本科实验课程教学大纲（生命科学学院生物技术专业）二〇〇七年三月-1
- 1 - 本科实验课程教学大纲 （生命科学学院生物技术专业） 二〇〇七年三月
目录3.1、《细胞生物学》实验教学大纲2、《生物化学》实验教学大纲9.143、《微生物学》实验教学大纲4、《遗传学》实验教学大纲19-5、《分子生物学》实验教学大纲24-6、《植物生物学》实验教学大纲27-7、《动物生物学》实验教学大纲318、《现代生物技术》实验教学大纲349、《基因工程》实验教学大纲37-10、《细胞工程学》实验教学大纲40-11、《现代仪器分析与实验技术》实验教学大纲45-12、《酶工程》实验教学大纲50-13、《发酵工程》实验教学大纲5314、《天然产物化学》实验教学大纲57-59-15、《蛋白质工程》实验教学大纲16、《植物组织培养课程》实验教学大纲62--2 -
- 2 - 目 录 1、《细胞生物学》实验教学大纲 - 3 - 2、《生物化学》实验教学大纲 - 9 - 3、《微生物学》实验教学大纲 - - 14 - 4、《遗传学》实验教学大纲- - 19 - 5、《分子生物学》实验教学大纲 - - 24 - 6、《植物生物学》实验教学大纲 - - 27 - 7、《动物生物学》实验教学大纲 - - 31 - 8、《现代生物技术》实验教学大纲- - 34 - 9、《基因工程》实验教学大纲 - - 37 - 10、《细胞工程学》实验教学大纲- - 40 - 11、《现代仪器分析与实验技术》实验教学大纲- - 45 - 12、《酶工程》实验教学大纲- - 50 - 13、《发酵工程》实验教学大纲 - - 53 - 14、《天然产物化学》实验教学大纲- - 57 - 15、《蛋白质工程》实验教学大纲- - 59 - 16、《植物组织培养课程》实验教学大纲- - 62 -
1、《细胞生物学》实验教学大纲【课程名称】细胞生物学（CellBiology）【课程编码】SWZB0140【适用专业】生物技术【课时】36学时【学分】1.0【教学（实验）时间安排】课时实验名称实验类型备注序号31验证普通和特殊光学显微镜的原理及其使用演示+指导32验证演示+指导细胞凝集反应33细胞膜的渗透性验证演示+指导34验证细胞融合35验证演示+指导线粒体的超活染色与观察验证36演示+指导叶绿体的分离与荧光观察3验证演示+指导动物细胞骨架的观察38验证演示+指导动物组织细胞的裂解与全细胞蛋白提取、浓度测定39验证类坏死的处理及死、活细胞鉴别演示+指导3综合10细胞器的分离与观察演示+指导116动物细胞培养综合合计36另外，根据学生兴趣，实验条件、时间等，可适当选作以下实验，以扩大实验课程的覆盖面。1、巨噬细胞吞噬现象的观察2、DNA的Feulgen染色法3、酸性磷酸酶的显示方法4、染色体核仁组成区的银染色法5、动物细胞染色体标本制备与观察6、细胞电泳7、MAT法检测药物对细胞增殖及存活的影响【教学（实验）内容要点】实验1、普通和特殊光学显微镜的原理及其使用1、实验目的要求（1）通过实验课了解和掌握光学显微镜各部分的结构和功能，并掌握正确使用光学显微镜的方法。（2）掌握暗视场显微镜的原理，构造及其使用方法（3）掌握相差显微镜的原理，构造及其使用方法（4）倒置显微镜的原理，构造及其使用方法2、实验主要内容(1)光镜的构造(2）普通、暗视野、相差和倒置显微镜的使用练习（3）暗视场光挡的制作方法-3-
