组织培养报告 探究不同激素浓度配比与烟草叶片愈伤组织诱导的关系 姓名:郭林 学号:_10121910202 组员:覃治祯 日期:2014年11月13日
组织培养报告 探究不同激素浓度配比与烟草叶片愈伤组织诱导的关系 姓 名： 郭 林 学 号： 10121910202 组 员： 覃治祯 日 期：2014 年 11 月 13 日
目录 关键词 0背景… 1材料和方法 1.1实验材料 12组织培养环境 13试剂和器材 22233333 13.1实验试剂 1.3.2实验仪器 14实验方法 141培养基的配制… 14.2外植体前处理与接种 143观察产生愈伤组织 144愈伤组织的培养 2结果 21诱导率 555 22形态学… 3讨论与分析 3.1外植体的选择 32内源激素对愈伤组织诱导的关系… 3.3外源激素对愈伤组织诱导的影响 参考文献 附录
1 目录 摘要 ..................................................................................................................................................2 关键词 ..............................................................................................................................................2 0 背景 ...............................................................................................................................................2 1 材料和方法....................................................................................................................................3 1.1 实验材料.............................................................................................................................3 1.2 组织培养环境.....................................................................................................................3 1.3 试剂和器材.........................................................................................................................3 1.3.1 实验试剂..................................................................................................................3 1.3.2 实验仪器..................................................................................................................4 1.4 实验方法.............................................................................................................................4 1.4.1 培养基的配制..........................................................................................................4 1.4.2 外植体前处理与接种..............................................................................................4 1.4.3 