B活力单位(U)与比活力 vU=速度单位 例如 0每小时催化1克底物 每小时催化1m某浓度溶液 0每分钟催化1ug底物 酶每产品质量评价中常使用比活力 单位质量酶产品中酶活力称比活力。 u/mg醢蛋白m醢蛋白
B.活力单位(U)与比活力 U＝速度单位 例如 每小时催化1克底物 每小时催化1ml某浓度溶液 每分钟催化1ug底物 酶产品质量评价中常使用比活力 单位质量酶产品中酶活力称比活力。 u/mg酶蛋白 u/ml酶蛋白
酶活力测定实例 脂肪肪摩甘油+脂肪酸 首先确定反应条件20℃、pH=7,底物浓度6g/(过 量),加入2mg固体脂肪酶 第二确定活力单位如每小时催化1克底物1u=1gh 第三测篁反应初速度作产物甘油随时间增加的曲线, 量出反应初速度值,换算为脂肪的消耗速度如 8g/h 第四换算活力 8g/h/Igh=8u 第五让算比活8u/2mg酶蛋白=4u/mg酶蛋白
酶活力测定实例 首先 确定反应条件 20℃、pH=7，底物浓度 6g/l（过 量），加入2mg固体脂肪酶 第二 确定活力单位 如每小时催化1克底物 1u= 1g/h 第三 测算反应初速度 作产物甘油随时间增加的曲线， 量出反应初速度值 ，换算为脂肪的消耗速度 如 8g/h 第四 换算活力 8g/h / 1g/h=8u 第五 计算比活 8u/2mg酶蛋白=4u/mg酶蛋白 脂肪 脂肪酶 甘油 + 脂肪酸
32影响酶促反应速度的因素(作单因子考虑) A酶浓度(或质量) B底物浓度 提问:何种关系? 答案:正比 机理—中间产物 反 k1 k3 应 E+SES→P+E 初 k2 速 度 条件:他们的浓度分别 为[E]、[S]、[ES]、[P] 底物浓度S总酶浓度[E 反应初速度随底物浓度变化曲线
3.2 影响酶促反应速度的因素（作单因子考虑） V 0 底 物 浓 度 [S] 反 应 初 速 度 反应初速度随底物浓度变化曲线 A.酶浓度（或质量） 提问：何种关系？ 答案：正比 B.底物浓度 机理——中间产物 E + S ES P + E k1 k2 k3 条件：他们的浓度分别 为[E]、[S]、[ES]、[P] 总酶浓度 [Et]
(1)整理()可得:(k2+k)[ES]=k[E][S] 移出[ES k k?+k 故[ES]= [E[S]另設 m則 EsS)≈E 定義K k2+k3 k K Vo ESI k3EJS] 由ES (2)由(I得[ES]=,故 即 (V) K K 導入v (3)由(I)得[E=[E-[ES],而[E可靚為[E],故: 分解围E [E]=[E]-[ES]代入(V)得 k,([E]-[ESD[S] k, [EJ[S]-k, [ES]S] K (4)把(mv=k[ES]及(Ⅳv)Vmx=k[E]代入得 轉換得 Vmx及 Vmax [S]-v. [S] →vKm=Vmax[S]-v[S]移項 K vo Km+ vo [S] max [S] (VT) 提出v Vmax [S] 整理(w集中v即得MM公式:v。= Km+[s]
稳态时 反应速度 V=k3[ES] ES的生成速度=消耗速度 k1[E][S]=k2[ES] + k3[ES] E的质量平衡方程 [E]=[Et] - [ES] E + S ES P + E k1 k2 k3 V= V[S] Km + [S] 米氏方程 V=Vmax=k3[ES]max=k3[Et] Km= k2 + k3 k1 米氏常数
