第三章 细胞生物学研究方法
第三章 细胞生物学研究方法
进行初步观察 形成可验证的假说 设计对照试验 查阅已 有知识 收集资料 解释结果 作出合理结论
进行初步观察 形成可验证的假说 设计对照试验 收集资料 解释结果 作出合理结论 查阅已 有知识
细胞生物学研究方法 ·细胞形态结构的观察方法 ·细胞组分的分析方法 ·细胞培养、细胞工程与显微操作技术
细胞生物学研究方法 • 细胞形态结构的观察方法 • 细胞组分的分析方法 • 细胞培养、细胞工程与显微操作技术
一、细胞形态结构的观察方法 ·光学显微镜技术(Light microscopy) ·电子显微镜技术(Electron microscopy) ·扫描隧道显微镜技术(scanning tunneling microscopy)
一、细胞形态结构的观察方法 • 光学显微镜技术（Light microscopy） • 电子显微镜技术（Electron microscopy） • 扫描隧道显微镜技术（scanning tunneling microscopy）
(一)光学显微镜技术 ·善通复式光学星傲镜技术(Light microscopy) ·相差星微镜技术(Phase-contrast microscopy) 微分千涉显微镜技术(Differential-.interference microscopy) ·荧光星微镜技术(Fluorescence Microscopy) 扫描共聚焦荧光显微镜技术(Confocal scanning fluorescence Microscopy
（一）光学显微镜技术 • 普通复式光学显微镜技术（Light microscopy） • 相差显微镜技术（Phase-contrast microscopy） • 微分干涉显微镜技术（Differential-interference microscopy） • 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） • 扫描共聚焦荧光显微镜技术（Confocal scanning fluorescence Microscopy ）
1、善通光学显微镜技术 ·结构 -光学放大象统：物镜和目镜 一照明系统：光源、折光镜和聚光镜 机械和支架系统
1、普通光学显微镜技术 • 结构 –光学放大系统：物镜和目镜 –照明系统：光源、折光镜和聚光镜 –机械和支架系统
·分辨率：指区分开两个质点问的最小 距离。 -d=0.61A/NA (NA=n sin 0 d:分辨率 入：波长 NA:数值孔径 1:物镜与物体间介质折射率 日：光束进入物镜的半角
• 分辨率：指区分开两个质点间的最小 距离。 –d=0.61λ/ NA （NA= ηsinθ） d：分辨率 λ：波长 NA：数值孔径 η：物镜与物体间介质折射率 θ：光束进入物镜的半角
2、相差显微镜技术 ·相差显微镜与善通显微镜的区别： 一在物镜后装有一块“相差板”，偏转的光线分 别通过相差板的不同区城，由于相差板上部分 区域有吸光物质，使两组光线之间增添了新的 光程差，从而对样品不同密度造成的相位差起 “夸大”作用。最后这两组光线经过透镜又会 聚成一束，发生互相叠加或抵消的干涉现象， 表现出肉眼可见的明暗区别
2、相差显微镜技术 • 相差显微镜与普通显微镜的区别： – 在物镜后装有一块“相差板”，偏转的光线分 别通过相差板的不同区域，由于相差板上部分 区域有吸光物质，使两组光线之间增添了新的 光程差，从而对样品不同密度造成的相位差起 “夸大”作用。最后这两组光线经过透镜又会 聚成一束，发生互相叠加或抵消的干涉现象， 表现出肉眼可见的明暗区别
·相差显微镜将光程差或相位差转换为振幅差，即 明暗差别。相差显微镜的样品不需染色，可以观 察活细胞。 一光线通过不同密度的物质附，其滞留程度也不 同，密度大则光的滞留时间长，密度小则滞留 时问短
• 相差显微镜将光程差或相位差转换为振幅差，即 明暗差别。相差显微镜的样品不需染色，可以观 察活细胞。 – 光线通过不同密度的物质时，其滞留程度也不 同，密度大则光的滞留时间长，密度小则滞留 时间短
3、微分干涉显微镜技术 ·偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别 转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体 感。适于研究话细胞中较大的细胞器
3、微分干涉显微镜技术 • 偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别 转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体 感。适于研究活细胞中较大的细胞器