观察产生愈伤组织..................................................................................................5 1.4.4 愈伤组织的培养......................................................................................................5 2 结果 ...............................................................................................................................................5 2.1 诱导率.................................................................................................................................5 2.2 形态学.................................................................................................................................5 3 讨论与分析....................................................................................................................................7 3.1 外植体的选择.....................................................................................................................7 3.2 内源激素对愈伤组织诱导的关系.....................................................................................8 3.3 外源激素对愈伤组织诱导的影响.....................................................................................9 参考文献.........................................................................................................................................10 附录 ................................................................................................................................................12
探究激素浓度配比与烟草叶片愈伤组织诱导的关系 摘要:本实验以MS培养基为基础培养,分别在MS+6BA1mgL+NAA02mg 和MS+6-BA0.mg+NAA0.5mg/L两种培养基上对烟草叶片进行愈伤组织的诱 导,探究相同烟草叶片不同激素6-BA和NAA浓度配比对烟草叶片愈伤组织诱 导的关系。结果表明在MS+6BA1mg/L+NAA02mg/L培养基上诱导出的愈伤 组织更利于叶的分化,且诱导出的愈伤组织的体积较大,在 MS+6- BAO. Img/L+NAA0.5mgL培养基上诱导出的愈伤组织更利于根的诱导, 且诱导出的愈伤组织的体积较小。 关键词:烟草,脱分化,愈伤组织,培养基,激素 0背景 我国大多数师范院校都普遍开设植物生理学或植物生物技术类实验课程,其 中植物组织培养技术作为一项基础技术成为必修实验。我校植物组织培养实验属 于《植物生理学实验》课的一部分,实验内容以诱导叶片脱分化形成愈伤组织为 主。实验部分仍然按照传统的教学环节进行培养基配制(3学时)和无菌操作(3 学时),着重实验技术的指导与学习。 根据植物细胞全能性的原理,特别是在生长素和细胞分裂素的作用下,植物 可以脱分化成愈伤组织。烟草( Nicotiana tabacun),茄科,多年生植物,是重 要的模式生物,因此也被我校选为植物组织培养的材料。众所周知,生长素在植 物体内分布是不均匀的,嫩叶中生长素分布较多,老叶中分布较少,在诱导植物 形成越伤组织的过程中,内源激素在一定程度上也起着重要的调节作用。除此之 外,选取的外源激素的浓度配比不同都会对愈伤组织有一定影响。胡伟、陈豫、 伍洋等人在对不同激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响中发现,在以萝卜直 根为实验材料,不同激素NAA、2,4-D、6-BA浓度配比对萝卜外植体形成愈伤 组织诱导率和质量有一定的影响。20世纪50年代以来,烟草愈伤组织的诱导 遵循 Skoog-MiUer分化模式:培养基内生长素和细胞分裂素的浓度和比值制约芽
