单克隆抗体技术 16301010010孙玉栋 技术原理:要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞,但这 种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,应用细胞杂交 技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一,得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细 胞继承两种亲代细胞的特性,它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞 能在体外培养增殖永存的特性,用这种来源于单个融合细胞培养増殖的细胞群,可制备抗 种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 原决定 动物 →● 0( 多,,合观化地 8::8 技术应用:1.检验医学诊断试剂 作为检验医学实验室的诊断试剂,单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优 点,广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且 单克隆抗体的应用,很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前,应用单克隆抗体制作 的商品化试剂盒广泛应用于: ①病原微生物抗原、抗体的检测 ②肿瘤抗原的检测 ③免疫细胞及其亚群的的检测 ④激素测定 ⑤细胞因子的测定。 单克隆抗体对抗原的识别,与多克隆抗体有很大的不同。不同试剂盒因使用的单克隆 抗体不同,识别抗原的位点不同,导致检测结果有一定差异。因此,标准化问题还需要进 一步研究
单克隆抗体技术 16301010010 孙玉栋 技术原理：要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆 B 淋巴细胞，但这 种 B 淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交 技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细 胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有 B 淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞 能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗 一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 技术应用：1．检验医学诊断试剂 作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优 点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且 单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作 的商品化试剂盒广泛应用于： ①病原微生物抗原、抗体的检测； ②肿瘤抗原的检测； ③免疫细胞及其亚群的的检测； ④激素测定； ⑤细胞因子的测定。 单克隆抗体对抗原的识别，与多克隆抗体有很大的不同。不同试剂盒因使用的单克隆 抗体不同，识别抗原的位点不同，导致检测结果有一定差异。因此，标准化问题还需要进 一步研究
2.蛋白质的提纯 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质(如 Speharose2B、4B、6B等)上,并制备成层析柱。当样品流经层析柱时,待分离的抗原 可与固相的单克隆抗体发生特异性结合,其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后 改变洗脱液的离子强度或pH,欲分离的抗原与抗体解离,收集洗脱液便可得到欲纯化的抗 原 3.肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术 将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接,利用单克隆抗体的导 向作用,将药物或放疗物质携带至靶器官,直接杀伤靶细胞,称为肿瘤导向治疗。另外 将放射性标记物与单克隆抗体连接,注入患者体内可进行放射免疫显像,协助肿瘤的诊断。 目前单克隆抗体主要为鼠源性抗体,异种动物血清可引起人体过敏反应。因此,制备人-人 单克隆抗体或人源化抗体更为重要,但此方面仍未取得明显进展。 优点与局限性:1.单克隆抗体的优点 (1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代,只要不发生细胞株的基因突变,就可以不 断地生产高特异性、高均一性的抗体 (2)可以用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的、均一的抗体 (3)由于可能得到无限量”"的均一性抗体,所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析 方法,如RMA和ELSA等。 (4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能,可用于体内的放射免疫显像和免疫 导向治疗。 2.单克隆抗体的局限性 (1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体 不能进行沉淀和凝集反应,所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成 (2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。 (3)制备技术复杂,而且费时费工,所以单克隆抗体的价格也较高
2．蛋白质的提纯 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如 Speharose 2B、4B、6B 等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原 可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后， 改变洗脱液的离子强度或 pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗 原。 3． 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术 将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利用单克隆抗体的导 向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗。另外， 将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。 目前单克隆抗体主要为鼠源性抗体，异种动物血清可引起人体过敏反应。因此，制备人-人 单克隆抗体或人源化抗体更为重要，但此方面仍未取得明显进展。 优点与局限性：折叠 1．单克隆抗体的优点 (1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不 断地生产高特异性、高均一性的抗体。 (2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。 (3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析 方法，如 IRMA 和 ELISA 等。 (4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫 导向治疗。 折叠 2．单克隆抗体的局限性 (1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体 不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。 (2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。 (3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高