- 3 - 1、《细胞生物学》实验教学大纲 【课程名称】 细胞生物学（Cell Biology） 【课程编码】 SWZB0140 【适用专业】 生物技术 【课 时】 36 学时 【学 分】 1.0 【教学（实验）时间安排】 序号 实验名称 实验类型 课时 备注 1 普通和特殊光学显微镜的原理及其使用 验证 3 演示+指导 2 细胞凝集反应 验证 3 演示+指导 3 细胞膜的渗透性 验证 3 演示+指导 4 细胞融合 验证 3 5 线粒体的超活染色与观察 验证 3 演示+指导 6 叶绿体的分离与荧光观察 验证 3 演示+指导 7 动物细胞骨架的观察 验证 3 演示+指导 8 动物组织细胞的裂解与全细胞蛋白提取、 浓度测定 验证 3 演示+指导 9 类坏死的处理及死、活细胞鉴别 验证 3 演示+指导 10 细胞器的分离与观察 综合 3 演示+指导 11 动物细胞培养 综合 6 合计 36 另外，根据学生兴趣，实验条件、时间等，可适当选作以下实验，以扩大实验课程的覆盖面。 1、巨噬细胞吞噬现象的观察 2、DNA 的 Feulgen 染色法 3、酸性磷酸酶的显示方法 4、染色体核仁组成区的银染色法 5、动物细胞染色体标本制备与观察 6、细胞电泳 7、MAT 法检测药物对细胞增殖及存活的影响 【教学（实验）内容要点】 实验 1、普通和特殊光学显微镜的原理及其使用 1、实验目的要求 ⑴ 通过实验课了解和掌握光学显微镜各部分的结构和功能，并掌握正确使用光学显微镜的方法。 ⑵ 掌握暗视场显微镜的原理，构造及其使用方法 ⑶ 掌握相差显微镜的原理，构造及其使用方法 ⑷ 倒置显微镜的原理，构造及其使用方法 2、实验主要内容 ⑴ 光镜的构造 ⑵ 普通、暗视野、相差和倒置显微镜的使用练习 ⑶ 暗视场光挡的制作方法
(4）暗视场光挡加放的位置及其调整（5）生物标本（装片、涂片、切片等）制备方法3、实验仪器设备(1）普通光学显微镜(2）暗视场显微镜(3）相差显微镜（4）倒置显微镜(5）盖玻片，载玻片(6）黑纸、剪子、圆规、直尺、胶水、记号笔、标签纸(7）洋葱，细胞标本实验2、细胞凝集反应1、实验目的要求（1）掌握血细胞凝集原理2、实验主要内容(1）提取土豆凝集素(2）光镜观察血球凝集现象3、实验仪器设备(1）显微镜、离心机(2）天平、载玻片(3）土豆、兔子或鸡实验3、细胞膜的渗透性1、实验目的要求（1）掌握细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度2、实验主要内容(1）制备血细胞悬液(2）低渗（3）观察并记录血细胞的渗透性3、实验仪器设备(1）试管、试管架(2）烧杯(3）移液管，移液器（2-10、20-100、200-1000μl）（4）秒表，记号笔、标签纸(5）显微镜、离心机(6）天平、载玻片(7）兔子或鸡实验4、细胞融合实验一一聚乙二醇法或电刺激法1、实验目的要求（1）掌握PEG诱导细胞融合的原理和方法：（2）了解电刺激法诱导细胞融合的原理和方法（3）掌握观察融合细胞的方法（4）细胞融合率的计算(5)了解细胞融合的多种诱导因素2、实验主要内容（1）制备鸡血细胞悬液或制备培养的不同细胞系-4-
- 4 - ⑷ 暗视场光挡加放的位置及其调整 ⑸ 生物标本（装片、涂片、切片等）制备方法 3、实验仪器设备 ⑴ 普通光学显微镜 ⑵ 暗视场显微镜 ⑶ 相差显微镜 ⑷ 倒置显微镜 ⑸ 盖玻片，载玻片 ⑹ 黑纸、剪子、圆规、直尺、胶水、记号笔、标签纸 ⑺ 洋葱，细胞标本 实验 2、细胞凝集反应 1、实验目的要求 ⑴ 掌握血细胞凝集原理 2、实验主要内容 ⑴ 提取土豆凝集素 ⑵ 光镜观察血球凝集现象 3、实验仪器设备 ⑴ 显微镜、离心机 ⑵ 天平、载玻片 ⑶ 土豆、兔子或鸡 实验 3、细胞膜的渗透性 1、实验目的要求 ⑴ 掌握细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度 2、实验主要内容 ⑴ 制备血细胞悬液 ⑵ 低渗 ⑶ 观察并记录血细胞的渗透性 3、实验仪器设备 ⑴ 试管、试管架 ⑵ 烧杯 ⑶ 移液管，移液器（2－10、20－100、200－1000 µl） ⑷ 秒表，记号笔、标签纸 ⑸ 显微镜、离心机 ⑹ 天平、载玻片 ⑺ 兔子或鸡 实验 4、细胞融合实验――聚乙二醇法或电刺激法 1、实验目的要求 ⑴ 掌握 PEG 诱导细胞融合的原理和方法； ⑵ 了解电刺激法诱导细胞融合的原理和方法 ⑶ 掌握观察融合细胞的方法 ⑷ 细胞融合率的计算 ⑸了解细胞融合的多种诱导因素 2、实验主要内容 ⑴ 制备鸡血细胞悬液或制备培养的不同细胞系
