B活力单位U)与比活力 U=速度单位 例如 ?每小时催化1克底物 每小时催化1m某浓度溶液 ?每分钟催化1ug底物 酶每产品质量评价中常使用比活力 单位质量酶产品中酶活力称比活力。 umg酶蛋自 um酶蛋白 酶活力测定实例 首先确定反应条件20°C、pH7,底物浓度6g(过量),加入2mg固体脂 肪酶 第二确定活力单位如每小时催化1克底物1u=1gh 第三测算反应初速度作产物甘油随时间增加的曲线,量出反应初速度值, 换算为脂肪的消耗谏度如8g/h 第四换算活力 8g/h/ 1g/h=8u 第五计算比活 8u/2mg酶蛋白=4u/mg酶蛋白 32影响酶促反应速度的因素(作单因子考虑) 稳态时 反应速度 V=keSI ES的生成速度-消耗速度 kIEJSk2ES+ keSI E的质量平衡方程 EFEt-ES a当S很小时 V=vS/Km一级反应
B.活力单位(U)与比活力 U＝速度单位 例如 ? 每小时催化1克底物 每小时催化1ml某浓度溶液 ? 每分钟催化1ug底物 酶产品质量评价中常使用比活力 单位质量酶产品中酶活力称比活力。 u/mg酶蛋白 u/ml酶蛋白 酶活力测定实例 首先 确定反应条件 20℃、pH=7，底物浓度 6g/l（过量），加入2mg固体脂 肪酶 第二 确定活力单位 如每小时催化1克底物 1u= 1g/h 第三 测算反应初速度 作产物甘油随时间增加的曲线，量出反应初速度值 ， 换算为脂肪的消耗速度 如 8g/h 第四 换算活力 8g/h / 1g/h=8u 第五 计算比活 8u/2mg酶蛋白=4u/mg酶蛋白 3.2 影响酶促反应速度的因素（作单因子考虑） 稳态时 反应速度 V=k3[ES] ES的生成速度=消耗速度 k1[E][S]=k2[ES] + k3[ES] E的质量平衡方程 [E]=[Et] - [ES] a.当[S]很小时 V=V[S]/Km 一级反应
Km=? Km= s ?c米氏常数Km的意义 ?1酶的特性常数 ?与酶及底物种类有关,与酶浓度无关,可以鉴定酶 dKm与v的求取 米氏方程变化 C.pH的影响 最适pH时的酶活力最大 D.温度的影响 温度—分子热运动的剧烈程度 提问:上图反映出温度如何影响酶活力? 酶若制成干粉,可放置在窒温下保存,而处于溶液状态时必须放在冰 箱里保存。 提问:原因何在? 答案:低温无水使微生物降解醃活性低 E.激活剂的影响 提问:什么是激活剂? 激活——活性提高 剂物质 能提高(酶)活性的物质——(酶)激活剂 a无机离子 阳离子K、Ca2、Nat、Mg2+、Zn2等 阴离子CI、Br等 提问:机理?
Km=? Km = [S] ? c.米氏常数Km的意义 ? 1.酶的特性常数 ? 与酶及底物种类有关，与酶浓度无关，可以鉴定酶。 d.Km与V的求取 米氏方程变化 C. pH的影响 最适pH时的酶活力最大 D. 温度的影响 温度——分子热运动的剧烈程度 提问：上图反映出温度如何影响酶活力？ 酶若制成干粉，可放置在室温下保存，而处于溶液状态时必须放在冰 箱里保存。 提问：原因何在？ 答案：低温无水使微生物降解酶活性低 E. 激活剂的影响 提问：什么是激活剂？ 激活——活性提高 剂——物质 能提高（酶）活性的物质—— （酶）激活剂 a.无机离子 阳离子 K+、Ca2+、Na+、Mg 2+、Zn2+等 阴离子 Cl -、Br -等 提问：机理？
答案:稳定改变中心、提高亲和力 1与底物结合,使底物形状更适合酶的活性中心 2与别构酶的别构中心结合,使酶的构象变化,更适合与底物的结合, b中等大小的有机分子 1某些还原剂 如c、半胱氨酸、氰化物 机理:还原酶活性中心的二硫键 S-→SH+-SH 参与催化 2EDTA(乙二胺四乙酸) 提问:机理? 答案:解除重金属抑制 某些激酶 无活性的酶 F.抑制剂的影响 使酶活性降低的物质。 抑制作用分可逆抑制与不可逆抑制 可逆的依据 能否B 用透析、超滤等物理方法除去抑制剂,使酶复活 a不可逆抑制(否) 提问:原因? 答案:活性区与之以牢固的共价键相连; 均为 剧毒物质 重金属、有机磷、有机汞、有机砷、氰化物、青霉素、毒鼠强等等。 有机磷农药(敌百虫、沙林) 如何紧急救治呢?
