高效液相色谱法在 中成药检验中的应用 （一） Application of HPLC to Quality Control of Traditional Chinese Patent Medicine 主讲人 梁延寿
高效液相色谱法在 中成药检验中的应用 （一） Application of HPLC to Quality Control of Traditional Chinese Patent Medicine 主讲人 梁延寿
学习内容和目的 1. HPLC的定义、特点和类型 2. 色谱仪的组成及其工作原理 3. 药检的一般步骤和方法 ★ ★★ ★ ★ ★
学习内容和目的 1. HPLC的定义、特点和类型 2. 色谱仪的组成及其工作原理 3. 药检的一般步骤和方法 ★ ★★ ★ ★ ★
一、概述 1. 高效液相色谱法（ High Performance Liquid Chromatography HPLC）系采用高压流动相，高效 固定相和高灵敏度检测器的现代液相色谱法
一、概述 1. 高效液相色谱法（ High Performance Liquid Chromatography HPLC）系采用高压流动相，高效 固定相和高灵敏度检测器的现代液相色谱法
2.HPLC的特点 类 型 特 点 HPLC LC （经典柱色谱） GC 分离效能高 （理论板数 n） 104～105 10～102 填充柱 >103 毛细管柱=106 分析速度快 几分钟～几十分钟 几小时～十几小时 几分钟～几十分钟 灵敏度高 （最小检出量） UVD 10-9g FD 10-13g 样品量1～10g TCD 10-8g FID 10-13g 适用范围宽 80%有机化合物 制备性分离 20%有机化合物 仪器化程度高 智能化 手工 智能化
2.HPLC的特点 类 型 特 点 HPLC LC （经典柱色谱） GC 分离效能高 （理论板数 n） 104～105 10～102 填充柱 >103 毛细管柱=106 分析速度快 几分钟～几十分钟 几小时～十几小时 几分钟～几十分钟 灵敏度高 （最小检出量） UVD 10-9g FD 10-13g 样品量1～10g TCD 10-8g FID 10-13g 适用范围宽 80%有机化合物 制备性分离 20%有机化合物 仪器化程度高 智能化 手工 智能化
HPLC特别适合分析组分复杂、含量较低的样 品，在中药和中成药的检验中得到广泛的应用。 历版中国药典（一部）中HPLC应用情况 0 200 400 600 800 1000 1200 1995年版 2000年版 2005年版 应用品种数 总品种数 916 992 1146 518 105 12
HPLC特别适合分析组分复杂、含量较低的样 品，在中药和中成药的检验中得到广泛的应用。 历版中国药典（一部）中HPLC应用情况 0 200 400 600 800 1000 1200 1995年版 2000年版 2005年版 应用品种数 总品种数 916 992 1146 518 105 12
3. HPLC的主要类型及其应用 类 型 机 理 固定相 流动相 适用范围 反相键合 相色谱 类似反相分配色谱机理 常用十八烷基键合 相（C18 ODS） 常以甲醇－ 水、乙腈－ 水为底剂 广泛，非（中等）极 性成分、有机酸（碱） 及其盐 正相键 合相色谱 兼有正相分配色谱和吸 附色谱机理 常用氰基、氨基键 合相 非极性或弱 极性溶剂 脂溶性的极性至中等 极性的分子型化合物 离子色谱 类似离子交换色谱机理 强酸（碱）性键合 型离子交换剂 有机阴（阳）离子、 氨基酸和糖类等 手性色谱 利用对映异构体与手性 固定相形成的配合物稳 定性的差异 蛋白类CSP、多糖 CSP、环糊精CSP等 手性化合物的对映异 构体 亲和色谱 利用生物分子间的专一 亲和性 各种键合生物特效 性配基和基团配基 抗体与抗原、酶与底 物、药物与受体等
3. HPLC的主要类型及其应用 类 型 机 理 固定相 流动相 适用范围 反相键合 相色谱 类似反相分配色谱机理 常用十八烷基键合 相（C18 ODS） 常以甲醇－ 水、乙腈－ 水为底剂 广泛，非（中等）极 性成分、有机酸（碱） 及其盐 正相键 合相色谱 兼有正相分配色谱和吸 附色谱机理 常用氰基、氨基键 合相 非极性或弱 极性溶剂 脂溶性的极性至中等 极性的分子型化合物 离子色谱 类似离子交换色谱机理 强酸（碱）性键合 型离子交换剂 有机阴（阳）离子、 氨基酸和糖类等 手性色谱 利用对映异构体与手性 固定相形成的配合物稳 定性的差异 蛋白类CSP、多糖 CSP、环糊精CSP等 手性化合物的对映异 构体 亲和色谱 利用生物分子间的专一 亲和性 各种键合生物特效 性配基和基团配基 抗体与抗原、酶与底 物、药物与受体等
十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图 蒲 公 英 图
十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图 蒲 公 英 图
二、色谱仪及其工作原理 1.贮液罐 2.脱气装置 3.梯度洗脱 4.高压输液泵 5.流动相流 量显示 6.柱前压力表 7.输液泵头 8.过滤器 9.阻尼器 10.进 样装置 11.色谱柱 12.检测器 13.数据处理系统 14.废液贮罐
二、色谱仪及其工作原理 1.贮液罐 2.脱气装置 3.梯度洗脱 4.高压输液泵 5.流动相流 量显示 6.柱前压力表 7.输液泵头 8.过滤器 9.阻尼器 10.进 样装置 11.色谱柱 12.检测器 13.数据处理系统 14.废液贮罐
超声波脱气法 回流脱气法 抽滤脱气法 （一）脱气装置
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在线脱气法
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