2 探究激素浓度配比与烟草叶片愈伤组织诱导的关系 摘要：本实验以 MS 培养基为基础培养，分别在 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 和 MS+6-BA0.1mg/L+NAA 0.5mg/L 两种培养基上对烟草叶片进行愈伤组织的诱 导，探究相同烟草叶片不同激素 6-BA 和 NAA 浓度配比对烟草叶片愈伤组织诱 导的关系。结果表明在 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上诱导出的愈伤 组 织 更 利 于 叶的分化 ， 且诱导出的愈伤组织的体积较大， 在 MS+6-BA0.1mg/L+NAA 0.5mg/L 培养基上诱导出的愈伤组织更利于根的诱导， 且诱导出的愈伤组织的体积较小。 关键词：烟草，脱分化，愈伤组织，培养基，激素 0 背景 我国大多数师范院校都普遍开设植物生理学或植物生物技术类实验课程，其 中植物组织培养技术作为一项基础技术成为必修实验。我校植物组织培养实验属 于《植物生理学实验》课的一部分，实验内容以诱导叶片脱分化形成愈伤组织为 主。实验部分仍然按照传统的教学环节进行培养基配制（3 学时）和无菌操作（3 学时），着重实验技术的指导与学习。 根据植物细胞全能性的原理，特别是在生长素和细胞分裂素的作用下，植物 可以脱分化成愈伤组织。烟草（Nicotiana tabacum），茄科，多年生植物，是重 要的模式生物，因此也被我校选为植物组织培养的材料。众所周知，生长素在植 物体内分布是不均匀的，嫩叶中生长素分布较多，老叶中分布较少，在诱导植物 形成越伤组织的过程中，内源激素在一定程度上也起着重要的调节作用。除此之 外，选取的外源激素的浓度配比不同都会对愈伤组织有一定影响。胡伟、陈豫、 伍洋等人在对不同激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响中发现，在以萝卜直 根为实验材料，不同激素 NAA、2,4-D、6-BA 浓度配比对萝卜外植体形成愈伤 组织诱导率和质量有一定的影响。[1] 20 世纪 50 年代以来，烟草愈伤组织的诱导 遵循 Skoog-MiUer 分化模式：培养基内生长素和细胞分裂素的浓度和比值制约芽
和根的分化。这一原则被广泛地应用于植物组织培养实践。细胞分裂素的浓度低, 生长素的浓度高时易形成愈伤组织;反之,细胞分裂素浓度高,生长素的浓度低 时,有利于芽的分化。本课题实验选用烟草叶片,进行愈伤组织的诱导,并观察 其在不同激素浓度的培养基上的诱导情况 1材料和方法 1.1实验材料 烟草( Nicotiana tabacum)叶片 12组织培养环境 培养条件为28℃,暗处理一周后,进行24小时光照培养。如图1所示。 图表1烟草愈伤组织培养环境 Fig 1 Tobacco callus culture environment 13试剂和器材 13.1实验试剂 MS培养基(配方见附录)、琼脂、蔗糖、6-BA,NAA,75%酒精,0.1%HgCl2 等
3 和根的分化。这一原则被广泛地应用于植物组织培养实践。细胞分裂素的浓度低， 生长素的浓度高时易形成愈伤组织；反之，细胞分裂素浓度高，生长素的浓度低 时，有利于芽的分化。本课题实验选用烟草叶片，进行愈伤组织的诱导，并观察 其在不同激素浓度的培养基上的诱导情况。 1 材料和方法 1.1 实验材料 烟草（Nicotiana tabacum）叶片 1.2 组织培养环境 培养条件为 28℃，暗处理一周后，进行 24 小时光照培养。如图 1 所示。 图表 1 烟草愈伤组织培养环境 Fig.1 Tobacco callus culture environment. 1.3 试剂和器材 1.3.1 实验试剂 MS 培养基(配方见附录)、琼脂、蔗糖、6-BA，NAA，75%酒精，0.1%HgCl2 等