(2）聚乙二醇配制和使用(3）电刺激法原理及细胞融合仪的使用(4）融合现象的观察(5）细胞融合率的计算3、实验仪器设备（1）普通显微镜、倒置显微镜、相差显微镜(2）细胞融合仪(3）移液管，移液器（2-10、20—100、200—1000μl）(4）天平、离心机（5）恒温水浴箱(6）细胞培养箱(7）秒表、细胞计数器、记号笔、标签纸(8）试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、培养血、培养瓶(9)细胞计数板00）兔子、鸡实验5、线粒体的超活染色与观察1、实验目的要求（1）观察动植物细胞内线粒体的形态、数量与分布（2）学习线粒体的超活染色技术2、实验主要内容（1）人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色观察（2）洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察（3）兔子或小鼠干细胞线粒体的超活染色观察3、实验仪器设备(1)）显微镜(2）恒温水浴箱（3）剪刀、镊子、刀片（4）移液管，移液器（2—10、20一100、200一1000μl）、记号笔、标签纸(5）试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、培养皿、培养瓶实验6、叶绿体的分离与观察1、实验目的要求（1）通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法2、实验主要内容（1）叶绿体的分离和光镜观察（2）菠菜叶手切片的光镜观察(3）荧光显微镜观察3、实验仪器设备(I)离心机(2）普通显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、相差显微镜(3）组织捣碎机(4）天平(5）移液管，移液器（2—10、20100、2001000μl）、记号笔、标签纸（6）滴管、试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、培养皿、培养瓶实验7、动物细胞骨架的观家-5-
- 5 - ⑵ 聚乙二醇配制和使用 ⑶ 电刺激法原理及细胞融合仪的使用 ⑷ 融合现象的观察 ⑸ 细胞融合率的计算 3、实验仪器设备 ⑴ 普通显微镜、倒置显微镜、相差显微镜 ⑵ 细胞融合仪 ⑶ 移液管，移液器（2－10、20－100、200－1000 µl） ⑷ 天平、离心机 ⑸ 恒温水浴箱 ⑹ 细胞培养箱 ⑺ 秒表、细胞计数器、记号笔、标签纸 ⑻ 试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、培养皿、培养瓶 ⑼ 细胞计数板 ⑽ 兔子、鸡 实验 5、线粒体的超活染色与观察 1、实验目的要求 ⑴ 观察动植物细胞内线粒体的形态、数量与分布 ⑵ 学习线粒体的超活染色技术 2、实验主要内容 ⑴ 人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 ⑵ 洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察 ⑶ 兔子或小鼠干细胞线粒体的超活染色观察 3、实验仪器设备 ⑴ 显微镜 ⑵ 恒温水浴箱 ⑶ 剪刀、镊子、刀片 ⑷ 移液管，移液器（2－10、20－100、200－1000 µl）、记号笔、标签纸 ⑸ 试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、培养皿、培养瓶 实验 6、叶绿体的分离与观察 1、实验目的要求 ⑴ 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法 2、实验主要内容 ⑴ 叶绿体的分离和光镜观察 ⑵ 菠菜叶手切片的光镜观察 ⑶ 荧光显微镜观察 3、实验仪器设备 ⑴ 离心机 ⑵ 普通显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、相差显微镜 ⑶ 组织捣碎机 ⑷ 天平 ⑸ 移液管，移液器（2－10、20－100、200－1000 µl）、记号笔、标签纸 ⑹ 滴管、试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、培养皿、培养瓶 实验 7、动物细胞骨架的观察
