实验一细胞的显微结构—光镜 下的细胞器 College of Life Science and Technology,XINJIANG Univercity
实验一 细胞的显微结构——光镜 下的细胞器 College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
实验目的 学习并掌握制作植物细胞撕片、石蜡切片 和涂片技术。 ● 学会利用光学显微镜观察植物细胞撕片、 石蜡切片和涂片。 ● 认识并能识别光学显微镜下的各种细胞器 的形态、大小、分布特点及数目
一、实验目的 ⚫ 学习并掌握制作植物细胞撕片、石蜡切片 和涂片技术。 ⚫ 学会利用光学显微镜观察植物细胞撕片、 石蜡切片和涂片。 ⚫ 认识并能识别光学显微镜下的各种细胞器 的形态、大小、分布特点及数目
二、 实验原理 光学显微镜的种类很多，一般常用的是复式 显微镜。复式显微镜的式样虽有不同，但它们的 基本结构相同，都是由光学部分和机械部分构成。 光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨 的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信 息的光学仪器。表面为曲面的玻璃或其他透明材 料制成的光学透镜可以使物体放大成像，光学显 微镜就是利用这一原理把微小物体放大到人眼足 以观察的尺寸
二、实验原理 光学显微镜的种类很多，一般常用的是复式 显微镜。复式显微镜的式样虽有不同，但它们的 基本结构相同，都是由光学部分和机械部分构成。 光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨 的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信 息的光学仪器。表面为曲面的玻璃或其他透明材 料制成的光学透镜可以使物体放大成像，光学显 微镜就是利用这一原理把微小物体放大到人眼足 以观察的尺寸
实验原理 光学显微镜通常采用两级放大，分别由物镜和目 镜完成。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第 一级放大后成一倒立的实象，然后此实像再被目镜 作第二级放大，成一虚象，人眼看到的就是虚像。 而显微镜的总放大倍率就是物镜放大倍率和目镜放 大倍率的乘积。光学显微镜一般由载物台、聚光照 明系统、物镜，目镜和调焦机构组成
光学显微镜通常采用两级放大，分别由物镜和目 镜完成。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第 一级放大后成一倒立的实象，然后此实像再被目镜 作第二级放大，成一虚象，人眼看到的就是虚像。 而显微镜的总放大倍率就是物镜放大倍率和目镜放 大倍率的乘积。光学显微镜一般由载物台、聚光照 明系统、物镜，目镜和调焦机构组成。 二、实验原理
二、实验原理 由于光学显微镜的最高分辨力为0.2μm,而细胞器大部分 在0.1m和10m之间，所以光学显微镜下可见到一般细胞器 的外部形态。较大的细胞器如细胞核，线粒体，质体等还可 见到其细微结构。 细胞器往往由特殊物质组成，因而可通过特殊物质的特 异染色把它们区别开来。每种细胞器都有其特殊形态，大小 分布及数目，这是我们判断，识别细胞器的依据。而每种细 胞器在不同细胞，不同发育时期和不同生理状态下的形态大 小会有所不同。所以细胞器的观察可用来判断细胞的生理状 态和发育情况
由于光学显微镜的最高分辨力为0.2µm，而细胞器大部分 在0.1µm和10µm之间，所以光学显微镜下可见到一般细胞器 的外部形态。较大的细胞器如细胞核，线粒体，质体等还可 见到其细微结构。 细胞器往往由特殊物质组成，因而可通过特殊物质的特 异染色把它们区别开来。每种细胞器都有其特殊形态，大小 分布及数目，这是我们判断，识别细胞器的依据。而每种细 胞器在不同细胞，不同发育时期和不同生理状态下的形态大 小会有所不同。所以细胞器的观察可用来判断细胞的生理状 态和发育情况。 二、实验原理
三、实验用品和试剂 1. 器材：光学显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、无菌注 射针头、消毒棉球。 2. 试剂： ①Ringeri溶液 氯化钠 0.85g（变温动物用0.65g) 氯化钾 0.25g 氯化钙 0.03g 蒸馏水 100ml 注：Ringer液是最简单的平衡盐溶液 (balanced salt solution,BSS),它的作用是维持细胞渗透压平衡， 保持H稳定及提供简单的营养
三、实验用品和试剂 1．器材：光学显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、无菌注 射针头、消毒棉球。 2．试剂： ①Ringer溶液 氯化钠 0.85g（变温动物用0.65g） 氯化钾 0.25g 氯化钙 0.03g 蒸馏水 100ml 注：Ringer液是最简单的平衡盐溶液（balanced salt solution，BSS），它的作用是维持细胞渗透压平衡， 保持pH稳定及提供简单的营养
