动物细胞融合 CELL FUSION Purify wenom I L at 320 Ingal Sendai virus Remove Sple Myeloma Cells Spleen cells (Ns-1) Cel Fusion Immunize balTic mice 88Check cells Expand c Groy cells in HETEROKARYON(○ in 48-vell plates ELISA HAT media HYBRID CELL Expand cells that tested postive into 96-vel plate
动物细胞融合
条交瘤技术 Immunization Tumor cell Antibody-formin Fusion Tissue culture 政mx Hybidromas screened for antibody production Antibody-producing hybridomas cloned Monoclonal antibodies isolated for cultivation Monoclonal Antibody production
杂 交 瘤 技 术
动物细胞培养反应器 动物细胞培养方法 动物细胞培养技术的应用 动物细胞培养的特点 细胞培养的操作方式 细胞培养反应器
动物细胞培养反应器 ➢ 动物细胞培养方法 ➢ 动物细胞培养技术的应用 ➢ 动物细胞培养的特点 ➢ 细胞培养的操作方式 ➢ 细胞培养反应器
动物细胞培养方法 体外培养的动物细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支 持物上生长特征,可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。 贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。大多数动物 细胞属于贴壁型细胞,如Hela、Vero、BHK、CHO细胞系。 悬浮型细胞在培养中悬浮生长。来源于血液、淋巴组织的 细胞,许多肿瘤细胞和某些转化细胞
体外培养的动物细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支 持物上生长特征，可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。 贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。大多数动物 细胞属于贴壁型细胞，如Hela、Vero、BHK、CHO细胞系。 悬浮型细胞在培养中悬浮生长。来源于血液、淋巴组织的 细胞，许多肿瘤细胞和某些转化细胞。 动物细胞培养方法
动物细胞培养方法 贴壁培养(单层细胞培养) 分散的细胞悬浮在培养瓶中很快(几十分钟至几小时)就贴 附在瓶壁上,称为细胞贴壁,贴壁后的细胞形态形成多态 性,呈单层生长,所以此法又叫单层细胞培养。 悬浮培养 细胞在培养器中自由悬浮生长的过程,不贴壁,主要用于 悬浮型细胞培养,如淋巴细和肿瘤细胞的培养
动物细胞培养方法 ➢ 贴壁培养(单层细胞培养) 分散的细胞悬浮在培养瓶中很快(几十分钟至几小时)就贴 附在瓶壁上，称为细胞贴壁，贴壁后的细胞形态形成多态 性， 呈单层生长，所以此法又叫单层细胞培养。 ➢悬浮培养 细胞在培养器中自由悬浮生长的过程，不贴壁，主要用于 悬浮型细胞培养，如淋巴细和肿瘤细胞的培养
动物细胞培养方法 固定化培养 种包埋培养。对两类细胞都适用,细胞生长密度高, 抗剪切力和抗污染能力强。悬浮型细胞常用海藻酸钙包埋, 贴壁型细胞常用胶原包埋。 无菌压缩空气 海藻酸钙细胞悬浮液 排气口 瓶盖 制备小珠用的 直径1mm的孔 ooo CaCl2溶液 1-4-18微囊技术操作过程图解 1悬浮指胞胶状液2成滴器3胶化小珠 4一包被溶液显微镜下胶囊6一多孔微青膜 7一成操作后的微囊
➢ 固定化培养 一种包埋培养。对两类细胞都适用，细胞生长密度高， 抗剪切力和抗污染能力强。悬浮型细胞常用海藻酸钙包埋， 贴壁型细胞常用胶原包埋。 动物细胞培养方法
动物细胞培养技术的应用 动物细胞培养可生产的生物制品 病毒疫苗:口蹄疫(FMD)、狂犬疫苗等 2非抗体免疫调节剂:干扰素(IFN)、白介素(L等 3多肽生长因子:神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF) 4酶:组织血纤维溶酶原激活剂(tPA 5激素:红细胞生成素(EPO)、促黄体生成素(LH 6病毒杀虫剂 7肿瘤特异性抗原:癌胚抗原(CEA) 8单克隆抗体 9皮肤重植 10细胞
➢ 动物细胞培养可生产的生物制品 1.病毒疫苗：口蹄疫(FMD)、狂犬疫苗等 2.非抗体免疫调节剂：干扰素(IFN)、白介素(IL)等 3.多肽生长因子：神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF) 4.酶：组织血纤维溶酶原激活剂(t-PA) 5.激素：红细胞生成素(EPO)、促黄体生成素(LH) 6.病毒杀虫剂 7.肿瘤特异性抗原：癌胚抗原(CEA) 8.单克隆抗体 9.皮肤重植 10.细胞 动物细胞培养技术的应用
动物细胞培养技术的应用 动物细胞培养生产生物制品工艺宴例 1组织纤溶酶激活剂生产工艺流程 细胞单层分散细胞悬液,细胞培养物分离培养液 取提取液层析纯化层析液浓缩浓缩液层价时层析液 冻干 tPA成品 2抗 HSAS的单克隆抗体生产工艺流程 大鼠骨髓瘤+免疫大鼠脾淋巴细胞融合,融合混合物选 杂种细胞混合物克睡化杂交瘤克隆系种质培细胞种质扩大培养 培养液分粗制McAb精制层析液超浓缩液MAb精品
动物细胞培养技术的应用 ➢ 动物细胞培养生产生物制品工艺实例 1.组织纤溶酶激活剂生产工艺流程 细胞单层 细胞悬液 细胞培养物 培养 培养液 提取液 层析液 浓缩液 层析液 tPA成品 分散 分离 提取 层析纯化 浓缩 层析精制 冻干 2.抗HBsAS的单克隆抗体生产工艺流程 培养液 杂种细胞混合物 大鼠骨髓瘤＋免疫大鼠脾淋巴细胞 融合 融合混合物 筛选 克隆化 杂交瘤克隆系 种质培养 细胞种质 扩大培养 分离 粗制McAb 精制 层析液 超虑 浓缩液 冻干 McAb精品
动物细胞培养的特点 动物细胞培养的特点 1.细胞生长缓慢,易受微生物污染,培养时需要抗生素; 2.动物细胞较微生物大得多,无细胞壁,机械强度低,适应 环境能力差 3.培养过程需氧量少,且不耐受强力通风与搅拌; 4.在机体中,细胞相互粘连以集群形式存在; 5.培养过程产物分布于细胞内外,成本高,产品价格昂贵; 6.大规模培养时,不可套用微生物反应的经验; 7.原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡
➢ 动物细胞培养的特点 1. 细胞生长缓慢，易受微生物污染，培养时需要抗生素； 2. 动物细胞较微生物大得多，无细胞壁，机械强度低，适应 环境能力差； 3. 培养过程需氧量少，且不耐受强力通风与搅拌； 4. 在机体中，细胞相互粘连以集群形式存在； 5. 培养过程产物分布于细胞内外，成本高，产品价格昂贵； 6. 大规模培养时，不可套用微生物反应的经验； 7. 原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡。 动物细胞培养的特点
细胞培养的操作方式 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞,深层培养的操作方式可分 分批式、流加式、半连续式、连续式和灌注式。 分批式操作 操作简单、是最常用的操作方式。分批式培养过程中,细胞 的生长可分为延迟期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期 衰退 延迟对数生长期稳定期期 期 培养时间t 分批式培养细胞生长曲线
无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，深层培养的操作方式可分 细胞培养的操作方式 分批式、流加式、半连续式、连续式和灌注式。 • 分批式操作 操作简单、是最常用的操作方式。分批式培养过程中，细胞 的生长可分为延迟期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期 分批式培养细胞生长曲线