1.3.2实验仪器 烧杯、玻璃棒、量筒、容量瓶、漏斗、培养室、无菌室、超净工作台、髙压 灭菌锅、三角烧瓶、移液枪、棉线、培养皿、滤纸、解剖刀、剪刀、镊子、牛皮 纸、称量纸、天平、酒精灯、打火机、直尺 14实验方法 141培养基的配制 本实验选用MS培养基为基础培养基加不同配比的激素及浓度。激素配比如 表1所示。 表1两个实验组激素的浓度配比 6-BA NAA 第一组 Img/L 0. 2mg/L 第二组0mgL0.5mgL 14.11称取15g蔗糖溶解于100mL水,定容到500mL配制MS培养基,平均分 装到两个锥形瓶中。并按照表1所示加入激素配比 141.2调节PH至58,然后分别分装到5个装有04g琼脂的100mL锥形瓶中, 用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶口,棉线扎牢,然后将培养基和解剖工具、装 有滤纸的培养皿、蒸馏水一起在高压灭菌锅中121℃,20分钟灭菌备用 142 2外植体前处理与接种 14.21选取健壮的烟草叶片在自来水下将表面的灰尘及杂质冲洗掉,切成小快; 14.2.2在无菌室用75%酒精侵洗30s,然后用无菌水洗3-5次 14.2.3叶片放于0.1%升汞溶液中浸泡3-5min,然后无菌水洗3-5次,滤纸吸干; 14.2.4把叶片切成15cm*1.5cm小块,转移植物到培养基中进行培养,每瓶3 块
4 1.3.2 实验仪器 烧杯、玻璃棒、量筒、容量瓶、漏斗、培养室、无菌室、超净工作台、高压 灭菌锅、三角烧瓶、移液枪、棉线、培养皿、滤纸、解剖刀、剪刀、镊子、牛皮 纸、称量纸、天平、酒精灯、打火机、直尺。 1.4 实验方法 1.4.1 培养基的配制 本实验选用 MS 培养基为基础培养基加不同配比的激素及浓度。激素配比如 表 1 所示。 表 1 两个实验组激素的浓度配比 6-BA NAA 第一组 1mg/L 0.2mg/L 第二组 0.1mg/L 0.5mg/L 1.4.1.1 称取 15g 蔗糖溶解于 100mL 水，定容到 500mL 配制 MS 培养基，平均分 装到两个锥形瓶中。并按照表 1 所示加入激素配比。 1.4.1.2 调节 PH 至 5.8，然后分别分装到 5 个装有 0.4g 琼脂的 100mL 锥形瓶中， 用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶口，棉线扎牢，然后将培养基和解剖工具、装 有滤纸的培养皿、蒸馏水一起在高压灭菌锅中 121℃，20 分钟灭菌备用。 1.4.2 外植体前处理与接种 1.4.2.1 选取健壮的烟草叶片在自来水下将表面的灰尘及杂质冲洗掉，切成小快； 1.4.2.2 在无菌室用 75%酒精侵洗 30s，然后用无菌水洗 3-5 次； 1.4.2.3 叶片放于 0.1%升汞溶液中浸泡 3-5min，然后无菌水洗 3-5 次，滤纸吸干； 1.4.2.4 把叶片切成 1.5cm*1.5cm 小块，转移植物到培养基中进行培养，每瓶 3 块
143观察产生愈伤组织 观察愈伤组织的分化情况直至长出根和芽,比较不同激素条件下诱导的愈伤 组织的差别。 144愈伤组织的培养 将接种好的烟草愈伤组织放入恒温培养室中,温度为28℃,暗处理一周后, 进行24小时光照培养。对培养20天后的烟草愈伤组织诱导率进行统计学分析, 并对成形的愈伤组织进行观察,且从接种的第1天到第45天对烟草叶片的变化 情况进行观察记录 2结果 2.1诱导率 接种15天后对不同培养基上愈伤组织数量进行统计,从是否出现愈伤组织 的情况来看:MS+6- BAlme/L+NAA0.2mgL培养基和 MS+6-BA0lmg/L+NAA0.5mg/L培养基两种培养基上诱导出的愈伤组织的诱导 率相同,即愈伤组织的诱导率与激素的配比无直接关系。如表2所示。 表2两种培养基上的诱导率 MS+6-BA l mg/L +NAA 0.2mg/L MS+6-BAO. 1mg/L+NAAO.5mg/L 外植体个数 15 污染个数 0 愈伤组织数 污染率 0 诱导率(%) 注:诱导率=(产生愈伤组织的叶片数/接种的叶片数)×100% 22形态学 在两种培养基上接种的烟草叶片的变化历程为:接种后的第4天,MS+6-BA 1mg/L+NAA0.2mgL和在MS+6-BA0.mg/L+NAA0.5mg/两种培养基上的 叶片边缘的几个角都与培养基接触,其他部分脱离培养基呈现拱形;接种后的第 6-9天,MS+6- BA I mg/L+NAA02mg/L培养基上的烟草叶片,与培养基接触的
