实验六生活力测定 6.1生活力测定的意义及应用范围 种子潜在的发芽能力称为种子生活力。种子内的有生命组织、无生命组织及其它内含 物对某些化学试剂的反应不同。根据反应（染色）类型。可以判断种子潜在的发芽能 活力测定简单、快速，西丽 发在这些情况下，用法生活大优 常用的化学染色剂有四唑、靛兰、碘一碘化钾、硒酸氧钠等。 6.2靛兰染色法 6.2.1原理 靛兰是一种染料，分子式为C16HsNO2(SO)N很容易渗透入种子的死组织，使其 染色，但不能透过细胞的原生质。根据染色部位和染色程度可以判断种子的生活力。 6.2.2染色前处理及染色 从纯净种子中随机抽取25粒至50粒种子，四个重复，种子分别浸入室温水中。浸种 时间因树种而异，松属、雪松必听种子在室温下浸3 一5天，其体浸种时间在 国家标准中有明确的规定。浸种后，分别沿种子的棱切开种皮和胚，取出种胚 出 用盖 长水丧失生人记录 配下空粒 剥出的 试剂用量应角 6.1 胚浮 的时间之后倒出溶液，用清水冲洗种胚数次，立即将种胚放在垫有满湿自 6.2.3判别标准 6.2.4结果计算 生活力的百分率根据四个重复计算，不带小数。重复间最大容许误差与发芽测定的规 定相同。 6.3四唑染色法 6.3.1原理 四唑是2.3.5三苯基四氮唑的简称，也简称TT℃。它的溶液本身无色，当被种子吸收之 后，活细胞内的脱氢酶可将其还原成稳定的、不溶于水的，不扩散转移的红色物质 从而使种子有生命的部位染成红色，而无生命的部位不染色。根据染色的部位及分布状况， 可判断种子的生活力。 6.3.2染色前处理及染色 从纯净种子中随机抽取25至50粒种子，四个重复。厘。不同 树种处理的方法不尽相同。例如： 图61松属、衫木种胚旋兰染色法测定生活力的判别标准
实验六 生活力测定 6.1 生活力测定的意义及应用范围 种子潜在的发芽能力称为种子生活力。种子内的有生命组织、无生命组织及其它内含 物对某些化学试剂的反应不同。根据反应（染色）类型。可以判断种子潜在的发芽能力。生 活力测定简单、快速，有时需要迅速判断种子的品质，特别是有些树种的休眠期长，难于进 行发芽测定。在这些情况下，用染色法鉴定种子生活力具有很大的优越性。 常用的化学染色剂有四唑、靛兰、碘—碘化钾、硒酸氧钠等。 6.2 靛兰染色法 6.2.1 原理 靛兰是一种染料，分子式为 C16H8N2O2（SO3）2Na2 很容易渗透入种子的死组织，使其 染色，但不能透过细胞的原生质。根据染色部位和染色程度可以判断种子的生活力。 6.2.2 染色前处理及染色 从纯净种子中随机抽取 25 粒至 50 粒种子，四个重复，种子分别浸入室温水中。浸种 时间因树种而异，松属、雪松必听种子在室温下浸 3—5 天，具体浸种时间在“林木种子试验” 国家标准中有明确的规定。浸种后，分别沿种子的棱切开种皮和胚，取出种胚。种胚取出后 放在潮湿的吸水纸或纱布上，用盖子盖好，以免种胚失水丧失生活力。取胚时随时记下空粒、 腐烂粒、感染病虫害粒以及其它明显丧失生活力的种子，分别记入记录表（附表 6.1）。 剥出的种胚分组投入 0.06%~0.1%的靛兰溶液中，试剂用量应能完全浸没种胚。如有种 胚浮在表面，应将其拔沉。染色时间一般为 2—3 小时，温度 25℃~30℃。到达染色所规定 的时间之后倒出溶液，用清水冲洗种胚数次，立即将种胚放在垫有潮湿白纸的玻皿中观察。 6.2.3 判别标准 现以刺槐松属、杉木种胚为例，其判别标准如图 6.1。对照标准图谱，判别种胚有无生 命力，并将判别结果填入附表 6.1。 6.2.4 结果计算 生活力的百分率根据四个重复计算，不带小数。重复间最大容许误差与发芽测定的规 定相同。 6.3 四唑染色法 6.3.1 原理 四唑是 2.3.5 三苯基四氮唑的简称，也简称 TTC。它的溶液本身无色，当被种子吸收之 后，活细胞内的脱氢酶可将其还原成稳定的、不溶于水的，不扩散转移的红色物质——甲， 从而使种子有生命的部位染成红色，而无生命的部位不染色。根据染色的部位及分布状况， 可判断种子的生活力。 6.3.2 染色前处理及染色 从纯净种子中随机抽取 25 至 50 粒种子，四个重复。一般种子浸种 18~36 小时。不同 树种处理的方法不尽相同。例如： 图 6.1 松属、杉木种胚靛兰染色法测定生活力的判别标准