1、实验目的要求（1）掌握动物细胞骨架的分布及形态特征(2）掌握动物细胞骨架的观察方法2、实验主要内容(1）动物细胞或组织标本制备(2）染色(3）镜检3、实验仪器设备（1）显微镜(2）温箱(3）离心机（4）试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、记号笔、标签纸实验8、动物组织细胞的裂解与全细胞蛋白提取、浓度测定1、实验目的要求（1）学习不同动物组织细胞的裂解方法（2）掌握细胞蛋白提取方法（3）掌握蛋白浓度测定方法2、实验主要内容(1）动物活体组织细胞的匀浆制备(2)离心(3）测定（4）标准曲线的制作3、实验仪器设备（1）离心机（低速、高速冷冻离心机）(2）超声波细胞破碎仪(3）组织匀浆机或玻璃匀浆器（4）紫外分光光度计(5）制冰机(6)纱布(7）试管、试管架、烧杯、滴管、记号笔、标签纸（8）移液管，移液器（2-10、20-100、200-1000μ）实验9、类坏死的处理及死、活细胞鉴别1、实验目的要求（1）了解细胞损伤的过程及死活细胞的鉴别方法2、实验主要内容(1)制备细胞悬液(2)培养(3）染色(4)记数3、实验仪器设备(1)解剖镜(2）显微镜（3）血细胞计数器、细胞计数板(4）细胞培养箱(5）组织匀浆机或玻璃匀浆器-6 -
- 6 - 1、实验目的要求 ⑴ 掌握动物细胞骨架的分布及形态特征 ⑵ 掌握动物细胞骨架的观察方法 2、实验主要内容 ⑴ 动物细胞或组织标本制备 ⑵ 染色 ⑶ 镜检 3、实验仪器设备 ⑴ 显微镜 ⑵ 温箱 ⑶ 离心机 ⑷ 试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、记号笔、标签纸 实验 8、动物组织细胞的裂解与全细胞蛋白提取、浓度测定 1、实验目的要求 ⑴ 学习不同动物组织细胞的裂解方法 ⑵ 掌握细胞蛋白提取方法 ⑶ 掌握蛋白浓度测定方法 2、实验主要内容 ⑴ 动物活体组织细胞的匀浆制备 ⑵ 离心 ⑶ 测定 ⑷ 标准曲线的制作 3、实验仪器设备 ⑴ 离心机（低速、高速冷冻离心机） ⑵ 超声波细胞破碎仪 ⑶ 组织匀浆机或玻璃匀浆器 ⑷ 紫外分光光度计 ⑸ 制冰机 ⑹ 纱布 ⑺ 试管、试管架、烧杯、滴管、记号笔、标签纸 ⑻ 移液管，移液器（2－10、20－100、200－1000 µl） 实验 9、类坏死的处理及死、活细胞鉴别 1、实验目的要求 ⑴ 了解细胞损伤的过程及死活细胞的鉴别方法 2、实验主要内容 ⑴ 制备细胞悬液 ⑵ 培养 ⑶ 染色 ⑷ 记数 3、实验仪器设备 ⑴ 解剖镜 ⑵ 显微镜 ⑶ 血细胞计数器、细胞计数板 ⑷ 细胞培养箱 ⑸ 组织匀浆机或玻璃匀浆器
(6）制冰机(7）纱布、试管、试管架、烧杯、滴管、记号笔、标签纸(8）移液管，移液器（2-10、20-100、200-1000μl）实验10、细胞器的分离与观案1、实验目的要求（1）了解细胞器离心分离原理及意义（2）掌握离心技术在细胞器分离制备的基本操作2、实验主要内容(1）动物活组织提取（）(2）组织匀浆，过滤，消化（冰浴条件）(3）低速冷冻离心分离细胞核（4）高速冷冻离心分离线粒体、溶酶体等(5）染色(6）显微镜观察、分析3、实验仪器设备(1）显微镜(2）水浴箱（3）低速、告诉冷冻离心机(3）血细胞计数器、细胞计数板（4）细胞培养箱（5）组织匀浆机或玻璃匀浆器(6）制冰机(7）纱布、试管、