自主实验方案:酸性环境对小麦第一片真叶的影响 组员:孟幸异10111910201辛月1011910207 【实验目的】 模拟自然环境中酸性土壤与水质,探究酸性水质胶管对于小麦第一片真叶的光合速率 叶绿素含量、可溶性糖含量以及含水量的影响 【实验原理】 酸性环境会降低小麦种子的出芽率,因此在最适环境(PH为65)中培养使种子出芽后 接种到配置的酸性(PH为5)的MS培养基中,在浇灌水中加入盐酸,将PH调到5,浇灌 小麦以模拟自然环境中酸性环境。(参考文献) 用光合测定仪来测定小麦第一片真叶的光合速率 用便携式叶绿素测定仪来测定叶绿素的含量。 称重后将叶片烘干,烘干前后质量之差计算出叶片含水量。 把烘干的叶片用蒽酮比色法来测定可溶性糖的含量 【材料与器材】 材料与试剂:小麦种子120个、盐酸、水、MS培养基、蛭石、纱布、浓硫酸 80%乙醇、葡萄糖标准溶液(100μgmL)、蒽酮试剂:称取1.0g蒽酮,溶于80%浓 硫酸(将98%浓硫酸稀释,把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中)1000°nL中,冷令却至室温, 贮于具塞棕色瓶内,冰箱保存,可使用2~3周、75%酒精。 器材:花盆45个(两组共享)、便携式叶绿素测定仪、光合测定仪、烘箱、电子天平、恒温批注|l:每盆多种一些,少用一些 水浴、分光光度计、离心机、刻度离心管、漏斗、大烧杯、滤纸、100毫升量筒、移液管 花盆,你们在培养过程中不断取材, 容量瓶、PH试纸、滴管、培养皿5个、带塞大试管8个、1L的容量瓶1个、酒精灯、比色 应该没有问题,太多的花盆没有地方 皿一套、LL细口瓶、研钵、保鲜膜 放置!!如果实在需要这么多,可能 你们需要培养在生物站点玻璃房中 【实验步骤】 小麦的种植 将经过太阳暴晒的小麦种子用蒸馏水浮选,去掉干瘪的籽粒,留下的种子在75%的酒 精中浸泡30-60秒,用蒸馏水反复洗涤。然后将消毒处理后得到的小麦种子浸泡于温水中2 小时,从中挑选颗粒饱满的种子进行萌发。 培养装置制备 1.往花盆中加入蛭石,从底盘中加入适量水,保证蛭石保持湿润,不黏手的情况, 后用保鲜膜覆盖。 1.按照培养皿大小把纱布裁剪三层,铺至萌发容器底部,用蒸馏水润湿。 2.将选好的种子均匀撒在纱布上,每皿保持30种,用保鲜膜将萌发容器封盖。 3.每天更换保鲜膜(通气),向其中加水使其保持湿润状态(备注:以用手指摁下有 参考文献:李清芳等PH值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响安徽农业科学2003,31(2):185-187
参考文献：李清芳等.PH 值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响[J].安徽农业科学,2003,31(2):185-187. 自主实验方案：酸性环境对小麦第一片真叶的影响 组员：孟幸异 10111910201 辛月 10111910207 【实验目的】 模拟自然环境中酸性土壤与水质，探究酸性水质胶管对于小麦第一片真叶的光合速率、 叶绿素含量、可溶性糖含量以及含水量的影响。 【实验原理】 酸性环境会降低小麦种子的出芽率，因此在最适环境（PH 为 6.5）中培养使种子出芽后， 接种到配置的酸性（PH 为 5）的 MS 培养基中，在浇灌水中加入盐酸，将 PH 调到 5，浇灌 小麦以模拟自然环境中酸性环境。(参考文献) 用光合测定仪来测定小麦第一片真叶的光合速率。 用便携式叶绿素测定仪来测定叶绿素的含量。 称重后将叶片烘干，烘干前后质量之差计算出叶片含水量。 把烘干的叶片用蒽酮比色法来测定可溶性糖的含量。 【材料与器材】 材料与试剂：小麦种子 120 个、盐酸、水、MS 培养基、蛭石、纱布、浓硫酸 80 ％乙醇、葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）、蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓 硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温， 贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周、75%酒精。 器材：花盆 45 个（两组共享）、便携式叶绿素测定仪、光合测定仪、烘箱、电子天平、恒温 水浴、分光光度计、离心机、刻度离心管、漏斗、大烧杯、滤纸、100 毫升量筒、移液管、 容量瓶、PH 试纸、滴管、培养皿 5 个、带塞大试管 8 个、1L 的容量瓶 1 个、酒精灯、比色 皿一套、1L 细口瓶、研钵、保鲜膜。 【实验步骤】 小麦的种植： 选种 将经过太阳暴晒的小麦种子用蒸馏水浮选，去掉干瘪的籽粒，留下的种子在 75%的酒 精中浸泡 30-60 秒，用蒸馏水反复洗涤。然后将消毒处理后得到的小麦种子浸泡于温水中 2 小时，从中挑选颗粒饱满的种子进行萌发。 培养装置制备 1. 往花盆中加入蛭石，从底盘中加入适量水，保证蛭石保持湿润，不黏手的情况，然 后用保鲜膜覆盖。 萌发 1. 按照培养皿大小把纱布裁剪三层，铺至萌发容器底部，用蒸馏水润湿。 2. 将选好的种子均匀撒在纱布上，每皿保持 30 种，用保鲜膜将萌发容器封盖。 3. 每天更换保鲜膜（通气），向其中加水使其保持湿润状态（备注：以用手指摁下有 批注 [y1]: 每盆多种一些，少用一些 花盆，你们在培养过程中不断取材， 应该没有问题，太多的花盆没有地方 放置！！如果实在需要这么多，可能 你们需要培养在生物站点玻璃房中
