基因工程制药 刘亚飞15301030031 、技术原理 1.获得目的基因 方法: HHEYX ①酶切法直接分离目B 扩增100万倍以上 A加倍 的基因(利用限制性 22c双螺旋 核酸内切酶) 粪 ction of EcoF ②PCR直接扩增目的 酶切法 PCR的过程 ③文库法分离目的基因④化学合成目的基因 2组建重组质粒 启动子 想入基因 载体:将外源基因导入受体细胞,并能自我复制和 表达载体 增殖的工具。一般采用质粒作为载体(载体上有启 终止子 复制原点 动子,终止子,标记基因,目的基因等) 抗生素抗性基因 质粒:一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA 之外,并具有自我复制能力的很小的双链DNA分子, 表达载体模式图 其上有一个至多个限制酶切位点,供外源基因差入其中。进入受体细胞后能进行 自我复制或整合到染色体DNA上随染色体DNA进行同步复制。质粒上也有特殊 的标记基因供重组DNA的鉴定和选择。 3.构建基因工程菌 寻找合适的受体细胞,将重组质粒导入其中。 通常有大肠杆菌表达系统、枯草杆菌表达系统、酵母表达系统等
基因工程制药 刘亚飞 15301030031 一、技术原理 1.获得目的基因 方法： ①酶切法直接分离目 的基因（利用限制性 核酸内切酶） ②PCR 直接扩增目的 基因 酶切法 PCR 的过程 ③文库法分离目的基因 ④化学合成目的基因 2.组建重组质粒 载体：将外源基因导入受体细胞，并能自我复制和 增殖的工具。一般采用质粒作为载体（载体上有启 动子，终止子，标记基因，目的基因等）。 质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核 DNA 之外，并具有自我复制能力的很小的双链 DNA 分子， 表达载体模式图 其上有一个至多个限制酶切位点，供外源基因差入其中。进入受体细胞后能进行 自我复制或整合到染色体 DNA 上随染色体 DNA 进行同步复制。质粒上也有特殊 的标记基因供重组 DNA 的鉴定和选择。 3.构建基因工程菌 寻找合适的受体细胞，将重组质粒导入其中。 通常有大肠杆菌表达系统、枯草杆菌表达系统、酵母表达系统等
4.培养工程菌 方法:①补料分批培养②连续培养③透析培养④固定化培养⑤髙密度培养等 5.产物分离纯化 工程细菌所表达出的蛋白质组成 发酵液 成分复杂,且目的产物在初始物料 细胞分离 胞内产物 胞外产物→浓缩→初步纯化→高度纯化一产品 中含量很低,稳定性差,纯度底。 细胞破碎 为了获得高纯度、可供药用有生物国液分离 活性的蛋白质,必须对基因工程药自`垂片一液一粉步化一度纯一制料产 变性除膜 物进行一定的分离和纯化 复性→浓缩→初步纯化→高度纯化→制剂→产品 产物分离纯化步骤如图。 、技术应用 产物分离纯化步骤 基因工程胰岛素,基因工程干扰素,人造血液,白细胞介素。乙肝疫苗 四、技术的优缺点 优点:1.工程菌生长迅速,容易控制,适于大规模工业化生产 2.产量大,且降低生产成本 缺点:转基因生物的安全性有待确定,如食品安全,生物安全,环境安全等
4.培养工程菌 方法：①补料分批培养②连续培养③透析培养④固定化培养⑤高密度培养等 5.产物分离纯化 工程细菌所表达出的蛋白质组成 成分复杂，且目的产物在初始物料 中含量很低，稳定性差，纯度底。 为了获得高纯度、可供药用有生物 活性的蛋白质，必须对基因工程药 物进行一定的分离和纯化。 产物分离纯化步骤如图。 三、技术应用 产物分离纯化步骤 基因工程胰岛素，基因工程干扰素，人造血液，白细胞介素。乙肝疫苗。 四、技术的优缺点 优点：1.工程菌生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。 2.产量大，且降低生产成本。 缺点：转基因生物的安全性有待确定，如食品安全，生物安全，环境安全等