试管架、烧杯、滴管、记号笔、标签纸(8）移液管，移液器（2—10、20—100、200—1000μl）实验11、动物细胞培养1、实验目的要求（1）学习细胞原代和继代的培养原理（2）掌握原代细胞和继代细胞培养的操作方法2、实验主要内容（1）培养基的配制（原代培养基、继代培养基）(2）培养基的分装、灭菌（3）培养用器具的洗涤与灭菌（4）幼年或动物胚胎的活组织提取，剪碎，消化酶解（5）组织移入培养瓶或培养板培养（传代细胞培养需有复活过程）（6）培养24小时后镜检，计数，分装（7）继续培养观察存活或传代次数(8）染色，细胞功能指标鉴定（9）药物于预对细胞功能指标的影响0)细胞系的冻存与复活3、实验仪器设备(1）高压灭菌锅(2）超净工作台(3）细胞培养箱(4）烘箱，离心机(5）普通显微镜、倒置显微镜、相差显微镜(6）纱布、试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、培养皿、培养瓶、培养板-7-
- 7 - ⑹ 制冰机 ⑺ 纱布、试管、试管架、烧杯、滴管、记号笔、标签纸 ⑻ 移液管，移液器（2－10、20－100、200－1000 µl） 实验 10、细胞器的分离与观察 1、实验目的要求 ⑴ 了解细胞器离心分离原理及意义 ⑵ 掌握离心技术在细胞器分离制备的基本操作 2、实验主要内容 ⑴ 动物活组织提取（） ⑵ 组织匀浆，过滤，消化 （冰浴条件） ⑶ 低速冷冻离心分离细胞核 ⑷ 高速冷冻离心分离线粒体、溶酶体等 ⑸ 染色 ⑹ 显微镜观察、分析 3、实验仪器设备 ⑴ 显微镜 ⑵ 水浴箱 ⑶ 低速、告诉冷冻离心机 ⑶ 血细胞计数器、细胞计数板 ⑷ 细胞培养箱 ⑸ 组织匀浆机或玻璃匀浆器 ⑹ 制冰机 ⑺ 纱布、试管、试管架、烧杯、滴管、记号笔、标签纸 ⑻ 移液管，移液器（2－10、20－100、200－1000 µl） 实验 11、动物细胞培养 1、实验目的要求 ⑴ 学习细胞原代和继代的培养原理 ⑵ 掌握原代细胞和继代细胞培养的操作方法 2、实验主要内容 ⑴ 培养基的配制（原代培养基、继代培养基） ⑵ 培养基的分装、灭菌 ⑶ 培养用器具的洗涤与灭菌 ⑷ 幼年或动物胚胎的活组织提取，剪碎，消化酶解 ⑸ 组织移入培养瓶或培养板培养 （传代细胞培养需有复活过程） ⑹ 培养 24 小时后镜检，计数，分装 ⑺ 继续培养观察存活或传代次数 ⑻ 染色，细胞功能指标鉴定 ⑼ 药物干预对细胞功能指标的影响 ⑽ 细胞系的冻存与复活 3、实验仪器设备 ⑴ 高压灭菌锅 ⑵ 超净工作台 ⑶ 细胞培养箱 ⑷ 烘箱，离心机 ⑸ 普通显微镜、倒置显微镜、相差显微镜 ⑹ 纱布、试管、试管架、烧杯、载玻片、盖玻片、培养皿、培养瓶、培养板
(7）记号笔、标签纸、移液器（2-10、20-100、200-1000μl）(8）细胞计数板，细胞计数器(9）真空泵00)怀孕鼠或兔子aD各种传代细胞系(2)商品化细胞培养基(3)液氮灌【成绩考核方式】实验成绩评定的内容包括实验操作、完成实验报告的情况（数量和质量）、考勤、预习与课堂提问以及交流讨论。对迟交实验报告者，按规定扣分：对抄袭实验报告者，除给予批评教育外，以缺交实验报告论处。缺交实验报告达全学期实验报告量的四分之一以上者，或实验课考勤无故旷课达3次以上者（含3次），取消其考试资格。【教材与参考书目】指定教材：杨汉民主编，《细胞生物学实验》，高等教育出版社，2000年版参考书目：1、汪堃仁，首薛绍白，柳慧图主编《细胞生物学》（第二版），北京：北京师范大学出版社，1998年2、翟中和《细胞生物学动态》，北京师大出版社，1995，1997，1999年3、韩贻仁主编.：《分子细胞生物学》（第二版）北京：科学出版社，2001年4、刘鼎新主编，《细胞生物学研究方法与技术》（第二版），北医、协和医大联合出版社，1997年5、辛华主编，《细胞生物学实验》，科学出版社，2001年（编制：白占涛/审核：郝瑞娟）-8-
