料为强阴离子交换基团键合由亲脂性和亲水性两参考文献：种单体按照一定比列聚合合成的共聚物，是一种[] TODD P A,BROGDEN R N. Oxaprozin: apreliminary在pHO-4范围内稳定的混合型阴离子交换剂，因review of pharmacodynamic and pharmacokinetic prop-其有疏水作用和阴离子交换两种不同的作用，对erties and therapeutic. efficacy u]. Drugs, 1986, 32:酸性化合物具有很高的选择性和灵敏度。根据奥291-312.沙普秦分子结构中含有羧基，呈酸性（PKa=4.3)[2]毛棉，王凌，蒋学华，等.测定血浆奥沙普秦的高校液且血浆蛋白结合率为98%，所以在本试验中作者相色谱法及应用)中草药，2013，30（1）：646采用了OasisMax固相萃取小柱：在提取过程中，650.选择用质量分数为4%、5%和6%的氨水清洗，效B许长江，江志强，杨香媛，等.奥沙普秦肠溶胶囊与片果比较，选用质量分数为5%的氨水处理后，血浆在中国健康者的药物动力学及相对生物利用度中国新药与临床杂志，2000，19（2）：90-92.样品中奥沙普秦在固相小柱中载样量较高，提高[4]阎小青，董伟林.固相萃取法测定人血浆中奥沙普秦了样品的提取回收率：同时洗脱液采用500uL体浓度m.天津药学201224（4）：17-19积分数为2%的甲酸甲醇溶液洗脱样品2次回收[5】钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线率高于1000μL体积分数为2%的甲酸-甲醇溶的若干问题.药物分析杂志，1996，16（5）：343-液洗脱1次：此外，经过固相萃取小柱处理后，样346.品中内源性杂质明显少于其他提取方法，色谱峰[6]】国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[M]基线相对较低，对色谱柱起到一定的保护作用。北京：中国医药科技出版社，2010：附录194b.流动相的选择：在流动相中加入缓冲盐醋酸铵，并调节pH=3.00，比奥沙普秦PKa4.3小Determination and pharmacokinetic of oxaprozin inhuman plasma by HPLCXIE Wei',GUAN Bo?(1.The Second People's Hospital of Xining, Xining 810003, China; 2. Jinqiu Hospital of Liaoning Prov-ince,Shenyang110016,China)Abstract: Objective To develop an HPLC method for determination of oxaprozin (Oxa) in the healthy sub-?1994-2014 China Academic Journal Electronic Publishing House.All rights reserved.http://www.cnki.net
Table 2 Pharmacokinetic parameters of Oxaprozin in health human after oral administration Oxaprozin dispersible tablet 表 2 健康受试者口服奥沙普秦分散片后药物动力学参数 Parameter x 珋± s t1 /2 /h 49 ± 4 tmax /h 3. 2 ± 1. 4 tMＲT /h 50. 1 ± 5. 7 ρmax ( μg·L － 1 ) 84 ± 12 AUC0→t /( μg·h·L － 1 ) 2 383 ± 327 AUC0→∞ /( μg·h·L － 1 ) 2 468 ± 346 定，根据分子的理化性质呈酸性，作者选择了 Waters 的 Oasis Max 固相萃取小柱，该小柱采用的填 料为强阴离子交换基团键合由亲脂性和亲水性两 种单体按照一定比列聚合合成的共聚物，是一种 在 pH0-14 范围内稳定的混合型阴离子交换剂，因 其有疏水作用和阴离子交换两种不同的作用，对 酸性化合物具有很高的选择性和灵敏度。根据奥 沙普秦分子结构中含有羧基，呈酸性( PKa = 4. 3) 且血浆蛋白结合率为 98% ，所以在本试验中作者 采用了 Oasis Max 固相萃取小柱; 在提取过程中， 选择用质量分数为 4% 、5% 和 6% 的氨水清洗，效 果比较，选用质量分数为 5% 的氨水处理后，血浆 样品中奥沙普秦在固相小柱中载样量较高，提高 了样品的提取回收率; 同时洗脱液采用 500 μL 体 积分数为 2% 的甲酸-甲醇溶液洗脱样品 2 次回收 率高于 1 000 μL 体积分数为 2% 的甲酸-甲醇溶 液洗脱 1 次; 此外，经过固相萃取小柱处理后，样 品中内源性杂质明显少于其他提取方法，色谱峰 基线相对较低，对色谱柱起到一定的保护作用。 b. 流动相的选择: 在流动相中加入缓冲盐醋 酸铵，并调节 pH = 3. 00，比奥沙普秦 PKa 4. 3 小 一个单位，使奥沙普秦的峰形得到很大程度的改 善，且保留时间稳定。 根据 FDA 相关文件关于 奥沙普秦钾片 ( DAYPＲO ALTA) 说明显示食物能延缓奥沙普秦 吸收约 45 min 但是并不影响血药浓度，所以作者 要求受试者在服用奥沙普秦分散片 6 h 后达到峰 值后进食。 根据前处理方法选择的是固相萃取的方法， 很大程度上提高了药物的提取回收率，且样品中 的内源性物质减少，基线降低，所以本研究中 Oxa 的定量下限( LLOQ) 确定为 0. 5 mg·L － 1 ，在测定 受试样品中，只有 2 名受试者的尾点低于定量下 限，提高了定量分析的准确度。 参考文献: ［1］ TODD P A，BＲOGDEN Ｒ N． Oxaprozin: apreliminary review of pharmacodynamic and pharmacokinetic properties and therapeutic efficacy［J］． Drugs，1986，32: 291 － 312． ［2］ 毛棉，王凌，蒋学华，等． 测定血浆奥沙普秦的高校液 相色谱法及应用［J］． 中草药，2013，30 ( 1) : 646 － 650． ［3］ 许长江，江志强，杨香媛，等． 奥沙普秦肠溶胶囊与片 在中国健康者的药物动力学及相对生物利用度［J］． 中国新药与临床杂志，2000，19( 2) : 90 － 92． ［4］ 阎小青，董伟林． 固相萃取法测定人血浆中奥沙普秦 浓度［J］． 天津药学，2012，24( 4) : 17 － 19． ［5］ 钟大放． 以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线 的若干问题［J］． 药物分析杂志，1996，16( 5) : 343 － 346． ［6］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典: 二部［M］． 北京: 中国医药科技出版社，2010: 附录 194． Determination and pharmacokinetic of oxaprozin in human plasma by HPLC XIE Wei 1 ，GUAN Bo 2 ( 1． The Second People's Hospital of Xining，Xining 810003，China; 2． Jinqiu Hospital of Liaoning Province，Shenyang 110016，China) Abstract: Objective To develop an HPLC method for determination of oxaprozin( Oxa) in the healthy sub- 652 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 31 卷