5 1.4.3 观察产生愈伤组织 观察愈伤组织的分化情况直至长出根和芽，比较不同激素条件下诱导的愈伤 组织的差别。 1.4.4 愈伤组织的培养 将接种好的烟草愈伤组织放入恒温培养室中，温度为 28℃，暗处理一周后， 进行 24 小时光照培养。对培养 20 天后的烟草愈伤组织诱导率进行统计学分析， 并对成形的愈伤组织进行观察，且从接种的第 1 天到第 45 天对烟草叶片的变化 情况进行观察记录。 2 结果 2.1 诱导率 接种 15 天后对不同培养基上愈伤组织数量进行统计，从是否出现愈伤组织 的 情 况 来 看 ： MS+6-BA1mg/L+NAA0.2mg/L 培 养 基 和 MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L 培养基两种培养基上诱导出的愈伤组织的诱导 率相同，即愈伤组织的诱导率与激素的配比无直接关系。如表 2 所示。 表 2 两种培养基上的诱导率 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2mg/L MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L 外植体个数 污染个数 15 0 15 0 愈伤组织数 污染率 15 0 15 0 诱导率（%） 100 100 注：诱导率=（产生愈伤组织的叶片数/接种的叶片数）×100% 2.2 形态学 在两种培养基上接种的烟草叶片的变化历程为：接种后的第 4 天，MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 和在 MS+6-BA 0.1 mg/L +NAA 0.5mg/L 两种培养基上的 叶片边缘的几个角都与培养基接触，其他部分脱离培养基呈现拱形；接种后的第 6-9 天，MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上的烟草叶片，与培养基接触的
部分长出一小点的愈伤组织,接种后的第9-11天,接种在MS+6-BA0.1mg/ +NAAO5mgL培养基上的烟草叶片,与培养基接触的几个角出现愈伤组织;愈 伤组织逐渐从边缘像中间生长,最终几乎整个烟草叶片都长成愈伤组织。在接种 后的第16天,MS+6-BA1mgL+NAA02mgL培养基上的愈伤组织上出现绿色 组织,MS+6BAO.1mg/L+NAA0.5mg培养基上的愈伤组织长白色的毛状组织 第20天后,在MS+6-BA1mg/L+NAA02mg/L培养基上可明显分辨出愈伤组 织分化出的叶片,0.1mg/L+NAA0.5mg培养基上愈伤组织分化出的根。如图 2所示。 A 图2愈伤组织的生长历程 但在MS+6- BAlme/L+NAA02mg/L培养基上形成愈伤组织的时间快,约为 6-9天,且形成愈伤组织的体积较大,在MS+6- BAO. Img/L+NAA0.5mgL形成愈 伤组织的时间较慢,约为9-11天,且愈伤组织的体积较小。如图3所示 b 图3不同培养基上愈伤组织大小比较 注:图为接种第25天后的照片.a为MS+6-BA0.1mg/+NA0.5mg/L培养基上生长的愈 伤组织,b为MS+6-BA1mg/L+NAA0.2mg/L培养基上生长的愈伤组织
6 部分长出一小点的愈伤组织，接种后的第 9-11 天，接种在 MS+6-BA 0.1 mg/L +NAA 0.5mg/L 培养基上的烟草叶片，与培养基接触的几个角出现愈伤组织；愈 伤组织逐渐从边缘像中间生长，最终几乎整个烟草叶片都长成愈伤组织。在接种 后的第 16 天，MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上的愈伤组织上出现绿色 组织，MS+6-BA 0.1 mg/L +NAA 0.5mg/L 培养基上的愈伤组织长白色的毛状组织； 第 20 天后，在 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上可明显分辨出愈伤组 织分化出的叶片，0.1 mg/L +NAA 0.5mg/L 培养基上愈伤组织分化出的根。如图 2 所示。 图 2 愈伤组织的生长历程 但在MS+6-BA1mg/L+NAA0.2mg/L培养基上形成愈伤组织的时间快，约为 6-9天，且形成愈伤组织的体积较大，在MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L形成愈 伤组织的时间较慢，约为9-11天，且愈伤组织的体积较小。如图3所示。 a b 图 3 不同培养基上愈伤组织大小比较 注：图为接种第 25 天后的照片.a 为 MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L 培养基上生长的愈 伤组织，b 为 MS+6-BA1mg/L+NAA0.2mg/L 培养基上生长的愈伤组织