VISI 反应初速度 底物浓度|S 反应初速度随底物浓度变化曲线 b当S很大时 最大反应速率 vSsS=0级反应 混合级 a当S很小时 V=VS/Km一级反应 (米氏常数) 米氏曲线
a.当[S]很小时 V=V[S]/Km 一级反应 V 0 底 物 浓 度 [S] 反 应 初 速 度 反应初速度随底物浓度变化曲线 V V V/2 0 Km （米氏常数） [S] 最 大 反 应 速 率 米氏曲线 V= V[S] Km + [S] b.当[S]很大时 V=V[S]/[S]=V 0 级反应 混合级
Km=? VISI 若V=v/2 Km+s [S Km= 2 Km+ [s Km+ S
Km=? Km = [S] V= V[S] Km + [S] 若 V＝V/2 V 2 ＝ V [S] Km + [S] 1 Km + [S] = 2[S]
c米氏常数Km的意义 1酶的特性常数 与酶及底物种类有关,与酶浓度无关,可以鉴定酶。 酶 底物 Km(mmo l/L) 脲酶 尿素 25 溶菌酶 6-N-乙酰葡萄糖胺0.006 葡萄糖6-磷酸脱6-磷酸-葡萄糖 0.058 氢酶 匚苯甲酰珞氨酰胶25 胰凝乳蛋白酶甲酰酪氨酰胺 12.0 乙酰酪氨酰胺 32.0
c.米氏常数Km的意义 1.酶的特性常数 与酶及底物种类有关，与酶浓度无关，可以鉴定酶。 酶 底物 Km(mmol/L) 脲酶 尿素 25 溶菌酶 6-N-乙酰葡萄糖胺 0.006 葡萄糖-6-磷酸脱 氢酶 6-磷酸-葡萄糖 0.058 胰凝乳蛋白酶 苯甲酰酪氨酰胺 2.5 甲酰酪氨酰胺 12.0 乙酰酪氨酰胺 32.0
2大小表示酶对底物的亲和力大小 当k2>>k3时(通常都是这样) k2+ Km kI Km≈k2(分离能力)/k1(亲合能力) k1 k3 E+S ES P+E k2 Km越小,亲和力越强。底物浓度很 小时,反应速度就能达到很大,性能优,代谢中这 类酶更为重要
Km= k2 + k3 k1 Km≈k2（分离能力）/k1（亲合能力） E + S ES P + E k1 k2 k3 Km越小，亲和力越强。底物浓度很 小时，反应速度就能达到很大，性能优，代谢中这 类酶更为重要。 当k2>>k3时（通常都是这样） 2.大小表示酶对底物的亲和力大小
VSI dKm与V的求取 Km+s 米氏方程变化 Km 1 S 以1N~1/S作图 (Y=aX+b) 纵截距=■ 横截距=-■/m -1/Km
d.Km与V的求取 米氏方程变化 1/V 1/V -1/Km 0 1/[S] 1 V = Km V · 1 [S] + 1 V V= V[S] Km + [S] 以1/V ~ 1/[S]作图 ( Y=aX+b ) 纵截距=1/V 横截距=-1/Km
C.pH的影响 盂施 最适pH时的醯 Enzyme Optimum pl活力最大 胃蛋白酶 1.5 提问:pH对酶活力 胰蛋白酶 7.7 产生影响的原因? 过氧化氢酶 7.6 精氨酸酶 9.7 答案:影响弱酸碱 延胡索酸酶 7.8 基团解离,影响契 RNA酶 7.8 合,影响催化 酶最适pH,因酶而异,大多数酶最适pH在7Q左右
C. pH的影响 最适pH时的酶 活力最大 胃蛋 白酶 木瓜蛋白酶 胆碱酯酶 胰蛋白酶 酶最适pH，因酶而异，大多数酶最适pH在7.0左右。 相 对 酶 活 力 过氧化氢酶 胃蛋白酶 胰蛋白酶 精氨酸酶 延胡索酸酶 RNA酶 提问：pH对酶活力 产生影响的原因？ 答案：影响弱酸碱 基团解离 ，影响契 合，影响催化