第8期谢伟等：HPLC法测定人血浆中奥沙普秦含量及其药物动力学653jects plasma,and study its pharmacokinetics after oral administration of oxaprozin dispersible tablets. Meth-ods Solid phase extraction method was used to extract the sample. Separation was achieved on a reversed-phase Crs column with a mobile phase of methanol -20 mmol-L-'ammonium acetate solution (pH =3. 0 ±0.2) (V:V=63:27).The flow rate was 1.0 mL·min- and the column temperature was 30 C. Ibuprofenwas used as an internal standard. Results The calibration curve of Oxa was linear in the concentration rangesof 0. 5-→50.0 mg·L- (r =0. 996 9).The RSDs of inter-and intra-day were less than 6.5% and the averagerecovery of Oxa was more than 68.4%.The main pharmacokinetics parameters of Oxa were as follows:pox(84±12)mgLl,tm(3.2±1.4)h,t/2(49±4)h,AUCg(2383±327)mgh·L-,AUCo(2468±346)mgh·L-".Conclusions This method is simple,quick with good reproducibility,and was suitable forpharmacokinetic study of oxaprozin in healthy subjects.Key words: oxaprozin; healthy subjects; pharmacokinetics; HPLC（上接第648页）Abstract:Objective To evaluate the clinical efficacy of Huangqi Guizhi Wuwu Tang (HQGZWWT) ontreating diabetic peripheral neuropathy and its safety.Methods Random controlled trials of HQGZWWT fordiabetic peripheral neuropathy (DPN) reported before October 2013 were retrieved through Medline,Em-base,Ovid database,the Cochrane central register of controlled, CBM disc, VIP,CNKI, Wanfang databaseand relevant literatures.Based on conventional treatment,experimental group received HQGZWWT treat-ment,control group received placebo or blank control. Then Meta-analysis was conducted with RevMan 5. 0software.Results A total of 22 papers involving 1450 patients were selected.The results of Meta-analysisshowed thatHQGZWWTwas effective in treatingDPN,OR=4.73,95%CI(3.62,6.17):In additionHQGZWWTwas significantly superior to vitamin B in total effective rate,OR=4.33,95%CI(2.13,8.83);also HQGZWWT was significantly superior to mecobalamin in total effective rate.ConclusionsHQGZWWT may have better effectiveness and more safety for DPN.Key words: Huangqi Guizhi Wuwu Tang ; diabetic peripheral neuropathy; Meta analysis《沈阳药科大学学报》增设新栏目公告为推进沈阳药科大学学科建设的发展，促进在校师生理论水平、科研能力的提高，快速有效的报道各个学科领域的新研究成果《沈阳药科大学学报》增设食品药学、环境科学和药事管理栏目，具体要求如下：食品药学本栏目稿件应为食品在药学领域的基础或应用的相关研究论文或综述。报道药食同源品、功能性食品和特殊食品的药品研究与开发的新理论、新成果、新技术、新方法和新进展。环境科学本栏目稿件应为环境化学、环境分析和环境毒理学等领域取得的研究论文或综述。报道有害化学物质的环境化学行为、化工过程的环境问题、水污染、气体污染、固体污染及其污染控制的方法、原理和技术：环境样品分析新技术、样品前处理用新材料、新方法和新技术：有毒有害化学污染物在环境中的迁移、转化和降解行为，对环境、人体和生态系统的致毒效应和风险研究：有毒物质毒性产生机理、作用机理及其与化学结构的关系。药事管理本栏目稿件应为医药经济与管理、药事法规与药品政策、医药企业管理、医药市场营销、医药国际贸易、药品安全与风险管理、药品研发与注册管理、药物经济学、药品知识产权保护和医药伦理学等领域取得的研究论文或综述。报道医药法规、药品营销、医药外贸、医药的工商管理、国内外医药行业的比较和国内外学术动态等。《沈阳药科大学学报》编辑部?1994-2014 China Academic Journal Electronic Publishing House.All rights reserved.http://www.cnki.net