在MS+6-BA1mg/L+NAA02mg培养基上诱导的烟草叶片的愈伤组织以 长叶为主,生长一段时间后,有少量的根状组织出现,且组织块较大。在MS+6-BA 0.1mg/L+NAA0.5mg/L培养基上诱导出的烟草叶片的愈伤组织以长根为主,生 长一段时间后又少量的绿色组织出现。如图4所示。 图4接种30天后愈伤组织 注:图a为MS+6-BA1mg/L+NAA0.2ng/L培养基上诱导的烟草叶片的愈伤组 织,以长叶为主,有少量的根,图b为M+6-BA0.1mg/L+NA0.5mg/L培养基上诱 导的烟草叶片的愈伤组织,根发到,可见少量绿色组织。 3讨论与分析 3.1外植体的选择 硏究表明,外植体的选择对愈伤组织的诱导有很大影响。王晓娟等人在对大 花萱草不同外植体诱导愈伤组织的比较研究中发现,外植体的取材读愈伤组织的 诱导有影响。内源激素对胚性细胞及体胚的形成有重要影响。凹范小峰,杨颖丽, 郭晓强,刘秀丽在对乌拉尔甘草不同外植体愈伤组织的诱导及影响因子硏究中发 现,不同外植体对乌拉干草愈伤组织的诱导有一定影响。因总的来说,含有大量 分生组织的植物器官是理想的材料。烟草幼嫩叶片含有大量活跃分裂的细胞,很 适合愈伤组织的诱导。实验中,虽然取材于同一批烟草,但由于烟草叶片的取材 位置不一样,所以不同实验组在相同培养基上愈伤组织的诱导不尽相同。如图5 所示
7 在 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上诱导的烟草叶片的愈伤组织以 长叶为主，生长一段时间后，有少量的根状组织出现，且组织块较大。在 MS+6-BA 0.1 mg/L +NAA 0.5mg/L 培养基上诱导出的烟草叶片的愈伤组织以长根为主，生 长一段时间后又少量的绿色组织出现。如图 4 所示。 a b 图 4 接种 30 天后愈伤组织 注：图 a 为 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上诱导的烟草叶片的愈伤组 织，以长叶为主，有少量的根，图 b 为 MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L 培养基上诱 导的烟草叶片的愈伤组织，根发到，可见少量绿色组织。 3 讨论与分析 3.1 外植体的选择 研究表明，外植体的选择对愈伤组织的诱导有很大影响。王晓娟等人在对大 花萱草不同外植体诱导愈伤组织的比较研究中发现，外植体的取材读愈伤组织的 诱导有影响。内源激素对胚性细胞及体胚的形成有重要影响。[2]范小峰，杨颖丽， 郭晓强，刘秀丽在对乌拉尔甘草不同外植体愈伤组织的诱导及影响因子研究中发 现，不同外植体对乌拉干草愈伤组织的诱导有一定影响。[3]总的来说，含有大量 分生组织的植物器官是理想的材料。烟草幼嫩叶片含有大量活跃分裂的细胞，很 适合愈伤组织的诱导。实验中，虽然取材于同一批烟草，但由于烟草叶片的取材 位置不一样，所以不同实验组在相同培养基上愈伤组织的诱导不尽相同。如图 5 所示
图5不同实验组在相同培养基上诱导情况 注:图为接种44后拍摄的不同实验组在同一时间的MS+6-BA1mg/L+NA0.2mg/L 培养基上接种的烟草叶片的愈伤组织的诱导剂分化情况 32内源激素对愈伤组织诱导的关系 植物在生长发育的过程中,内源激素对愈伤组织的生理状态有着极其重要的 影响,其种类、含量极其协调平衡是关键。内源激素对胚性细胞及体胚的形成有 重要影响。5.6刘清等人在研究内源激素对水稻的研究中发现,IAA含量过 高不利用愈伤组织的诱导和生长,Z对愈伤组织诱导的启动有决定性作用,如果 外植体中的Z含量太低,即使有较高的IAA含量也诱导不出愈伤组织;过高的 ABA对愈伤组织的诱导不利。内源激素一样对其有很大影响。顶芽和侧芽之 间有着密切的关系,顶芽生长旺盛时,侧芽会受到抑制。如果由于某种原因顶芽 生长受到抑制,则侧芽迅速生长。这种顶芽优先生长,侧芽受到抑制的现象叫做 顶端优势。在 Wertheim sj的硏究中发现苹果的冠果产生的可扩散性生长素明显 高于侧位果的生长素的量。國 Gruber J把番茄作为实验材料,证明先期发育的器 官可以通过其向外运输的生长素抑制后发育的器官中生长素的向外运输,从而 抑制它的生长。1朱庆生在文献提出,生长素在植物体内由上到下有一个浓度 梯度,顶芽可以较快得到生长而侧芽生长受抑制
8 图 5 不同实验组在相同培养基上诱导情况 注：图为接种 44 后拍摄的不同实验组在同一时间的 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上接种的烟草叶片的愈伤组织的诱导剂分化情况。 3.2 内源激素对愈伤组织诱导的关系 植物在生长发育的过程中，内源激素对愈伤组织的生理状态有着极其重要的 影响，其种类、含量极其协调平衡是关键。内源激素对胚性细胞及体胚的形成有 重要影响。[4，5，6，7]刘清等人在研究内源激素对水稻的研究中发现，IAA 含量过 高不利用愈伤组织的诱导和生长，Z 对愈伤组织诱导的启动有决定性作用，如果 外植体中的 Z 含量太低，即使有较高的 IAA 含量也诱导不出愈伤组织；过高的 ABA 对愈伤组织的诱导不利。[8]内源激素一样对其有很大影响。顶芽和侧芽之 间有着密切的关系，顶芽生长旺盛时，侧芽会受到抑制。如果由于某种原因顶芽 生长受到抑制，则侧芽迅速生长。这种顶芽优先生长，侧芽受到抑制的现象叫做 顶端优势。在 Wertheim S.J 的研究中发现苹果的冠果产生的可扩散性生长素明显 高于侧位果的生长素的量。[9]Gruber J 把番茄作为实验材料, 证明先期发育的器 官可以通过其向外运输的生长素抑制后发育的器官中生长素的向外运输, 从而 抑制它的生长。[10]朱庆生在文献提出，生长素在植物体内由上到下有一个浓度 梯度，顶芽可以较快得到生长而侧芽生长受抑制。[11]