有生活力的 无生活力的 1.胚全未染色 1.子叶着色 2。胚根先端着色部分小于胚根长度的 2.包括分生组织在内的种胚全长的 的分着色 3.胚基部分有少量着色斑点且未相连成 环状 3.胚根全长3或超过1B部分着色 4。了叶有少量着色理点 4.种胚全数染色 W 毛竹种子剥去外颗浸种24小时后用翻服圈，取胚部完整的一半作为染色材料， 分组暂时置于潮得的吸水纸或纱布上。 类种子浸种2媚，剥去外种皮和内种皮，尽量不使胚乳受损伤，分组暂放在潮 湿的 水纸或纱布 不需剥种皮 方法。种子浸泡 直接染白 阴失方法。将胚和胚乳均进行染色。剥种子时。挂出空粒，腐烂粒和有病虫害粒 度高， 反应较快，但药剂消耗量大。浓度低，染色时间较长，要确定具体合适的染色时间， 可剖开胚露出，如胚乳从外向内由红色明显地过渡到无色。表示四唑溶液的渗入尚不充分， 应让样品在四唑溶液中再保持一段时间。 经过染色的材料分组放在潮淡的滤纸上，籍助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。 6.3.3判别标准 判别种子有无生活力，主要看垫鱼部位及大小，面不一定在于颜鱼的深浅，冬种树科 的 。现以刺槐松屈种子为例（见图6.2）。依照标准图谱，判断种子生命力 的有无，将结果填入附表(62)。 6.3.4结果计算 为保持染色过程中染色液PH值的稳定性，应使用缓冲溶液来配制四唑溶液，一般都使 用磷酸缓冲液。 取9.078克KHP0溶于1000毫升水中，得甲液，取11.876克Na.HPO2H:0溶于1000 毫升水中，得乙液。甲液和乙液按2：3的容积比混合，即得配制四唑溶液。用的缓冲溶液 如欲制取浓度0.5%的四唑溶液，可称取5克四唑溶于1000毫升缓冲液中
有生活力的 无生活力的 1．胚全未染色 1．子叶着色 2．胚根先端着色部分小于胚根长度的 1/3 2．包括分生组织在内的种胚全长的 1/3 的部分着色 3．胚基部分有少量着色斑点且未相连成 环状 3．胚根全长 1/3 或超过 1/3 部分着色 4．子叶有少量着色斑点 4．种胚全数染色 毛竹种子剥去外颗浸种 24 小时后用利刃沿腹沟纵剖，取胚部完整的一半作为染色材料， 分组暂时置于潮湿的吸水纸或纱布上。 松类种子浸种 1~2 天后，剥去外种皮和内种皮，尽量不使胚乳受损伤，分组暂放在潮 湿的吸水纸或纱布上。 还有一种不需剥种皮的方法。种子浸泡后，将胚根对面的胚乳或子叶截去一小段，截 除方法依种而异，但绝不能伤及胚，将截短的种子直接染色。 应用此方法，将胚和胚乳均进行染色。剥种子时，挑出空粒，腐烂粒和有病虫害粒， 并记入附表 6.2。 染色样品分组浸入四唑溶液（配制方法见本节附注）。在 25~30℃的黑暗环境中保持 2~3 小时，其中预处理如采用截除法，则所需染色时间较长。四唑溶液浓度一般为 0.1~1%。浓 度高，反应较快，但药剂消耗量大。浓度低，染色时间较长，要确定具体合适的染色时间， 可剖开胚露出，如胚乳从外向内由红色明显地过渡到无色。表示四唑溶液的渗入尚不充分， 应让样品在四唑溶液中再保持一段时间。 经过染色的材料分组放在潮淡的滤纸上，籍助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。 