- 8 - ⑺ 记号笔、标签纸、移液器（2－10、20－100、200－1000 µl） ⑻ 细胞计数板，细胞计数器 ⑼ 真空泵 ⑽ 怀孕鼠或兔子 ⑾ 各种传代细胞系 ⑿ 商品化细胞培养基 ⒀ 液氮灌 【成绩考核方式】 实验成绩评定的内容包括实验操作、完成实验报告的情况(数量和质量)、考勤、预习与课堂提问以及交流 讨论。对迟交实验报告者，按规定扣分；对抄袭实验报告者，除给予批评教育外，以缺交实验报告论处。缺交实 验报告达全学期实验报告量的四分之一以上者，或实验课考勤无故旷课达 3 次以上者（含 3 次），取消其考试资 格。 【教材与参考书目】 指定教材： 杨汉民主编，《细胞生物学实验》， 高等教育出版社，2000 年版 参考书目： 1、汪堃仁，薛绍白，柳慧图主编. 《细胞生物学》（第二版）. 北京：北京师范大学出版社，1998 年. 2、翟中和《细胞生物学动态》，北京师大出版社，1995，1997，1999 年. 3、韩贻仁主编. 《分子细胞生物学》（第二版）. 北京：科学出版社, 2001 年. 4、刘鼎新主编，《细胞生物学研究方法与技术》（第二版)，北医、协和医大联合出版社，1997 年 5、辛华主编，《细胞生物学实验》，科学出版社，2001 年 （ 编制：白占涛 / 审核：郝瑞娟）
2、《生物化学》实验教学大纲【课程名称】生物化学（Biochemistry）【课程编码】SWZB0110【适用专业】生物技术【课时136学时【学分】1.0【教学（实验）时间安排】序号课时备注实验名称实验类型1验证3氨基酸的分离鉴定一纸层析法演示+指导学生实验蛋白质的性质实验（一）一蛋白质及23验证演示+指导学生实验氨基酸的呈色反应蛋白质的性质实验（二）一蛋白质的33验证演示+指导学生实验等电点测定和沉淀反应4验证3酪蛋白的制备演示+指导学生实验5验证3血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳演示+指导学生实验63酶的特性验证演示+指导学生实验7验证3维生素C的定量测定演示+指导学生实验8验证3总糖的测定一葱酮比色法演示+指导学生实验9验证3粗脂肪的提取及定量测定演示+指导学生实验103验证酵母核糖核酸的分离及组分鉴定演示+指导学生实验113验证醋酸纤维薄膜电泳分离和核苷酸演示+指导学生实验12验证3脂肪酸的β一氧化演示+指导学生实验13设计18演示吸附层析法分离叶子色素54合计选作其中36学时实验【教学（实验）内容要点】实验1、氨基酸的分离鉴定一纸层析法1、实验目的要求通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。2、实验主要内容[] 平衡[2] 点样[3] 扩展[4]显色[5] 计算各种氨基酸的Rf值。3、实验仪器设备层析缸，喷雾器，培养皿，毛细管，层析滤纸实验2、蛋白质的性质实验（一）一蛋白质及氨基酸的色反应1、实验目的要求[1]了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。[2]了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。[3]学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。-9-
- 9 - 2、《生物化学》实验教学大纲 【课程名称】 生物化学（Biochemistry） 【课程编码】 SWZB0110 【适用专业】 生物技术 【课 时】 36 学时 【学 分】 1.0 【教学（实验）时间安排】 序号 实验名称 实验类型 课时 备 注 1 氨基酸的分离鉴定－纸层析法 验证 3 演示+指导学生实验 2 蛋白质的性质实验（一）－蛋白质及 氨基酸的呈色反应 验证 3 演示+指导学生实验 3 蛋白质的性质实验（二）－蛋白质的 等电点测定和沉淀反应 验证 3 演示+指导学生实验 4 酪蛋白的制备 验证 3 演示+指导学生实验 