水渗出为标准),置于光照培养架上,25℃:三天后将已经发芽、生根的小麦种子转移至培 养装置中 种子转移 将22号萌发的种子,转移至培养装置中,每盆点播8颗*45盆(酸、碱、对照各 15盆),从底盘中加入适量水(实验组氢氧化钠调节PH至8、对照组调PH=6.5),保证蛭 石保持湿润,不黏手的情况,然后用保鲜膜覆盖。 2.每隔两天向培养装置中浇水(PH8、65),标准以淹没塑料筐、或泡沫板完全浮起 为最佳 MS培养基配置 照母液比例,配制12MS盐培养基L,储存于冰箱中 标准曲线制作 取6支大试管,从0~5分别编号,按表加入各试剂。将各管快速摇动混匀后 在沸水浴中煮10min,取出冷却,在620mm波长下,用空白调零测定光密度 以光密度为纵坐标,含葡萄糖量(μg)为横坐标绘制标准曲线。 100μg/mL葡萄糖溶液(m) 蒸馏水(皿) 蒽酮试剂(mL) 5.0 葡萄糖量(μg) 灌培养基 稀释出3L的1/10MS培养基PH调整到65,加入15个花盆中,作为对照组,连续3 次,之后用同PH水浇灌。 稀释出3L的l/l0MS培养基,用滴管吸取盐酸,缓慢加入MS培养基中,不断用PH 测试仪测培养基的PH值,将PH调整到5,加入15个花盆中,作为实验组,连续3次,之 后用同PH水浇灌。 (注与王智康组合作,碱性条件由他们完成,对照组共享) 当第一片真叶出现时,开始以下步骤 参考文献:李清芳等PH值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响安徽农业科学2003,31(2):185-187
参考文献：李清芳等.PH 值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响[J].安徽农业科学,2003,31(2):185-187. 水渗出为标准），置于光照培养架上，25℃；三天后将已经发芽、生根的小麦种子转移至培 养装置中。 种子转移 1. 将 22 号萌发的种子，转移至培养装置中，每盆点播 8 颗*45 盆（酸、碱、对照各 15 盆），从底盘中加入适量水（实验组氢氧化钠调节 PH 至 8、对照组调 PH=6.5），保证蛭 石保持湿润，不黏手的情况，然后用保鲜膜覆盖。 2. 每隔两天向培养装置中浇水（PH8、6.5），标准以淹没塑料筐、或泡沫板完全浮起 为最佳。 MS 培养基配置 按照母液比例，配制 1/2MS 盐培养基 1L，储存于冰箱中。 标准曲线制作 取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表加入各试剂。将各管快速摇动混匀后， 在沸水浴中煮 10 min ，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空白调零测定光密度， 以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线。 浇灌培养基 稀释出 3L 的 1/10 MS 培养基 PH 调整到 6.5，加入 15 个花盆中，作为对照组，连续 3 次，之后用同 PH 水浇灌。 稀释出 3L 的 1/10 MS 培养基，用滴管吸取盐酸，缓慢加入 MS 培养基中，不断用 PH 测试仪测培养基的 PH 值，将 PH 调整到 5，加入 15 个花盆中，作为实验组，连续 3 次，之 后用同 PH 水浇灌。 （注与王智康组合作，碱性条件由他们完成，对照组共享） 当第一片真叶出现时，开始以下步骤。 试 剂 管 号 0 1 2 3 4 5 100 μg/mL 葡萄糖溶液（ mL ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ mL ） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蒽酮试剂（ mL ） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 葡萄糖量（ μg ） 0 20 40 60 80 100
光合速率的测定 按照说明书操作,设定光合测定仪的参数,将测定仪光纤传感器接在第一片真叶片上 测定光合速率 叶绿素含量的测定 便携式叶绿素测定仪调零,将第一片真叶放在便携式叶绿素测定仪的夹口中,夹住叶片, 测定仪屏幕上即显示数字 用此方法测定对照组和实验组各三组平行样,记录实验数据。 含水量的测定 取实验组和对照组各8片真叶,各分为2份,剪成小块。分别称量4份真叶的鲜重并记 于120℃烘箱中烘考1~1.5h,然后称四份真叶的干重 根据含水量=(鲜重-干重)鲜重*100%计算,并记录实验组两份的平均值和对照组 两份的平均值 可溶性糖的测定: 稀硫酸配制:76mL浓硫酸稀释至LL(浓硫酸加到240mL水中,后定容)。 蒽酮试剂配制:lg蒽酮,溶解于上述IL稀硫酸中,装入细口瓶中临时保存 称取剪碎实验组和对照组干真叶各30mg,各分为3份,放入6支大试管中,每支大试 管加入15mL蒸馏水,在沸水浴中煮沸20min,取出冷却,过滤入100mL容量瓶中, 用蒸馏水冲洗残渣数次,定容至刻度。 