酶联免疫吸附测定法 陈登仕 16307130153 技术简介 酶联免疫吸附测定法( enzyme- linked immunosorbent assay, ELISA)是一种免疫测定 技术。该方法利用固相酶免疫法( solid- phase enzyme immunoassay,EIA),使用一个或 对抗体检测液体样品中是否存在抗原(通常是蛋白质)。 ELISA已被用于医学和植物病理学的 诊断工具,以及各种行业的质量控制检查 其核心方法为:将样品中的抗原附着在一个表面,然后一种特殊的抗体(与一种酶相连) 作用于该表面使得其能与抗原结合。添加一种含有这种酶底物的物质,随后的反应产生可检 测的信号(例如颜色变化) ELISA分为直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法。 strate Substrate Substrate ubstrate Secondary Antibody Antigen ary Anti body Capture Antibody DIRECT ELISA DIRECT ELISA SANDWICH ELISA COMPETITIVE ELISA 技术原理 酶联免疫吸附法( ELISA是一种利用特定抗体(或抗原)在样本中捕获目标抗原(或抗体) 的方法,以及利用酶与底物发生反应进行目标分子检测/定量的方法 测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗 原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与 固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反 应而呈颜色 在 ELISA使用的各种抗原-抗体组合中,一定含有包括酶标记的抗原或抗体,酶活性通 过比色法进行测定。具体来讲其是用一种在酶的作用下会改变颜色的底物来测量的,加入此 种底物后,对产物的光吸收进行测量,并将此测量值转化为酶活性值
酶联免疫吸附测定法 陈登仕 16307130153 一、技术简介 酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种免疫测定 技术。该方法利用固相酶免疫法（solid-phase enzyme immunoassay, EIA），使用一个或一 对抗体检测液体样品中是否存在抗原(通常是蛋白质)。ELISA 已被用于医学和植物病理学的 诊断工具，以及各种行业的质量控制检查。 其核心方法为：将样品中的抗原附着在一个表面，然后一种特殊的抗体（与一种酶相连） 作用于该表面使得其能与抗原结合。添加一种含有这种酶底物的物质，随后的反应产生可检 测的信号（例如颜色变化）。 ELISA 分为直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法。 二、技术原理： 酶联免疫吸附法(ELISA)是一种利用特定抗体(或抗原)在样本中捕获目标抗原(或抗体) 的方法，以及利用酶与底物发生反应进行目标分子检测/定量的方法。 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗 原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与 固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反 应而呈颜色。 在 ELISA 使用的各种抗原-抗体组合中，一定含有包括酶标记的抗原或抗体，酶活性通 过比色法进行测定。具体来讲其是用一种在酶的作用下会改变颜色的底物来测量的，加入此 种底物后，对产物的光吸收进行测量，并将此测量值转化为酶活性值
ELISA: An example of an assay using a 96-well plate. The yellow color indicates that the target protein is present The higher degree of the color, the higher concentration of the target protein. 总的来说, ELISA将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来,是一种既 特异又敏感的检测方法。 下面对四种方法分别进行介绍 (一)直接法 Target protein d Ermyme-labeled antibody Enzyme reaction 9 Antigon lovel 将目标蛋白(或目标抗体)固定在微板孔表面,与目标蛋白(或目标抗体的特定抗原)的酶 标记抗体结合。加入酶底物并经洗涤后,测定微孔板结合酶的活性。 (二)间接法 Substrate YAntibody mTarget protein Enzyme-labeled antibody Enzyme reaction 将目标蛋白固定在微板孔表面,与目标蛋白(初级抗体)的抗体进行结合,加入针对初级 抗体的二级抗体(酶标记)。加入酶底物并经洗涤后,测定微孔板结合酶的活性 (三)双抗体夹心法
总的来说，ELISA 将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，是一种既 特异又敏感的检测方法。 下面对四种方法分别进行介绍 （一）直接法 将目标蛋白(或目标抗体)固定在微板孔表面，与目标蛋白(或目标抗体的特定抗原)的酶 标记抗体结合。加入酶底物并经洗涤后，测定微孔板结合酶的活性。 （二）间接法 将目标蛋白固定在微板孔表面，与目标蛋白(初级抗体)的抗体进行结合，加入针对初级 抗体的二级抗体（酶标记）。加入酶底物并经洗涤后，测定微孔板结合酶的活性。 （三）双抗体夹心法
