金丝桃在阳生和荫生环境下光和碳同化差异的研究 顾婷婷10071920207刘雨婷10071920209 【摘要】 不同生境中同一植物的光合碳同化具有差异,为了分析这些差异,我们从叶 绿素及叶绿素a、b的含量、花青素含量、总糖含量、光合强度这四个生物指标 来分析青菜在阳生和荫生的环境下的差异。 【实验材料】 金丝桃 实验器材和试剂】 1.叶绿素a、b含量的测定:高级型分光光度计、台天平1只、剪刀1把 研钵1个、漏斗大小各一只,圆滤纸2张、小烧杯2只,10mL量筒1只 50m量筒1只、试管3支,试管架1个,铁架台和铁圈、滴管2支、80% 丙酮50mL、CaCO3少许、比色杯2只、吸水纸少许 2.花青素含量测定:分光光度计、电子天平、称量纸、恒温箱、剪刀、20mL 烧杯2只、10nL量筒1只、50nL量筒1只、大小漏斗各1只、圆滤纸 3张、试管4支、试管架1个、滴管3支、光径1cm比色杯3只、吸水 纸少许、0.1 mol/L HCL30mL、棉线少许 可溶性总糖的测定:分光光度计、80%℃恒温水浴、沸水浴、电子天平 称量纸、烘箱、离心机、10mL刻度离心管2支、20mL带塞试管10支、 玻棒2根、滴管5支、10m小烧杯2只、50mL烧杯2只、试管5支、试 管架、10mL量筒2只、大小漏斗各1只、圆滤纸2张、研钵1只、记号 笔、比色杯7只、蒽酮试剂50mL、80%乙醇50mL、20mg活性炭、葡萄糖 标准液5mL 4.光合强度的测定一一光合测定仪法: ECA-PB04025光合测定仪
金丝桃在阳生和荫生环境下光和碳同化差异的研究 顾婷婷 10071920207 刘雨婷 10071920209 【摘要】 不同生境中同一植物的光合碳同化具有差异，为了分析这些差异，我们从叶 绿素及叶绿素 a、b 的含量、花青素含量、总糖含量、光合强度这四个生物指标 来分析青菜在阳生和荫生的环境下的差异。 【实验材料】 金丝桃 【实验器材和试剂】 1. 叶绿素 a、b 含量的测定：高级型分光光度计、台天平 1 只、剪刀 1 把、 研钵 1 个、漏斗大小各一只，圆滤纸 2 张、小烧杯 2 只，10mL 量筒 1 只、 50mL 量筒 1 只、试管 3 支，试管架 1 个，铁架台和铁圈、滴管 2 支、80% 丙酮 50mL、CaCO3 少许、比色杯 2 只、吸水纸少许 2. 花青素含量测定：分光光度计、电子天平、称量纸、恒温箱、剪刀、20mL 烧杯 2 只、10mL 量筒 1 只、50mL 量筒 1 只、大小漏斗各 1 只、圆滤纸 3 张、试管 4 支、试管架 1 个、滴管 3 支、光径 1cm 比色杯 3 只、吸水 纸少许、0.1mol/L HCL 30mL、棉线少许 3. 可溶性总糖的测定：分光光度计、800 C 恒温水浴、沸水浴、电子天平、 称量纸、烘箱、离心机、10mL 刻度离心管 2 支、20mL 带塞试管 10 支、 玻棒 2 根、滴管 5 支、10mL 小烧杯 2 只、50mL 烧杯 2 只、试管 5 支、试 管架、10mL 量筒 2 只、大小漏斗各 1 只、圆滤纸 2 张、研钵 1 只、记号 笔、比色杯 7 只、蒽酮试剂 50mL、80%乙醇 50mL、20mg 活性炭、葡萄糖 标准液 5mL 4.光合强度的测定――光合测定仪法：ECA-PB04025光合测定仪
【实验方法】 从学校中采集阳生和荫生的金丝桃叶片,然后从四个方面测定各自的生物指 标一一叶绿素及叶绿素a、b的含量、花青素含量、总糖含量、光合强度四个方 面比较。可溶性总糖的测定用蒽酮法。光合强度的测定用光合测定仪法。 【实验进度安排】 10.21-10.26方案完善和材料准备 10.27 叶绿素a、b含量测定 可溶性总糖测定(11.9晚需使用烘箱,要过夜) l1.17 光和强度的测定;花青素含量测定 论文撰写 【实验步骤】 .叶绿素a、b含量测定 1.色素的提取:取新鲜叶片,剪去粗大的叶脉并剪成碎块,称取0.5g放 入研钵中加丙酮5皿L,少许碳酸钙和石英砂,研磨成匀浆并过滤,再用 适量80%丙酮洗涤硏钵,一并过滤,滤液用80%丙酮定容至20mL。 2.测定光密度:取上述色素提取液1皿L,加适量80%丙酮稀释后转入比色杯 中,以80%丙酮为对照,分别测定663nm、645nm处的光密度值。 3.按公式(3)、(4)、(5)分别计算色素提取液中叶绿素a、叶绿素b、 及叶绿素a+b的浓度。再根据稀释倍数分别计算每g鲜重叶片中色素的含 量 4.比较不同生境中植物的叶绿素a、b含量 .花青素含量测定 1.取材料lg,剪成2-3mm的碎片,置于烧杯中,加入0.1mol/LHCL10mL(视 花青素的含量而增减HCL用量),杯口用称量纸扎紧,以防水分蒸发。置 于32摄氏度恒温箱中,浸渍至少4h,而后过滤之,取滤液用分光光度计 在波长530nm下读取OD值,以0.1mol/LHCL为空白对照,用光径lcm 的比色杯。 2.当OD值为0.1时的花青素浓度称为1个单位,以比较花青素的相对含量。 将测得的OD值乘以10,用以代表花青素的相对浓度单位 3.比较不同生境中植物的花青素含量差别