6.3.3 判别标准 判别种子有无生活力，主要看染色部位及大小 ，而不一定在于颜色的深浅，各种树种 的判别标准不尽相同。现以刺槐松属种子为例（见图 6.2）。依照标准图谱，判断种子生命力 的有无，将结果填入附表（6.2）。 6.3.4 结果计算 生活力的百分率根据四个重复计算，不带小数，重复间最大容许误差与发芽测定的规 定相同。最后以四组生活力百分率的平均值代表该批种子的生活力。 附：四唑溶液的配制 为保持染色过程中染色液 PH 值的稳定性，应使用缓冲溶液来配制四唑溶液，一般都使 用磷酸缓冲液。 取 9.078 克 KHPO 溶于 1000 毫升水中，得甲液，取 11.876 克 Na1HPO42H2O 溶于 1000 毫升水中，得乙液。甲液和乙液按 2：3 的容积比混合，即得配制四唑溶液。用的缓冲溶液 如欲制取浓度 0.5%的四唑溶液，可称取 5 克四唑溶于 1000 毫升缓冲液中
附表7.1 种子优良度测定记录表 树种 样品号 低尖轴子拉斯 组号 种子数 空粒腐坏粒病虫粒皱缩发芽不要 优良度% 平均 测定人测定日 期： 附表6.1 生活力测定记录表 树种 送检样品登记 测定日期年月日 染色前处理种子的方法（水温、浸种时间、换水次数、置床发芽的时间和温度等）。 染色方法（试剂名称、溶液浓度、染色时间、温度等） 切时发现的废种子勃凝 染色结果 种子空粒 坏 械损伤村病虫粒 小计中的种子数 3 平均生活力为】 %重复间的差距未超过、超过了容许范围，本次测定有 无效 测定人： 附表6.2 生活力测定记录表 树种」 送检样品登记号」 测定日期 年 月日 染色前处理种子的方法（水温、浸种时间、换水次数、置床发芽的时间和温度等）_ 染色方法（试剂名称、溶液浓度、染色时间、温度等） 削切时发现的废种子粒数 投入溶液 染色结果 力%
附表 7.1 种子优良度测定记录表 树种 样品号 组号 测定 种子数 优良种 子粒数 低劣种子粒数 空粒 腐坏粒 病虫粒 皱缩发芽不要 优良度% 1 2 3 4 平均 测定人 测定日 期： 附表 6.1 生活力测定记录表 树种 送检样品登记号 测定日期 年 月 日， 染色前处理种子的方法（水温、浸种时间、换水次数、置床发芽的时间和温度等）。 染色方法（试剂名称、溶液浓度、染色时间、温度等） 重复 号 供，试 种子数 剖切时发现的废种子粒数 投入溶液 中的种子数 染色结果 生活 空粒 腐坏粒 机械损伤粒 病虫粒 小计 有生活力的 力% （粒） 无生活力的 （粒） 1 2 3 4 平均生活力为 %重复间的差距未超过、超过了容许范围，本次测定有、 无效。 测定人： 附表 6.2 生活力测定记录表 树种 送检样品登记号 测定日期 年 月 日 染色前处理种子的方法（水温、浸种时间、换水次数、置床发芽的时间和温度等） 染色方法（试剂名称、溶液浓度、染色时间、温度等） 重复 号 供，试 种子数 剖切时发现的废种子粒数 投入溶液 中的种子数 染色结果 生活 空粒 腐坏粒 机械损伤粒 病虫粒 小计 力%
有生活力的无生活力的 (粒) 2 4 配成的四唑溶液在黑暗环境中可以保存几个月 但只能使用二次 思考题 四唑法的染色原理与靛蓝法有何异同？ 有生活力者：①胚乳及 于胚乳14》 ,胚全染色 ④豚及环均少 生活力者⑤
有生活力的 （粒） 无生活力的 （粒） 1 2 3 4 生活力为 %重复间的差距末超过、超过了容许范围，本次测定有、无效。 配成的四唑溶液在黑暗环境中可以保存几个月（一般配制成的四唑溶液置于棕色瓶中） 但只能使用一次。 思考题 四唑法的染色原理与靛蓝法有何异同？ 有生活力者：①胚乳及胚全部染色； ②胚乳少量未染色（少于胚乳 1/4），胚全染色； ③胚乳全染色，胚根尖端少许未染色； ④胚乳及胚均少许未染色。无生活力者：⑤一 图 6.2 松属、杉木种子四唑染色法测定生活力的判别标准