实训八 固定化技术 微生物与发酵工艺
实训八 固定化技术 微生物与发酵工艺
1.了解固定化细胞的原理。 2.掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的 方法。 一、实验目的
1.了解固定化细胞的原理。 2.掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的 方法。 一、实验目的
二、实验原理 细胞固定化的方法有多种，如吸附法、载体偶联 法和包埋法等。工业上常用包埋法固定微生物细胞。 根据包埋剂的特性，如在海藻酸钠呈溶液状时，将 细胞加入混匀，然后在氯化钙中凝固形成海藻酸钙 凝胶，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。海藻酸 钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可以新陈 代谢（固定活细胞)，也可利用细胞中的酶进行酶促 反应(固定死细胞)
二、实验原理 细胞固定化的方法有多种，如吸附法、载体偶联 法和包埋法等。工业上常用包埋法固定微生物细胞。 根据包埋剂的特性，如在海藻酸钠呈溶液状时，将 细胞加入混匀，然后在氯化钙中凝固形成海藻酸钙 凝胶，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。海藻酸 钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可以新陈 代谢（固定活细胞)，也可利用细胞中的酶进行酶促 反应(固定死细胞)
1.海藻酸钠、0.2 mol/L氯化钙溶液（4.44g 氯化钙，蒸馏水200mL）、市售活性干酵母 粉、青霉素、天平、纱布、细绳、20mL注 射器、250mL烧杯、250mL三角瓶、搅拌、 电炉、培养箱 2.沙保培养基 蛋白胨10g，葡萄糖40g，蒸 馏水1000mL ，pH自然，115℃灭菌20 min。 三、实验材料
1.海藻酸钠、0.2 mol/L氯化钙溶液（4.44g 氯化钙，蒸馏水200mL）、市售活性干酵母 粉、青霉素、天平、纱布、细绳、20mL注 射器、250mL烧杯、250mL三角瓶、搅拌、 电炉、培养箱 2.沙保培养基 蛋白胨10g，葡萄糖40g，蒸 馏水1000mL ，pH自然，115℃灭菌20 min。 三、实验材料
1.称取1.5g海藻酸钠于250mL烧杯中，加 蒸馏水至100mL处，加热搅拌溶解。冷却 后加入1g市售酵母粉，搅拌均匀。 2.配制0.2mol/L氯化钙溶液200mL。将 海藻酸钠酵母混合液装入20mL注射器中， 逐滴加入到0.2mol/L氯化钙溶液中，搅拌 成珠（固定酵母）。 四、实验步骤
1.称取1.5g海藻酸钠于250mL烧杯中，加 蒸馏水至100mL处，加热搅拌溶解。冷却 后加入1g市售酵母粉，搅拌均匀。 2.配制0.2mol/L氯化钙溶液200mL。将 海藻酸钠酵母混合液装入20mL注射器中， 逐滴加入到0.2mol/L氯化钙溶液中，搅拌 成珠（固定酵母）。 四、实验步骤
3.用蒸馏水洗涤固定酵母2次后，加入到灭过菌 的200mL沙保培养基中（其中加入1mg青霉素）。 4.将固定酵母于28℃静置培养2天后观察，可见 沙保培养基中有大量的CO2气泡产生，嗅气味有酒 香；用刀片切开固定酵母，镜检可见大量密集的酵 母菌。 四、实验步骤
3.用蒸馏水洗涤固定酵母2次后，加入到灭过菌 的200mL沙保培养基中（其中加入1mg青霉素）。 4.将固定酵母于28℃静置培养2天后观察，可见 沙保培养基中有大量的CO2气泡产生，嗅气味有酒 香；用刀片切开固定酵母，镜检可见大量密集的酵 母菌。 四、实验步骤
1.海藻酸钠溶液滴进氯化钙溶液中为什么 会凝固？ 2.固定化细胞与游离细胞比较，有什么优 点？ 五、结果与讨论
1.海藻酸钠溶液滴进氯化钙溶液中为什么 会凝固？ 2.固定化细胞与游离细胞比较，有什么优 点？ 五、结果与讨论