答案：稳定改变中心、提高亲和力。 1.与底物结合，使底物形状更适合酶的活性中心 2.与别构酶的别构中心结合，使酶的构象变化，更适合与底物的结合。 b.中等大小的有机分子 1.某些还原剂 如Vc、半胱氨酸、氰化物 机理：还原酶活性中心的二硫键 -S-S- →-SH + -SH 参与催化 2.EDTA（乙二胺四乙酸） 提问：机理？ 答案：解除重金属抑制 c.某些激酶 无活性的酶 F.抑制剂的影响 使酶活性降低的物质。 抑制作用分可逆抑制与不可逆抑制。 可逆的依据： 能否用透析、超滤等物理方法除去抑制剂，使酶复活 a.不可逆抑制(否) 提问：原因？ 答案：活性区与之以牢固的共价键相连； 均为剧毒物质 重金属、有机磷、有机汞、有机砷、氰化物、青霉素、毒鼠强等等。 有机磷农药（敌百虫、沙林） 如何紧急救治呢？
排毒 洗胃、喝鸡蛋清牛奶 导泄、利尿 用560%硫酸镁40~80ml导泻 血液灌流(“大换血”) 血液透析(清除游离状态毒物 找特效药 b可逆抑制(是·非共价键结合) 分竟争性与非竟争性两类。“”抑制剂 1竞争性抑制 竟争性抑制剂(Ⅰ)与底物与酶活性中心结合的机会均等,=0 生物碱麻醉一竞争性替代 生物碱吗啡、海洛因、可卡因、尼古丁 麻醉机理 利用竞争性抑制是药物设计主要思路 磺胺类药 抗菌机理(与对氨基苯甲酸是结构类似物) 竞争性抑制细菌叶酸(第六章)形成,进而抑制细 菌繁殖 人通过食物中的叶酸直接补充,对人无毒害。 2非竞争性抑制 K≈K 提问:V、Km、Vmax?
排毒 洗胃、喝鸡蛋清牛奶 导泄、利尿 用560%硫酸镁40～80ml导泻、输液利尿 血液灌流（“大换血”） 血液透析（清除游离状态毒物） 找特效药 b.可逆抑制(是－非共价键结合) 分竞争性与非竞争性两类。“I”抑制剂 1.竞争性抑制 竞争性——抑制剂（I）与底物与酶活性中心结合的机会均等 Ki ’＝0 生物碱麻醉—竞争性替代 生物碱—吗啡、海洛因、可卡因、尼古丁 麻醉机理 利用竞争性抑制是药物设计主要思路 磺胺类药 抗菌机理（与对氨基苯甲酸是结构类似物） —竞争性抑制细菌叶酸（第六章）形成，进而抑制细 菌繁殖 人通过食物中的叶酸直接补充，对人无毒害。 2.非竞争性抑制 Ki ’≈ Ki 提问：V、Km、Vmax?
(1)下降,发生抑制 (2)Km不变,酶与底物亲和力不受影响 (3)Vmax减小(一部分酶始终失活) 重金属如Cu2、Agt、Hg2+等 G别构效应物(别构酶的活性调节物) 别构蛋白质在实现生物功能时构象发生变化,活力改变的现象。 别构酶具有别构现象的酶 S曲线:正协同<81开关)V↑随[S】f加快 b当其他别构物参与调节时 1.整体上产生激活、抑制现象 第四节的制备 41生物提取 蛋白质提取,采用保持活性的分离法 提问:有哪些方法? 答案:盐析、透析、色谱、电泳等 通常方法 离心分离→硫酸铵盐析→透析→凝胶过澽亠离子交换 4.2酶工程 酶工程酶制剂在工业上的大规模生产及应用; 分普通酶工程、化学酶工程、生物酶工程 普通单纯生物提取 例如 淀粉酶经化学修饰连接上葡聚糖后,热稳定性增加,使用寿命延长了30倍; 酶的固定化 B生物酶工程 利用DNA重组技术改造和生产酶的工程方法。 提问:优点?
（1）V下降，发生抑制 （2）Km不变，酶与底物亲和力不受影响 （3）Vmax减小（一部分酶始终失活） 重金属 如Cu2+、Ag+、Hg2+等 G.别构效应物（别构酶的活性调节物） 别构——蛋白质在实现生物功能时构象发生变化，活力改变的现象。 别构酶——具有别构现象的酶 S曲线：正协同＜81(开关)—V↑随［S］↑而加快 b.当其他别构物参与调节时 1. 整体上产生激活、抑制现象 第四节 酶的制备 4.1 生物提取 蛋白质提取，采用保持活性的分离法 提问：有哪些方法？ 答案：盐析、透析、色谱、电泳等 通常方法： 离心分离→硫酸铵盐析→透析→凝胶过滤→离子交换 4.2 酶工程 酶工程——酶制剂在工业上的大规模生产及应用； 分普通酶工程、化学酶工程、生物酶工程 普通—单纯生物提取 例如 淀粉酶经化学修饰连接上葡聚糖后，热稳定性增加，使用寿命延长了30倍； 酶的固定化 B.生物酶工程 利用DNA重组技术改造和生产酶的工程方法。 提问：优点？
答案:不受天然来源限制,迅速,且易于诱变改造
答案：不受天然来源限制，迅速，且易于诱变改造