【实验方法】 从学校中采集阳生和荫生的金丝桃叶片，然后从四个方面测定各自的生物指 标――叶绿素及叶绿素 a、b 的含量、花青素含量、总糖含量、光合强度四个方 面比较。可溶性总糖的测定用蒽酮法。光合强度的测定用光合测定仪法。 【实验进度安排】 10.21-10.26 方案完善和材料准备 10.27 叶绿素 a、b 含量测定 11.10 可溶性总糖测定（11.9 晚需使用烘箱，要过夜） 11.17 光和强度的测定；花青素含量测定 11.18-24 论文撰写 【实验步骤】 一．叶绿素 a、b 含量测定 1. 色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，称取 0.5 g 放 入研钵中加丙酮 5 mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆并过滤，再用 适量 80%丙酮洗涤研钵，一并过滤，滤液用 80%丙酮定容至 20 mL。 2. 测定光密度：取上述色素提取液 1 mL，加适量 80%丙酮稀释后转入比色杯 中，以 80%丙酮为对照，分别测定 663nm、645nm 处的光密度值。 3. 按公式（3）、（4）、（5）分别计算色素提取液中叶绿素 a、叶绿素 b、 及叶绿素 a+b 的浓度。再根据稀释倍数分别计算每 g 鲜重叶片中色素的含 量。 4．比较不同生境中植物的叶绿素 a、b 含量。 二．花青素含量测定 1. 取材料 1g，剪成 2-3 mm 的碎片，置于烧杯中，加入 0.1 mol/L HCL 10mL(视 花青素的含量而增减 HCL 用量)，杯口用称量纸扎紧，以防水分蒸发。置 于 32 摄氏度恒温箱中，浸渍至少 4h，而后过滤之，取滤液用分光光度计 在波长 530nm 下读取 OD 值，以 0.1 mol/L HCL 为空白对照，用光径 1cm 的比色杯。 2. 当 OD 值为 0.1 时的花青素浓度称为 1 个单位，以比较花青素的相对含量。 将测得的 OD 值乘以 10，用以代表花青素的相对浓度单位。 3. 比较不同生境中植物的花青素含量差别
可溶性总糖的测定 1.可溶性糖的提取:取叶片在110℃烘箱烘15min,然后调至70℃过夜。干 叶片磨碎后称取50mg样品倒λloml刻度离心管内加入4皿L80%乙醇,置 于80℃水浴种不断搅拌40min,离心,收集上清液,其残渣加2ml80%乙醇 重复提2次,合并上清液。在上清液中加10mg活性炭,80℃脱色30min, 80%乙醇定容至10ml,过虑后取滤液测定 2.绘制标准曲线:取20ml带塞试管,编号,按下表配制系列浓度的葡萄糖 标准液。然后在每支试管中加入5m1蒽酮试剂,混匀,盖上塞子,在沸水 浴中煮沸10min(水浴重沸后计时),取出,立即用水冷却至室温,在625nm 波长下,分别测量各管的OD值,用0号管调零。以0D值为纵坐标,葡萄 糖含量为横坐标,绘制标准曲线, 管号 4 葡萄糖「00.10.20 0.60. 标准液 体积/m1 80%乙醇|1.00.90.80.60.40.20 体积/ml 萄糖|0 10 100 3.测定:吸取上述糖提取液1ml,加入5m蒽酮试剂混合,用上述同样的方 法,在625n处测得OD值,以0号管调零。由标准曲线查得提取液中得 糖含量,然后根据每皿提取液含有5ng干样品中得糖,再计算样品中的 糖含量。 比较不同生境中植物的可溶性总糖含量 四.光合强度的测定一一便携式光合测定仪法: 1打开主机前后面板上的电源、气泵开关,打开前面板的开关ON 2.按照屏幕提示,按数字键选择—一中英文菜单、数据保存、用户设置、测 量方式(默认单叶闭路)等内容 3核对测量参数:系统容积为测量系统的空气容积,包括叶室、气管及内部 测量系统的容积,本系统标称为0.25L:间隔时间为系统内部自动采集的间隔时 间,如C3作物,设为3s:C4作物,设为2s:作物叶子在叶室夹紧后见光部分的 面积为测定面积,本机标准叶室的透光窗口面积为11cm2,为叶子夹满透光口的 默认值,未夹满时应输入实际值。 4测定状态界面操作:调零一一把仪器后面板上的旋钮切换到“调零”状