jects plasma，and study its pharmacokinetics after oral administration of oxaprozin dispersible tablets． Methods Solid phase extraction method was used to extract the sample． Separation was achieved on a reversedphase C18 column with a mobile phase of methanol － 20 mmol·L － 1 ammonium acetate solution( pH = 3. 0 ± 0. 2) ( V∶ V = 63∶ 27) ． The flow rate was 1. 0 mL·min － 1 and the column temperature was 30 ℃ ． Ibuprofen was used as an internal standard． Ｒesults The calibration curve of Oxa was linear in the concentration ranges of 0. 5-150. 0 mg·L － 1 ( r = 0. 996 9) ． The ＲSDs of inter-and intra-day were less than 6. 5% and the average recovery of Oxa was more than 68. 4% ． The main pharmacokinetics parameters of Oxa were as follows: ρmax ( 84 ± 12) mg·L － 1 ，tmax ( 3. 2 ± 1. 4) h，t1 /2 ( 49 ± 4) h，AUC0→t ( 2 383 ± 327) mg·h·L － 1 ，AUC0→∞ ( 2 468 ± 346) mg·h·L － 1 ． Conclusions This method is simple，quick with good reproducibility，and was suitable for pharmacokinetic study of oxaprozin in healthy subjects． Key words: oxaprozin; healthy subjects; pharmacokinetics; HPLC ( 上接第 648 页) Abstract: Objective To evaluate the clinical efficacy of Huangqi Guizhi Wuwu Tang ( HQGZWWT) on treating diabetic peripheral neuropathy and its safety． Methods Ｒandom controlled trials of HQGZWWT for diabetic peripheral neuropathy ( DPN) reported before October 2013 were retrieved through Medline，Embase，Ovid database，the Cochrane central register of controlled，CBM disc，VIP，CNKI，Wanfang database and relevant literatures． Based on conventional treatment，experimental group received HQGZWWT treatment，control group received placebo or blank control． Then Meta-analysis was conducted with ＲevMan 5. 0 software． Ｒesults A total of 22 papers involving 1450 patients were selected． The results of Meta-analysis showed that HQGZWWT was effective in treating DPN，OＲ = 4. 73，95% CI( 3. 62，6. 17) ; In addition， HQGZWWT was significantly superior to vitamin B in total effective rate，OＲ = 4. 33，95% CI ( 2. 13， 8. 83) ; also HQGZWWT was significantly superior to mecobalamin in total effective rate． Conclusions HQGZWWT may have better effectiveness and more safety for DPN． Key words: Huangqi Guizhi Wuwu Tang; diabetic peripheral neuropathy; Meta analysis 《沈阳药科大学学报》增设新栏目公告 为推进沈阳药科大学学科建设的发展，促进在校师生理论水平、科研能力的提高，快速有效的报道 各个学科领域的新研究成果，《沈阳药科大学学报》增设食品药学、环境科学和药事管理栏目，具体要求 如下: 食品药学 本栏目稿件应为食品在药学领域的基础或应用的相关研究论文或综述。报道药食同源品、功能性食品和特殊食品 的药品研究与开发的新理论、新成果、新技术、新方法和新进展。 环境科学 本栏目稿件应为环境化学、环境分析和环境毒理学等领域取得的研究论文或综述。报道有害化学物质的环境化学 行为、化工过程的环境问题、水污染、气体污染、固体污染及其污染控制的方法、原理和技术; 环境样品分析新技术、样品 前处理用新材料、新方法和新技术; 有毒有害化学污染物在环境中的迁移、转化和降解行为，对环境、人体和生态系统的 致毒效应和风险研究; 有毒物质毒性产生机理、作用机理及其与化学结构的关系。 药事管理 本栏目稿件应为医药经济与管理、药事法规与药品政策、医药企业管理、医药市场营销、医药国际贸易、药品安全与 风险管理、药品研发与注册管理、药物经济学、药品知识产权保护和医药伦理学等领域取得的研究论文或综述。报道医 药法规、药品营销、医药外贸、医药的工商管理、国内外医药行业的比较和国内外学术动态等。 《沈阳药科大学学报》编辑部 第 8 期 谢 伟等: HPLC 法测定人血浆中奥沙普秦含量及其药物动力学 653