三、实验用品和试剂 ②1%、1/5000詹姆斯绿B(Janus green B)溶液 称取50mg詹姆斯绿B溶于5 ml Ringer溶液中， 稍加微热(30~400C)使之溶解，用滤纸过 滤后，即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备 用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。 ③Wright染液 ④70%酒精 ⑤香柏油 3.材料：洋葱、石蜡切片、涂片
②1%、1/5000詹姆斯绿B (Janus green B)溶液 称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中， 稍加微热（30～400C）使之溶解,用滤纸过 滤后,即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备 用。最好现用现配,以保持它的充分氧化能力。 ③Wright 染液 ④70%酒精 ⑤香柏油 3．材料：洋葱、石蜡切片、涂片 三、实验用品和试剂
瑞氏(Wr ight)染色法是目前应用最为广泛的染色法之一。 染色原理 瑞氏染料中含有伊红及亚甲蓝。伊红呈酸性，亚甲蓝呈 碱性，细胞核中核酸和蛋白质以及原始细胞的胞质均为酸 性物质，可与亚甲蓝起作用而被染成蓝色；同时，胞质中 的血红蛋白可与伊红起作用而被染成淡红色。又因为酸碱 度的变化可影响蛋白质与染料结合，瑞氏染色法的H为 6.4~6.8。加上缓冲液的目的是：偏碱性的染料可与缓冲 液中的酸基起作用，偏酸性的染料可与缓冲液中的碱基起 作用，因此能维持染色的一定酸碱度，使细胞的结构更清 晰可辨
• 瑞氏(Wright)染色法是目前应用最为广泛的染色法之一。 • 染色原理 瑞氏染料中含有伊红及亚甲蓝。伊红呈酸性，亚甲蓝呈 碱性，细胞核中核酸和蛋白质以及原始细胞的胞质均为酸 性物质，可与亚甲蓝起作用而被染成蓝色；同时，胞质中 的血红蛋白可与伊红起作用而被染成淡红色。又因为酸碱 度的变化可影响蛋白质与染料结合，瑞氏染色法的pH为 6.4～6.8。加上缓冲液的目的是：偏碱性的染料可与缓冲 液中的酸基起作用，偏酸性的染料可与缓冲液中的碱基起 作用，因此能维持染色的一定酸碱度，使细胞的结构更清 晰可辨
四、实验内容 1. 观察细胞核及核仁在不同细胞中的分布情况： ①细胞核及核仁（肝切片，蛙卵巢切片）（伊红-苏木 精染色) ②多核及多核仁现象（横纹肌切片，蛙卵巢切片) (伊红-苏木精染色) ③核形态差异（血细胞涂片) )(Wr ight染色) 2.中心体（马蛔虫受精卵切片)（巴西木素染色） 3.线粒体（兔肝切片，肾切片，植物细胞线粒体撕片) (Janus green B染色)
四、实验内容 1．观察细胞核及核仁在不同细胞中的分布情况： ①细胞核及核仁（肝切片，蛙卵巢切片）(伊红-苏木 精染色) ②多核及多核仁现象（横纹肌切片，蛙卵巢切片） (伊红-苏木精染色) ③核形态差异 （血细胞涂片）(Wright染色) 2．中心体（马蛔虫受精卵切片）(巴西木素染色) 3．线粒体（兔肝切片，肾切片，植物细胞线粒体撕片） （Janus green B 染色）
五、实验相关技术 1.石蜡切片制作基本技术 石蜡切片（paraffin section)组织学常规制片技术中 最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞 组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、 观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已 相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。光镜下观 察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织 多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺 乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；
五、实验相关技术 1.石蜡切片制作基本技术 石蜡切片（paraffin section） 组织学常规制片技术中 最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞 组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、 观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已 相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。光镜下观 察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织 多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺 乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；