33外源激素对愈伤组织诱导的影响 外源激素对植物组织培养有着重要的影响。胡伟、陈豫、伍洋等人在对不同 激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响中发现,在以萝卜直根为实验材料,不 同激素NAA、2,4-D、6-BA浓度配比对萝卜外植体形成愈伤组织诱导率和质量 有一定的影响。高瑛用不同的外源激素对黄芩无菌短枝组织培养,发现不同的 外源激素对黄芩愈伤诱导有很大影响。2阮氏钏等人研究发现不同外源激素及 其浓度对青钱柳愈伤组织不定芽的发生有着重大影响。葛淑芳、章艺等人在 研究外源水杨酸对烟草叶片代谢的影响的硏究中发现,喷施适宜浓度的SA能够 显著提高植株叶绿素ab含量l4。20世纪50年代以来,烟草愈伤组织的诱导遵 循 Skoog- MiTer分化模式:培养基内生长素和细胞分裂素的浓度和比值制约芽和 根的分化。这一原则被广泛地应用于植物组织培养实践。细胞分裂素的浓度低, 生长素的浓度高时易形成愈伤组织;反之,细胞分裂素浓度高,生长素的浓度低 时,有利于芽的分化 本实验目的是探究烟草叶片在以MS培养基,都含有NAA、6-BA两种激素, 但激素浓度配比不一样,分别为MS+6BA1mg/L+NAA0.2mg/L和 MS+6-BAO1mg/L+NAA05mg/L培养基。本实验中也发现MS+6-BA1mg/L +NAA0.2mg培养基上诱导出的愈伤组织更有利于叶的分,在 MS+6- BAO. Img/L+NAAO.5mg/L培养基上诱导出的愈伤组织更有利于根的分化。 如图6所示 图6.两种培养基上诱导的愈伤组织的分化情况 注:图a为MS+6-BA1mg/L+NAA0.2mg/L培养基上诱导出的愈伤组织的再分 化情况,图b为MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mgL培养基上诱导出的愈伤组织 的再分化情况
9 3.3 外源激素对愈伤组织诱导的影响 外源激素对植物组织培养有着重要的影响。胡伟、陈豫、伍洋等人在对不同 激素浓度配比对萝卜愈伤组织形成的影响中发现，在以萝卜直根为实验材料，不 同激素 NAA、2,4-D、6-BA 浓度配比对萝卜外植体形成愈伤组织诱导率和质量 有一定的影响。[1]高瑛用不同的外源激素对黄芩无菌短枝组织培养，发现不同的 外源激素对黄芩愈伤诱导有很大影响。[12]阮氏钏等人研究发现不同外源激素及 其浓度对青钱柳愈伤组织不定芽的发生有着重大影响。[13] 葛淑芳、章艺等人在 研究外源水杨酸对烟草叶片代谢的影响的研究中发现，喷施适宜浓度的 SA 能够 显著提高植株叶绿素 a,b 含量[14]。20 世纪 50 年代以来，烟草愈伤组织的诱导遵 循 Skoog-MiUer 分化模式：培养基内生长素和细胞分裂素的浓度和比值制约芽和 根的分化。这一原则被广泛地应用于植物组织培养实践。细胞分裂素的浓度低， 生长素的浓度高时易形成愈伤组织；反之，细胞分裂素浓度高，生长素的浓度低 时，有利于芽的分化。 本实验目的是探究烟草叶片在以 MS 培养基，都含有 NAA、6-BA 两种激素， 但激素浓度配比不一样，分别为 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 和 MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L 培养基。本实验中也发现 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培 养 基 上 诱 导 出 的 愈 伤 组 织 更 有 利 于 叶 的 分 ， 在 MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L 培养基上诱导出的愈伤组织更有利于根的分化。 如图 6 所示。 a b 图 6.两种培养基上诱导的愈伤组织的分化情况 注：图 a 为 MS+6-BA 1 mg/L +NAA 0.2 mg/L 培养基上诱导出的愈伤组织的再分 化情况，图 b 为 MS+6-BA 0.1 mg/L +NAA 0.5 mg/L 培养基上诱导出的愈伤组织 的再分化情况