三．可溶性总糖的测定 1.可溶性糖的提取：取叶片在 110℃烘箱烘 15min，然后调至 70℃过夜。干 叶片磨碎后称取 50mg 样品倒入 10ml 刻度离心管内加入 4mL80％乙醇，置 于 80℃水浴种不断搅拌 40min，离心，收集上清液，其残渣加 2ml80%乙醇 重复提 2 次，合并上清液。在上清液中加 10mg 活性炭，80℃脱色 30min， 80％乙醇定容至 10ml，过虑后取滤液测定。 2.绘制标准曲线：取 20ml 带塞试管，编号，按下表配制系列浓度的葡萄糖 标准液。然后在每支试管中加入 5ml 蒽酮试剂，混匀，盖上塞子，在沸水 浴中煮沸 10min（水浴重沸后计时），取出，立即用水冷却至室温，在 625nm 波长下，分别测量各管的 OD 值，用 0 号管调零。以 OD 值为纵坐标，葡萄 糖含量为横坐标，绘制标准曲线。 管号 0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖 标准液 体积/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 80%乙醇 体积/ml 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 葡萄糖 含量 0 10 20 40 60 80 100 3．测定：吸取上述糖提取液 1ml，加入 5ml 蒽酮试剂混合，用上述同样的方 法，在 625nm 处测得 OD 值，以 0 号管调零。由标准曲线查得提取液中得 糖含量，然后根据每 ml 提取液含有 5mg 干样品中得糖，再计算样品中的 糖含量。 4．比较不同生境中植物的可溶性总糖含量。 四．光合强度的测定――便携式光合测定仪法： 1.打开主机前后面板上的电源、气泵开关，打开前面板的开关 ON。 2.按照屏幕提示，按数字键选择——中英文菜单、数据保存、用户设置、测 量方式（默认单叶闭路）等内容。 3.核对测量参数：系统容积为测量系统的空气容积，包括叶室、气管及内部 测量系统的容积，本系统标称为0.25L；间隔时间为系统内部自动采集的间隔时 间，如 C3作物，设为3s；C4作物，设为2s；作物叶子在叶室夹紧后见光部分的 面积为测定面积，本机标准叶室的透光窗口面积为11 cm2，为叶子夹满透光口的 默认值，未夹满时应输入实际值。 4.测定状态界面操作：调零——把仪器后面板上的旋钮切换到“调零”状
态,当屏幕显示的CO2浓度值大于0时,将调零旋钮逆时针方向调到001,为0时 顺时针调到o01,然后把旋钮切换到“测量”状态。每次重新开机都需调零. 5测量 打开叶室,手柄轻轻摆动,待CO2浓度稳定后开始操作。 夹紧叶片,把透光口对准阳光(获得PAR最大值),CO2值平稳下降时按 ENT键”进行数据采集,屏幕上第一行中间的采集时间显示0s,然后按设置开 始自动数据采集,直到采集完毕,自动进入下一级菜单 确认与修改——本次测量的叶面积数和样品名称,如需重输,按前面方法输 入,否则直接按“ENT键”进入下一级菜单;显示结果一一如不需要存储数据, 则按“ESC键”,否则按“ENT键”进入测量界面,进行多个样品的测量:结 果输出一一根据提示进入界面操作,记录数据 6关机:测量结束后,短时间关机按前面板上的“OFF”键,长时间关机要 关掉后面板上的电源开关
态，当屏幕显示的 CO2浓度值大于0时，将调零旋钮逆时针方向调到001，为0时， 顺时针调到001，然后把旋钮切换到“测量”状态。每次重新开机都需调零. 5.测量 打开叶室，手柄轻轻摆动，待 CO2浓度稳定后开始操作。 夹紧叶片，把透光口对准阳光（获得 PAR 最大值），CO2值平稳下降时按 “ENT 键”进行数据采集，屏幕上第一行中间的采集时间显示0s，然后按设置开 始自动数据采集，直到采集完毕，自动进入下一级菜单。 确认与修改——本次测量的叶面积数和样品名称，如需重输，按前面方法输 入，否则直接按“ENT 键”进入下一级菜单；显示结果——如不需要存储数据， 则按“ESC 键”，否则按“ENT 键”进入测量界面，进行多个样品的测量；结 果输出——根据提示进入界面操作，记录数据。 6.关机：测量结束后，短时间关机按前面板上的“OFF”键，长时间关机要 关掉后面板上的电源开关