YYYY Antibody Target protein Enzyme-labeled antibody Enzyme reaction → Antigen level 将目标蛋白的抗体固定在微板孔表面,首先与目标蛋白结合,然后与另一个目标蛋白特 异性抗体结合(酶标记)。加入酶底物并经洗涤后,测定微孔板结合酶的活性。固定化抗体 (橙色)和酶标抗体(绿色)必须识别目标蛋白的不同表位。 (四)竞争法 Substrate ples including low levels YYY→x YYYY Substrate of the tarmac uding high levels YYYY→→ 0-Antigen level YAntibody m Target protein Enzyme-labeled antigen Enzyme reaction 将目标蛋白对应的抗体固定在微板孔表面,与含有目标蛋白和己知数量的酶标记目标蛋 白的样品结合。反应结束后,测定微孔板结合酶的活性。 当样品中抗原水平较高时,抗体结合酶标记抗原水平较低,颜色较浅。相反,当抗体结 合酶标记抗原水平较低时,抗体结合酶标记抗原水平较高,颜色较深。上图和右图展示了样 品中吸收和抗原水平之间的关系。 三、技术应用 由于 ELISA可用于评估样本中是否存在抗原或抗体,因此它是测定血清抗体浓度的重 要工具(如艾滋病毒检测、西尼罗河病毒检测)。它还在食品工业中应用于检测潜在的食物过 敏原,以及用作血清学血清学检测腹腔疾病。 ELISA也可用于毒理学中作为某些药物的快速 预筛选 由于其高灵敏度, ELISA是第一个广泛用于HIV检测的检测方法。而丹尼斯·比德韦尔 博士和阿利斯特·沃勒博士创造了用来检测各种疾病的 ELISA测试,如疟疾 除此之外, ELISA还可以用于: 肺结核中结核分枝杄菌抗体的检测 粪便中轮状病毒的检测 血清中乙肝标志物的检测 粪便中大肠杆菌肠毒素的检测
将目标蛋白的抗体固定在微板孔表面，首先与目标蛋白结合，然后与另一个目标蛋白特 异性抗体结合（酶标记）。加入酶底物并经洗涤后，测定微孔板结合酶的活性。固定化抗体 (橙色)和酶标抗体(绿色)必须识别目标蛋白的不同表位。 （四）竞争法 将目标蛋白对应的抗体固定在微板孔表面，与含有目标蛋白和已知数量的酶标记目标蛋 白的样品结合。反应结束后，测定微孔板结合酶的活性。 当样品中抗原水平较高时，抗体结合酶标记抗原水平较低，颜色较浅。相反，当抗体结 合酶标记抗原水平较低时，抗体结合酶标记抗原水平较高，颜色较深。上图和右图展示了样 品中吸收和抗原水平之间的关系。 三、技术应用 由于 ELISA 可用于评估样本中是否存在抗原或抗体，因此它是测定血清抗体浓度的重 要工具(如艾滋病毒检测、西尼罗河病毒检测)。它还在食品工业中应用于检测潜在的食物过 敏原，以及用作血清学血清学检测腹腔疾病。ELISA 也可用于毒理学中作为某些药物的快速 预筛选。 由于其高灵敏度，ELISA 是第一个广泛用于 HIV 检测的检测方法。而丹尼斯·比德韦尔 博士和阿利斯特·沃勒博士创造了用来检测各种疾病的 ELISA 测试，如疟疾。 除此之外，ELISA 还可以用于： ⚫ 肺结核中结核分枝杆菌抗体的检测 ⚫ 粪便中轮状病毒的检测 ⚫ 血清中乙肝标志物的检测 ⚫ 粪便中大肠杆菌肠毒素的检测
血液样本中HIV抗体的检测 四、技术优缺点: (一) ELISA优缺点 优点:可量化指标、适合大量操作、灵敏度高、既能定性亦能定量。 缺点:结果好坏取决于包被基质,固相载体的包被难以达到各批次之间一致,因此重复性不 好,准确性差,自动化程度低,并且不是所有的抗体都能用此方法检测。 (二)四种方法的优缺点: 直接法 优点:操作简单 缺点:试验中一抗需要用酶标记,但由于不是每种抗体都适合做标记,因此其费用较高 间接法 ●优点:二抗可以加强信号,而且有多种选择可以做不同的测定分析,而不加酶标记的一 级抗体能保留其最多的免疫反应性 缺点:交互反应发生的机率较高。 双抗体夹心法 优点:高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化 缺点:抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位 竞争法: 优点:可适用比较不纯的样本 缺点:整体的敏感性和专一性都较差 五、参考材料: https://en.wikipediaorg/wiki/elisa ttp: //ruo. mbl co ip/bio/e/support/method/elisa. html https://www.sbhs scIences. co https:/baike.baiducom/item/%e9%85%b6%e8%681%94%e5%85%68d%e7%696%ab%e5%90%b8%e9%9 9%84%E8%AF‰95%9%AA%8C/7213287 http://eclub.biomart.cnc /node/135
⚫ 血液样本中 HIV 抗体的检测 四、技术优缺点： （一）ELISA 优缺点： 优点：可量化指标、适合大量操作、灵敏度高、既能定性亦能定量。 缺点：结果好坏取决于包被基质，固相载体的包被难以达到各批次之间一致，因此重复性不 好，准确性差，自动化程度低，并且不是所有的抗体都能用此方法检测。 （二）四种方法的优缺点： 直接法： ⚫ 优点：操作简单， ⚫ 缺点：试验中一抗需要用酶标记，但由于不是每种抗体都适合做标记，因此其费用较高。 间接法： ⚫ 优点：二抗可以加强信号，而且有多种选择可以做不同的测定分析，而不加酶标记的一 级抗体能保留其最多的免疫反应性 ⚫ 缺点：交互反应发生的机率较高。 双抗体夹心法： ⚫ 优点：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化 ⚫ 缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位 竞争法： ⚫ 优点：可适用比较不纯的样本。 ⚫ 缺点：整体的敏感性和专一性都较差。 五、参考材料： https://en.wikipedia.org/wiki/ELISA http://ruo.mbl.co.jp/bio/e/support/method/elisa.html https://www.sbhsciences.com/elisa.asp https://baike.baidu.com/item/%E9%85%B6%E8%81%94%E5%85%8D%E7%96%AB%E5%90%B8%E9%9 9%84%E8%AF%95%E9%AA%8C/7213287 http://eclub.biomart.cn/caigou/node/135