2.样品测定:取待测样品提取液1.0m加蒽酮试剂5皿,同以上操作显色测定 光密度。每份重复3次 溶性糖含量(%)=从标准曲线査得糖的量(μg)×提取液体积(m1)×稀释倍数 /[测定用样品液的体积(m1)×样品重量(g)×106]×100% 【试验进度】 10.28-10.31种植小麦种子。(28日完成种子转移前步骤,31日转移种子) 113绘制标准曲线、配置MS培养基 11.5-11.10培养液浇灌(在种子长出三叶一心时) IL.12-12.10试验,待叶片展开开始测量,光合速率、叶绿素含量每2天测定一次,水溶性 糖含量、含水量每6天测定一次。(结束时间根据具体情况调整) 12.1l-12.13整理数据,分析讨论结果 参考文献:李清芳等PH值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响安徽农业科学2003,31(2):185-187
参考文献：李清芳等.PH 值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响[J].安徽农业科学,2003,31(2):185-187. 光合速率的测定： 按照说明书操作，设定光合测定仪的参数，将测定仪光纤传感器接在第一片真叶片上， 测定光合速率。 叶绿素含量的测定： 便携式叶绿素测定仪调零，将第一片真叶放在便携式叶绿素测定仪的夹口中，夹住叶片， 测定仪屏幕上即显示数字。 用此方法测定对照组和实验组各三组平行样，记录实验数据。 含水量的测定： 取实验组和对照组各 8 片真叶，各分为 2 份，剪成小块。分别称量 4 份真叶的鲜重并记 录。 于 120℃烘箱中烘考 1~1.5 h，然后称四份真叶的干重。 根据 含水量=（鲜重-干重）/鲜重*100% 计算，并记录实验组两份的平均值和对照组 两份的平均值。 可溶性糖的测定： 稀硫酸配制：760mL 浓硫酸稀释至 1L（浓硫酸加到 240mL 水中，后定容）。 蒽酮试剂配制：1g 蒽酮，溶解于上述 1L 稀硫酸中，装入细口瓶中临时保存 1. 称取剪碎实验组和对照组干真叶各 30 mg ，各分为 3 份，放入 6 支大试管中，每支大试 管加入 15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷却，过滤入 100 mL 容量瓶中， 用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2．样品测定：取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定 光密度。每份重复 3 次。 溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数 /[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100％ 【试验进度】 10.28-10.31 种植小麦种子。（28 日完成种子转移前步骤，31 日转移种子） 11.3 绘制标准曲线、配置 MS 培养基 11.5-11.10 培养液浇灌（在种子长出三叶一心时） 11.12-12.10 试验，待叶片展开开始测量，光合速率、叶绿素含量每 2 天测定一次，水溶性 糖含量、含水量每 6 天测定一次。（结束时间根据具体情况调整） 12.11-12.13 整理数据，分析讨论结果
【实验记录】 光合速率 日期 寸照组 实验组 平均叶长11 3|平均 参考文献:李清芳等PH值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响安徽农业科学2003,31(2):185-187
参考文献：李清芳等.PH 值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响[J].安徽农业科学,2003,31(2):185-187. 【实验记录】 光合速率 日期 对照组 实验组 叶长 1 2 3 平均 叶长 1 2 3 平均
叶绿素含量 日期 寸照组 实验组 平均叶长11 3|平均 参考文献:李清芳等PH值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响安徽农业科学2003,31(2):185-187
参考文献：李清芳等.PH 值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响[J].安徽农业科学,2003,31(2):185-187. 叶绿素含量 日期 对照组 实验组 叶长 1 2 3 平均 叶长 1 2 3 平均
含水量 日期 平均 可溶性糖含量 日期 实验组 平 参考文献:李清芳等PH值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响安徽农业科学2003,31(2):185-187
参考文献：李清芳等.PH 值对小麦种子萌发和幼苗生长代谢的影响[J].安徽农业科学,2003,31(2):185-187. 含水量 日期 对照组 实验组 1 2 平均 1 2 平均 可溶性糖含量 日期 对照组 实验组 1 2 3 平均 1 2 3 平均