基因诊断技术 曾颜16300680224 技术原理 互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链,即能够进行杂交。这种 结合是特异的,即严格按照碱基互补的原则进行,它不仅能在DNA和DNA 之间进行,也能在DNA和RNA之间进行。因此,当用一段已知基因的核酸 序列做出探针,与变性后的单链基因组DNA接触时,如果两者的碱基完全 配对,它们即互补地结合成双链,从而表明被测基因组DNA中含有已知的 基因序列。基因诊断以基因的结构异常或表达异常为切入点,在疾病出现 之前作出诊断。 晾特凝际 长DNA片段 基因X 凝胶电泳 DNA片段 短DNA片段 越团组DNA DNA片段 (1)碱变性 (2移 放射性标记的 RNA我DNA片 ∵ 敢肝绝虞 段(探针 (1)磷纤瘪 x戴胺片6(2洗擦 片 探针:基因探针( probe)就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷 酸序列,它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA 本身,也可以是由之转录而来的RNA。 1543 994 v 533bp bbioo. com 377 DNA分子探针 探针检测基因 二、技术应用
基因诊断技术 曾颜 16300680224 一、 技术原理 互补的 DNA 单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。这种 结合是特异的，即严格按照碱基互补的原则进行，它不仅能在 DNA 和 DNA 之间进行，也能在 DNA 和 RNA 之间进行。因此，当用一段已知基因的核酸 序列做出探针，与变性后的单链基因组 DNA 接触时，如果两者的碱基完全 配对，它们即互补地结合成双链，从而表明被测基因组 DNA 中含有已知的 基因序列。基因诊断以基因的结构异常或表达异常为切入点，在疾病出现 之前作出诊断。 探针：基因探针（probe）就是一段与目的基因或 DNA 互补的特异核苷 酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是 DNA 本身，也可以是由之转录而来的 RNA。 二、 技术应用 DNA 分子探针 探针检测基因
1、应用于感染性疾病 基因诊断具有髙度的敏感性和特异性,且简便、快捷,因此在病毒、 细菌、支原体、衣原体、立克次体及寄生虫感染诊断中得到了广泛应用。 实例:结核杆菌的检测:结核病是长期以来严重威胁人类,特别是发 展中国家人民生命健康的常见病,传统的实验室诊断依赖痰涂片镜检和结 核杆菌的培养与鉴定,但阳性率不髙,所需时间长。目前应用PCR技术建 立诊断方法,敏感度可达到少至100个细菌的水平,且应用针对在结核分 枝杄菌中拷贝存在的特异性重复序列引物,既使菌株发生变异,也能准确 检出。 2、应用于遗传病 基因诊断本身是在分子遗传学的基础上发展起来的,在遗传病的诊断 方面成绩最为突出,也最有发展前途,对许多已明确致病基因及其突变类 型的遗传病诊断效果良好。即使不明确致病基因,也可利用遗传标志进行 连锁分析来诊断某些遗传病。 实例: 耳聋基因诊断流程 挂号就诊 是是都根力量 果一并该需基正实重 新生用有-3名新生聋 基园断有助优生优 查器新 发送报告 一围况下,器果奋有2一 失下的场垃指都、病人也号 我们活烈性持 系中值取 福告来中心复 3、应用于肿瘤学 肿瘤是一类多基因病,其发展过程复杂,临床表现多样,涉及到多个 基因的变化并与多种因素有关,因而相对于感染性疾病及单基因遗传病来 说,肿瘤的基因诊断难度更大得多。但肿瘤的发生和发展从根本上离不开 基因的变化,所以基因诊断在肿瘤疾病中也会有广阔的前景。其重要表现 有以下几方面。(1)肿瘤的早期诊断及鉴别诊断。(2)肿瘤的分级、分期 及预后的判断。(3)微小病灶、转移灶及血中残留癌细胞的识别检测。(4) 肿瘤治疗效果的评价。 三、技术优缺点(与传统诊断方法相比) 优点 ①针对性强,特异性高
1、 应用于感染性疾病 基因诊断具有高度的敏感性和特异性，且简便、快捷，因此在病毒、 细菌、支原体、衣原体、立克次体及寄生虫感染诊断中得到了广泛应用。 实例：结核杆菌的检测：结核病是长期以来严重威胁人类，特别是发 展中国家人民生命健康的常见病，传统的实验室诊断依赖痰涂片镜检和结 核杆菌的培养与鉴定，但阳性率不高，所需时间长。目前应用 PCR 技术建 立诊断方法，敏感度可达到少至 100 个细菌的水平，且应用针对在结核分 枝杆菌中拷贝存在的特异性重复序列引物，既使菌株发生变异，也能准确 检出。 2、 应用于遗传病 基因诊断本身是在分子遗传学的基础上发展起来的，在遗传病的诊断 方面成绩最为突出，也最有发展前途，对许多已明确致病基因及其突变类 型的遗传病诊断效果良好。即使不明确致病基因，也可利用遗传标志进行 连锁分析来诊断某些遗传病。 实例： 3、 应用于肿瘤学 肿瘤是一类多基因病，其发展过程复杂，临床表现多样，涉及到多个 基因的变化并与多种因素有关，因而相对于感染性疾病及单基因遗传病来 说，肿瘤的基因诊断难度更大得多。但肿瘤的发生和发展从根本上离不开 基因的变化，所以基因诊断在肿瘤疾病中也会有广阔的前景。其重要表现 有以下几方面。（1）肿瘤的早期诊断及鉴别诊断。（2）肿瘤的分级、分期 及预后的判断。（3）微小病灶、转移灶及血中残留癌细胞的识别检测。（4） 肿瘤治疗效果的评价。 三、 技术优缺点（与传统诊断方法相比） 优点 ○1 针对性强，特异性高
②标本用量少,来源广,灵敏度高。病人的血液、尿液和羊水脱落细胞 以及头发等均可以用来检测,由于基因体外扩增技术的发展,待分析的标本只需 微量,目标基因只需pg水平 ③发现早,为疾病的预防和早期及时治疗赢得了时间 缺点 价格较高,适用人群不广泛 2纵观临床应用现状,除了病原体的PCR检测得到了一定程度的应用外 其它领域的应用非常有限,即使在条件较好的三级甲等医院开展的项目也不多
○2 标本用量少，来源广，灵敏度高。病人的血液、尿液和羊水脱落细胞 以及头发等均可以用来检测，由于基因体外扩增技术的发展，待分析的标本只需 微量，目标基因只需 pg 水平。 ○3 发现早，为疾病的预防和早期及时治疗赢得了时间 缺点 □1 价格较高，适用人群不广泛 □2 纵观临床应用现状，除了病原体的 PCR 检测得到了一定程度的应用外， 其它领域的应用非常有限，即使在条件较好的三级甲等医院开展的项目也不多