实训七 紫外线诱变选育α-淀粉酶 高产菌株 微生物与发酵工艺
实训七 紫外线诱变选育α-淀粉酶 高产菌株 微生物与发酵工艺
一、实验目的 1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术。 2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶的菌 株
一、实验目的 1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术。 2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶的菌 株
紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素，其 诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成 突变型。紫外线诱变，一般采用15W或30W紫外线 灯，照射距离为20-30cm，照射时间依菌种而异， 一般为1-3min，死亡率控制在50％-80％为宜。被 照射处理的细胞，必须呈均匀分散的单细胞悬浮 液状态，以利于均匀接触诱变剂，并可减少不纯 种的出现。同时，对于细菌细胞的生理状态则要 求培养至对数期为最好。 二、实验原理
紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素，其 诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成 突变型。紫外线诱变，一般采用15W或30W紫外线 灯，照射距离为20-30cm，照射时间依菌种而异， 一般为1-3min，死亡率控制在50％-80％为宜。被 照射处理的细胞，必须呈均匀分散的单细胞悬浮 液状态，以利于均匀接触诱变剂，并可减少不纯 种的出现。同时，对于细菌细胞的生理状态则要 求培养至对数期为最好。 二、实验原理
本实验以紫外线处理产淀粉酶的 枯草杆菌，通过透明圈法初筛，选择淀 粉酶活力高的生产菌株。 二、实验原理
本实验以紫外线处理产淀粉酶的 枯草杆菌，通过透明圈法初筛，选择淀 粉酶活力高的生产菌株。 二、实验原理
1. 菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌 2. 器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作 台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离心机、 培养皿、涂布器、10mL离心管、（1、5、 10mL）吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养 箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球 三、实验材料
1. 菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌 2. 器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作 台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离心机、 培养皿、涂布器、10mL离心管、（1、5、 10mL）吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养 箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球 三、实验材料
3. 培养基和试剂 ① 无菌水、75%酒精 ② 0.5％碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL，先将 碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中， 待碘片全部溶解后，加足水即可。 ③ 选择培养基 可溶性淀粉2g，牛肉膏1g，NaCl 0.5g， 琼脂2g，蒸馏水100mL，pH6.8～7.0，121℃灭菌20 min。 ④ 肉汤培养基 牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g， 蒸馏水100mL ，pH7.2～7.4，121℃灭菌20 min。 三、实验材料
3. 培养基和试剂 ① 无菌水、75%酒精 ② 0.5％碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL，先将 碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中， 待碘片全部溶解后，加足水即可。 ③ 选择培养基 可溶性淀粉2g，牛肉膏1g，NaCl 0.5g， 琼脂2g，蒸馏水100mL，pH6.8～7.0，121℃灭菌20 min。 ④ 肉汤培养基 牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g， 蒸馏水100mL ，pH7.2～7.4，121℃灭菌20 min。 三、实验材料
1.菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于 盛有20mL肉汤培养基的250mL三角瓶中，于 37℃振荡培养12h，即为对数期的菌种。 2.菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心 管中，以3000 r/min离心10min，弃去上清 液。加入无菌水9mL，振荡洗涤，离心 10min，弃去上清液。加入无菌水9mL，振 荡均匀。 四、实验步骤
1.菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于 盛有20mL肉汤培养基的250mL三角瓶中，于 37℃振荡培养12h，即为对数期的菌种。 2.菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心 管中，以3000 r/min离心10min，弃去上清 液。加入无菌水9mL，振荡洗涤，离心 10min，弃去上清液。加入无菌水9mL，振 荡均匀。 四、实验步骤
3.诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中（内放一个 磁力搅拌棒），置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯 下（距离30cm）照射0.5-1min。 4.取0.1-0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上， 用涂布器涂匀。置37℃暗箱培养48h。 5.在长出菌落的周围滴加碘液，观察并测定透明圈直 径（C）和菌落直径（H），挑选C/H值最大者接入斜面 保藏。 四、实验步骤
3.诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中（内放一个 磁力搅拌棒），置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯 下（距离30cm）照射0.5-1min。 4.取0.1-0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上， 用涂布器涂匀。置37℃暗箱培养48h。 5.在长出菌落的周围滴加碘液，观察并测定透明圈直 径（C）和菌落直径（H），挑选C/H值最大者接入斜面 保藏。 四、实验步骤
1.紫外线对人体的细胞，尤其是人的眼睛和皮 肤有伤害，长时间与紫外线接触会造成灼伤。 故操作时要戴防护眼镜，操作尽量控制在防护 罩内。 2.空气在紫外灯照射下，会产生臭氧，臭氧 也有杀菌作用。臭氧过高，会引起人不舒服， 同时也会影响菌体的成活率。臭氧在空气中的 含量不能超过0.1％-1％。 五、注意事项
1.紫外线对人体的细胞，尤其是人的眼睛和皮 肤有伤害，长时间与紫外线接触会造成灼伤。 故操作时要戴防护眼镜，操作尽量控制在防护 罩内。 2.空气在紫外灯照射下，会产生臭氧，臭氧 也有杀菌作用。臭氧过高，会引起人不舒服， 同时也会影响菌体的成活率。臭氧在空气中的 含量不能超过0.1％-1％。 五、注意事项
1.利用紫外诱变育种，应注意哪些因素? 2.为什么诱变育种后要挑选C/H值最 大者接 入斜面保藏? 六、结果与讨论
1.利用紫外诱变育种，应注意哪些因素? 2.为什么诱变育种后要挑选C/H值最 大者接 入斜面保藏? 六、结果与讨论