第六章转基因动物 冠 湿
1 第六章转基因动物
√稳墨因物(transgeneti anima)/ 用DNA重组技术将人们所需要的目的基因 导入动物的受精卵或早期胚胎内，使外源 目的基因随细胞的分裂而增殖并在体内表 达，且能稳定地遗传给后代的动物。 1982年美国华盛顿大学Palmiter等将大鼠生 长激素基因导入小白鼠的受精卵里，再将这一受 精卵植入借腹怀孕的母鼠体内，生下一个比正常 体格大一倍的“超级小鼠”。 丽 按照转基因小鼠的思路，人们已经成功的获得 了转基因大鼠、鸡、山羊、绵羊、猪、兔、牛、 蛙、鱼等。 2
2 转基因动物（transgenetic animal）是指 用DNA重组技术将人们所需要的目的基因 导入动物的受精卵或早期胚胎内，使外源 目的基因随细胞的分裂而增殖并在体内表 达，且能稳定地遗传给后代的动物。 1982年美国华盛顿大学Palmiter等将大鼠生 长激素基因导入小白鼠的受精卵里，再将这一受 精卵植入借腹怀孕的母鼠体内，生下一个比正常 体格大一倍的“超级小鼠” 。 按照转基因小鼠的思路，人们已经成功的获得 了转基因大鼠、鸡、山羊、绵羊、猪、兔、牛、 蛙、鱼等
第一节动物转基因技术 外源目的基因的分离 转基因技术关键步紧 外源目的基因与转性基因表达启动子、增强子、报告 基因等构件的拼接重组 重组DNA导入生殖细胞或胚胎干细胞 胚胎移植技术 鉴定及筛选 醒 目的基因整合率及表达效率的检测 3
3 第一节 动物转基因技术 外源目的基因的分离 外源目的基因与转性基因表达启动子、增强子、报告 基因等构件的拼接重组 重组DNA导入生殖细胞或胚胎干细胞 胚胎移植技术 鉴定及筛选 目的基因整合率及表达效率的检测 转 基 因 技 术 关 键 步 骤
显微注射法 1.目的基因的制备 2.小鼠的准备和要求 3.受精卵的分离 4.显微注射 5.受精卵的移植 6.转基因小鼠的鉴定 密
4 一、显微注射法 1.目的基因的制备 2.小鼠的准备和要求 3.受精卵的分离 4.显微注射 5.受精卵的移植 6.转基因小鼠的鉴定
受 器 5
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测微仪 连接管 连接管 50毫升玻璃注射器 夹子玻璃注射器 充满 矿物油 测微注射器 聚光管 连持卵管 连注射器 94 94 显微操作仪 平台 94 去除橡皮垫 省略日镜以利作图消晰 图69显微注射仪示意图 6
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显微注射法获得转基因園的成活率 100 90 80 70 目 60 ☑鼠 100 0 即使 10 0 ☑ 注 出生后成活 转基因后代
7 显微注射法获得转基因鼠的成活率
二、逆转录病毒法 步骤： 1.逆转录病毒载体的构建 2选择和培养包装细胞系 3.重组病毒DNA导入包装细胞 4.收集重组病毒颗粒 5.感染胚细胞，使细胞转化 此法是目前制备转基因鸡最 有效和最成功的方法。 ww3n.con3ar装 密 8
8 二、逆转录病毒法 步骤： 1.逆转录病毒载体的构建 2.选择和培养包装细胞系 3.重组病毒DNA导入包装细胞 4.收集重组病毒颗粒 5.感染胚细胞，使细胞转化 此法是目前制备转基因鸡最 有效和最成功的方法
二、逆转录病毒法 转染或感染 感染性病毒 RNA转录 包装 R兴CDNA]LTR 穿梭馥体 RNA转录 一一病毒蛋白 回 A(n 醒 Pr gag po! 不包装 空壳病毒 反转录病毒载体的工作原理：寄生在受体细胞中的重组病毒由 于没有包装信号，能生产病毒RNA和所有蛋白质，但不能包装 成病毒颗粒；病毒载体转化受体细胞后，载体上的包装信号将 使包装蛋白把载体包装成为侵染性的病毒颗粒
9 反转录病毒载体的工作原理：寄生在受体细胞中的重组病毒由 于没有包装信号，能生产病毒RNA和所有蛋白质，但不能包装 成病毒颗粒；病毒载体转化受体细胞后，载体上的包装信号将 使包装蛋白把载体包装成为侵染性的病毒颗粒。 二、逆转录病毒法
逆转录病毒法 原理： 逆转录病毒的核酸为一条单链RNA分子，其基因由两部分 组成，一是顺式作用序列，为病毒复制和整合所必需；二是反 式作用序列，编码病毒的包装蛋白。将外源基因取代反式作用 序列构建成重组载DNA。 另外将包装蛋白基因导入专门的细胞并使之整合到染色体上 形成包装细胞。 如果重组病毒DNA导入这种包装细胞中，病毒包装蛋白能 将DNA包装成具有感染力的重组蛋白颗粒，能浸染动物细胞 而将重组DNA引入宿主细胞 S'LTR 3LTR 4 (A) U3 U5 gag pol env U3 Prom Enh CIs CIS 10
10 二、逆转录病毒法 原理： 逆转录病毒的核酸为一条单链RNA分子，其基因由两部分 组成，一是顺式作用序列，为病毒复制和整合所必需；二是反 式作用序列，编码病毒的包装蛋白。将外源基因取代反式作用 序列构建成重组载DNA。 另外将包装蛋白基因导入专门的细胞并使之整合到染色体上， 形成包装细胞。 如果重组病毒DNA导入这种包装细胞中，病毒包装蛋白能 将DNA包装成具有感染力的重组蛋白颗粒，能浸染动物细胞 而将重组DNA引入宿主细胞