5 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 验证 3 演示+指导学生实验 6 酶的特性 验证 3 演示+指导学生实验 7 维生素 C 的定量测定 验证 3 演示+指导学生实验 8 总糖的测定－蒽酮比色法 验证 3 演示+指导学生实验 9 粗脂肪的提取及定量测定 验证 3 演示+指导学生实验 10 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 验证 3 演示+指导学生实验 11 醋酸纤维薄膜电泳分离和核苷酸 验证 3 演示+指导学生实验 12 脂肪酸的 β－氧化 验证 3 演示+指导学生实验 13 吸附层析法分离叶子色素 设计 18 演示 合 计 54 选作其中 36 学时实验 【教学（实验）内容要点】 实验 1、氨基酸的分离鉴定－纸层析法 1、实验目的要求 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 2、实验主要内容 [1] 平衡 [2] 点样 [3] 扩展 [4] 显色 [5] 计算各种氨基酸的 Rf 值。 3、实验仪器设备 层析缸，喷雾器，培养皿，毛细管，层析滤纸 实验 2、蛋白质的性质实验（一）－蛋白质及氨基酸的呈色反应 1、实验目的要求 [1] 了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。 [2] 了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 [3] 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法
2、实验主要内容[1]双缩脲反应[2]三酮反应[3]黄色反应[4]考马斯亮蓝反应3、实验仪器设备水浴锅，温度计，容量瓶，锥形瓶，酸度计，移液枪等。实验3、蛋白质的性质实验（二）一蛋白质的等电点测定和沉淀反应1、实验目的要求[1]了解蛋白质的两性解离性质。[2]学习测定蛋白质等电点的一种方法。[3]加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。[4]了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。[5]了解蛋白质变性与沉淀的关系。2、实验主要内容[]蛋白质等电点的测定。[2]蛋白质沉淀及变性：盐析，重金属离子沉淀蛋白质，某些有机酸沉淀蛋白质，有机溶剂沉淀蛋白质，乙醇引起的变性与沉淀。3、实验仪器设备水浴锅，温度计，容量瓶，锥形瓶，酸度计，移液枪等。实验4、酪蛋白的制备1、实验目的要求学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。2、实验主要内容[1]将25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7醋酸缓冲液25mL。用精密试纸或酸度计调pH值至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15min(3000r/min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品[2]用水洗沉淀三次，离心10min(3000r/min)，弃去上清液。[3]在沉淀中加入约10mL乙醇，搅拌片刻，将全部的悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇一乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。[4]将沉淀摊开在表面皿上，风干：得酪蛋白纯品。[5]准确称重，计算酪蛋白含量（g/100mL牛乳），并和理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。