单克隆抗体 张一凡19301050012 概念:单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。 技术原理 首先将抗原注入小鼠体内,引发免疫反 单克隆抗体制备过程 应,促使B淋巴细胞增殖,接着用二氧化碳 注射抗原 气体杀死小鼠取出脾细胞,将其与骨髓瘤细 B淋巴细胞 胞混合并加入促融合剂聚乙二醇促进细胞 细胞融 的融合,在HAT培养基中进行培养 杂交瘤细胞 在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞 uIU 细胞培养 因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶, 筛选,继续培养 不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合 足够数量的、能产生 的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核 特定抗体的细胞群 体外培养 糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也 注射到小鼠腹腔 逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从 单克隆抗体 脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转 移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。 培养一段时间后筛选出那些能成功产生抗体的杂交瘤细胞,接着有两种方式,一是将筛选出 的细胞接种到小鼠的腹腔中,等过一段时间小鼠腹部膨大后抽取腹水即可获得大量单克隆抗 体,二是将筛选出的细胞置于培养瓶中进行培养,在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单 克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体 为什么要采用两种培养方式?体外培养法得到的单克隆抗体有限,其不能超过特定的细 胞浓度,且每天要换培养液,而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从 亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性,如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交 瘤的小鼠,杂交瘤细胞就开始无限地繁殖,直至宿主死亡。产生肿瘤细胞的小鼠腹水和血清 中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体,这种抗体的效价往往高于培养细胞上清液的 100~1000倍 技术应用 ①检验医学诊断试剂:应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等 技术 ②蛋白质的提纯:单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质上,并制备成层析柱。当样品流经 层析柱时,抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合。将层析柱充分洗脱后,改变洗脱液 的离子强度或pH,欲分离的抗原与抗体解离,收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原 ③肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术将单克隆抗体与治疗物质结合,让药物利用单克隆 抗体的导向作用到达靶器官并攻击靶细胞 优点: 1、杂交瘤细胞可在体外存活并且大量繁殖 2、可以用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的、均一的抗体 缺点:
单克隆抗体 张一凡 19301050012 概念：单克隆抗体是由单一 B 细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。 技术原理： 首先将抗原注入小鼠体内，引发免疫反 应，促使 B 淋巴细胞增殖，接着用二氧化碳 气体杀死小鼠取出脾细胞，将其与骨髓瘤细 胞混合并加入促融合剂聚乙二醇促进细胞 的融合，在 HAT 培养基中进行培养。 在 HAT 培养基中，未融合的骨髓瘤细胞 因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶， 不能利用补救途径合成 DNA 而死亡。未融合 的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核 糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也 逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从 脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转 移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在 HAT 培养基中存活和增殖。 培养一段时间后筛选出那些能成功产生抗体的杂交瘤细胞，接着有两种方式，一是将筛选出 的细胞接种到小鼠的腹腔中，等过一段时间小鼠腹部膨大后抽取腹水即可获得大量单克隆抗 体，二是将筛选出的细胞置于培养瓶中进行培养，在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单 克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体 为什么要采用两种培养方式？体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细 胞浓度，且每天要换培养液，而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从 亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性，如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交 瘤的小鼠，杂交瘤细胞就开始无限地繁殖，直至宿主死亡。产生肿瘤细胞的小鼠腹水和血清 中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，这种抗体的效价往往高于培养细胞上清液的 100~1000 倍。 ） 技术应用： ①检验医学诊断试剂：应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等 技术 ②蛋白质的提纯：单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质上，并制备成层析柱。当样品流经 层析柱时，抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液 的离子强度或 pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。 ③肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术:将单克隆抗体与治疗物质结合，让药物利用单克隆 抗体的导向作用到达靶器官并攻击靶细胞 优点： 1、杂交瘤细胞可在体外存活并且大量繁殖 2、可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体 缺点：
1、体外培养法得到的单克隆抗体有限,其不能超过特定的细胞浓度,且每天要换培养液 2、单克隆抗体主要为鼠源性抗体,异种动物血清可能引起人体过敏反应;制备技术复杂,而 且费时费工,所以单克隆抗体的价格也较高 3、反应强度不如多克隆抗体;单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用 4、由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应,所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成
1、体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液 2、单克隆抗体主要为鼠源性抗体,异种动物血清可能引起人体过敏反应; 制备技术复杂，而 且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高 3、反应强度不如多克隆抗体；单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用 范围 4、由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成