荧光分光光度法测定 一、实验目的 面粉中的核黄素2 二、实验原理和内容讲解 三、F-4500型仪器简介 四、F-4500型仪器的使用方法 复旦大学 五、思考题 化学教学实验中心 雷杰 下一页 ① 19:09:42
19:09:42 荧光分光光度法测定 荧光分光光度法测定 荧光分光光度法测定 面粉中的核黄素 面粉中的核黄素 面粉中的核黄素（（VBVB222）） 一、实验目的 二、实验原理和内容讲解 三、F-4500 型仪器简介 四、F-4500 型仪器的使用方法 五、思考题 复旦大学 化学教学实验中心 雷杰
、实验目的 学习荧光分析法的基本原理。掌握面粉样品的消 化方法,了解分子荧光分光光度计的主要结构及工作 原理,掌握其正确使用方法。学习测绘核黄素的激发 光谱和荧光光谱,了解溶液的p值等对核黄素荧光强 度的影响。 19:09:42
19:09:42 一、实验目的 学习荧光分析法的基本原理。掌握面粉样品的消 化方法，了解分子荧光分光光度计的主要结构及工作 原理，掌握其正确使用方法。学习测绘核黄素的激发 光谱和荧光光谱，了解溶液的pH值等对核黄素荧光强 度的影响
上二、实验原理和内容讲解 授课对象:化学系三年级本科生,每次四人 教学手段:讨论、提问 同学生一起回顾本学期做过的其他仪分实验,类 比、过渡到本次实验; F·重点类比紫外-可见分光光度法(普化实验涉及、本 学期会再做到),以实验名称中的关键词“分 子”、“荧光”、“面粉”、“核黄素”等为主 线,提问实验原理、步骤等。 19:09:42
19:09:42 二、实验原理和内容讲解 实验原理和内容讲解 实验原理和内容讲解 z 授课对象：化学系三年级本科生，每次四人。 z 教学手段：讨论、提问。 • 同学生一起回顾本学期做过的其他仪分实验，类 比、过渡到本次实验； • 重点类比紫外-可见分光光度法(普化实验涉及、本 学期会再做到)，以实验名称中的关键词“分 子”、“荧光”、“面粉”、“核黄素”等为主 线，提问实验原理、步骤等
F原理讲解方案一、类比、讨论 试比较分子荧光和紫外可见分光光度法 1.从结构化学角度 F激发、去活化;吸收、发射;分子、原子。 2.从仪器构造的角度 厂光源、单色器、监测器、样品池等 3.比较两种方法的优缺点 灵敏度、选择性、使用范围等 4.专业术语(基本概念)方面 入射光、透射光;激发光(谱)、荧光(光谱)、三维等 19:09:42
19:09:42 z 试比较分子荧光和紫外-可见分光光度法。 1. 从结构化学角度 激发、去活化；吸收、发射；分子、原子。 2. 从仪器构造的角度 光源、单色器、监测器、样品池等。 3. 比较两种方法的优缺点 灵敏度、选择性、使用范围等 4. 专业术语（基本概念）方面 入射光、透射光；激发光（谱）、荧光（光谱）、三维等。 原理讲解方案一、类比、讨论 原理讲解方案一、类比、讨论 原理讲解方案一、类比、讨论
F原理讲解方案二、提问、讨论 1.分子光谱和原子光谱的最主要区别及成因? 吸收光谱、发生光谱;带状、线状;分子荧光、原子荧光 2荧光产生的机制? 厂吸收辐射、再发射:振动弛豫、荧光发射、内部转换、体系间跨越、磷光发射等 4.荧光有无方向性? 固体样品如何测量?样品池如何设计? 3.关于分子荧光光度法的一些基本概念 |激发光谱、荧光光谱、三维荧光光谱 19:0942
19:09:42 1.分子光谱和原子光谱的最主要区别及成因？ 吸收光谱、发生光谱；带状、线状；分子荧光、原子荧光。 2.荧光产生的机制？ 吸收辐射、再发射；振动弛豫、荧光发射、内部转换、体系间跨越、磷光发射等 4.荧光有无方向性？ 固体样品如何测量？样品池如何设计？ 3.关于分子荧光光度法的一些基本概念 激发光谱、荧光光谱、三维荧光光谱 原理讲解方案二、提问、讨论 原理讲解方案二、提问、讨论 原理讲解方案二、提问、讨论
50 2.18 荧 156强 想20 lex 0.31 300 350 320340360380400420440460 em, nm ●三维荧光光谱示意图: 用途? 19:09:42
19:09:42 z 三维荧光光谱示意图： 用途？
关于待测样品面粉及核黄素 面粉的主要成分? 淀粉、蛋白质、脂肪、矿物质、维生素等 核黄素 结构、发荧光机制、稳定性、生理作用等 oHoH。H CH2-CH-CH-CH-CH2OH H3C +2H H3C -2H 氧化型 还原型 19:09:42
19:09:42 z 面粉的主要成分？ 淀粉、蛋白质、脂肪、矿物质、维生素等 z 核黄素 结构、发荧光机制、稳定性、生理作用等 N N NH H3C N H3C O O CH2 CH OH CH OH CH OH CH2OH 关于待测样品面粉及核黄素 关于待测样品面粉及核黄素 关于待测样品面粉及核黄素 氧化型 还原型 +2 H -2 H
具体实验注意事项 ●溶液配制:防止浪费or不够 ●浓盐酸的浓度 F·用NaoH调节pH值,理论计算? ·配制好的核黄素样品的保存 19:0942
19:09:42 z 溶液配制：防止浪费or不够 z 浓盐酸的浓度 z 用NaOH调节pH值，理论计算？ z 配制好的核黄素样品的保存 具体实验注意事项： 具体实验注意事项： 具体实验注意事项：
仪器简介 F4500型荧光分光光度计: 广村 样品槽: 450 广比色皿: ? 19:0942
19:09:42 三、仪器简介 F-4500型荧光分光光度计： 比色皿： ？ 样品槽：
厂F4500型光分光光度计光路图 激发单色器 光栅 参考光束 发射单色器 光栅 检测器 透镜分束器 s 氙灯 M 油 试样池 荧光检测器 试样室光闸 F-4500型荧光分光光度计光路图(日立公司) 图中M为反射镜,S为狭缝 19:0942
19:09:42 F-4500型荧光分光光度计光路图：