3、实验仪器设备[1] 试剂95%乙醇：无水乙醚：乙醇一乙醚混合液（V/V=I：1）。0.2mol/LpH4.7醋酸一醋酸钠缓冲液3000mL：A液：称取NaAc?3H2054.44g，定容至2000mL。B液：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000mL。取A液1770mL，B液1230mL混合即得pH4.7的醋酸一醋酸钠缓冲液3000mL。[2]材料牛奶。[3]器材离心机，抽滤装置，精密pH试纸或酸度计，电炉，烧杯，温度计。实验5、血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳1、实验目的要求-10 -
- 10 - 2、实验主要内容 [1] 双缩脲反应 [2] 茚三酮反应 [3] 黄色反应 [4] 考马斯亮蓝反应 3、实验仪器设备 水浴锅，温度计，容量瓶，锥形瓶，酸度计，移液枪等。 实验 3、蛋白质的性质实验（二）－蛋白质的等电点测定和沉淀反应 1、实验目的要求 [1] 了解蛋白质的两性解离性质。 [2] 学习测定蛋白质等电点的一种方法。 [3] 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 [4] 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 [5] 了解蛋白质变性与沉淀的关系。 2、实验主要内容 [1] 蛋白质等电点的测定。 [2] 蛋白质沉淀及变性：盐析，重金属离子沉淀蛋白质，某些有机酸沉淀蛋白质，有机溶剂沉淀蛋白质，乙 醇引起的变性与沉淀。 3、实验仪器设备 水浴锅，温度计，容量瓶，锥形瓶，酸度计，移液枪等。 实验 4、酪蛋白的制备 1、实验目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。 2、实验主要内容 [1] 将 25mL 牛奶加热至 40℃。在搅拌下慢慢加入预热至 40℃、pH4.7 醋酸缓冲液 25mL。用精密试纸或酸 度计调 pH 值至 4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心 15min(3000r/min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 [2] 用水洗沉淀三次，离心 10min(3000r/min)，弃去上清液。 [3] 在沉淀中加入约 10mL 乙醇，搅拌片刻，将全部的悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合 液洗沉淀 2 次。最后用乙醚洗沉淀 2 次，抽干。 [4] 将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。 [5] 准确称重，计算酪蛋白含量（g/100mL 牛乳）, 并和理论含量为 3.5g/100mL 牛乳相比较，求出实际得 率。 3、实验仪器设备 [1] 试剂 95%乙醇；无水乙醚；乙醇—乙醚混合液 (V/V=1∶1) 。 0.2mol/L pH4.7 醋酸—醋酸钠缓冲液 3000mL： A 液：称取 NaAc?3H2O 54.44g，定容至 2000mL。 B 液：称取优级纯醋酸（含量大于 99.8%）12.0g 定容至 1000mL。 取 A 液 1770mL，B 液 1230mL 混合即得 pH4.7 的醋酸—醋酸钠缓冲液 3000mL。 [2] 材料 牛奶。 [3] 器材 离心机，抽滤装置，精密 pH 试纸或酸度计，电炉，烧杯，温度计。 实验 5、血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 1、实验目的要求