XINJIANG UNIVERSITY 实验七 DNA的细胞化学 Feulgen,反应 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
College of Life Science and Technology, XINJIANG University 实 验 七 DNA的细胞化学 —Feulgen反应
一、实验目的 了解Feul gen反应的原理，掌握有关的操作方法。 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
College of Life Science and Technology, XINJIANG University 了解Feulgen反应的原理，掌握有关的操作方法。 一、实验目的
二、实验原理 DNA是由许多单核苷酸聚合而成的多核苷酸，每个 单核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成.。DNA经 1mo/L盐酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键 打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基， 这些醛基与Schiff试剂反应。 HCI CH,OH CHO F(SO2H)2 H,OH 0=P一0H 0=P一0H 0 0 DNA片段 产生醛基 红紫色化合物 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
College of Life Science and Technology, XINJIANG University DNA是由许多单核苷酸聚合而成的多核苷酸，每个 单核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成.。DNA经 1mol/L盐酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键 打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基， 这些醛基与Schiff试剂反应。 二、实验原理
二、实验原理 Schiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸 钠作用，形成无色的品红液，当无色品红 与醛基结合则形成紫红色的化合物。因此 凡有DA的地方，都能显示紫红色。紫红 色的产生，是由于反应产物的分子内含有 醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜 色。材料不经过水解或预先用热的三氯醋 酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的， 从而证明了Feul gen反应的专一性。 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
College of Life Science and Technology, XINJIANG University Schiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸 钠作用，形成无色的品红液，当无色品红 与醛基结合则形成紫红色的化合物。因此 凡有DNA的地方，都能显示紫红色。紫红 色的产生，是由于反应产物的分子内含有 醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜 色。材料不经过水解或预先用热的三氯醋 酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的， 从而证明了Feulgen反应的专一性。 二、实验原理
三、实验仪器、材料和试剂 (1)仪器、用具：显微镜、恒温水浴箱、温度计、解 剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸 水纸。 (2)材料：洋葱鳞茎或根尖。 (3)试剂 1)1mol/儿盐酸的配制：取82.5ml密度1.19g/ml 的浓盐酸加蒸馏水至1000ml。 2)亚硫酸水：取200m1自来水，加10ml10%偏重 亚硫酸钠（或偏重亚硫酸钾)水溶液和10ml1mo1/儿 HC1,三者于使用前混匀。 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
College of Life Science and Technology, XINJIANG University ⑴仪器、用具：显微镜、恒温水浴箱、温度计、解 剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸 水纸。 ⑵材料：洋葱鳞茎或根尖。 ⑶试剂 1）1mol/L盐酸的配制：取82.5ml密度1.19 g/ml 的浓盐酸加蒸馏水至1000ml。 2）亚硫酸水：取200ml自来水，加10ml10%偏重 亚硫酸钠（或偏重亚硫酸钾）水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者于使用前混匀。 三、 实验仪器、材料和试剂
洋葱鳞茎 洋葱根 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
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三、实验仪器、材料和试剂 3)Schiff试剂的配制及保存：称取0.5g碱性品红加入 到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶)，时时振荡， 继续煮5min（勿使之沸腾)，使之充分溶解。然后冷 却至50C时用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/LHCl 冷却至25°℃时，加入0.5gNa2S205（偏重亚硫酸钠)， 充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h(有 时需2-3d)，使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活 性炭，用力振荡1min,然后用粗滤纸过滤于棕色瓶中， 封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀，贮于 4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜 色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之再转变 为无色时，仍可使用。 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
College of Life Science and Technology, XINJIANG University 3）Schiff试剂的配制及保存：称取0.5g碱性品红加入 到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡， 继续煮5min（勿使之沸腾），使之充分溶解。然后冷 却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1mol/L HCl， 冷却至25℃时，加入0.5g Na2S2O5（偏重亚硫酸钠）， 充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h（有 时需2-3d），使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活 性炭，用力振荡1min，然后用粗滤纸过滤于棕色瓶中， 封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀，贮于 4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜 色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之再转变 为无色时，仍可使用。 三、 实验仪器、材料和试剂
四、方法与步骤 1.将洋葱鳞茎内表皮（或根尖）或放在1mol/儿盐酸中， 加热到60°C水解8-10min. 2.蒸馏水洗3次，每次1min。 3.Schiffi试剂避光染色30min。 4.用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1min。 5.蒸馏水洗5min。（或5次，每次1min) 。 6.将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖玻片， 压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。 7.显微镜检查，细胞中凡是有DNA的部位应呈现紫红 色的阳性反应。 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
College of Life Science and Technology, XINJIANG University 四、 方法与步骤 1.将洋葱鳞茎内表皮(或根尖)或放在1mol/L盐酸中， 加热到60℃水解8-10min. 2.蒸馏水洗3次，每次1min。 3.Schiff试剂避光染色30 min。 4.用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1 min。 5.蒸馏水洗5 min。（或5次，每次1min） 。 6.将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖玻片， 压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。 7.显微镜检查，细胞中凡是有DNA的部位应呈现紫红 色的阳性反应
米 对照片 方法一：材料不经1mo1/L盐酸水解，直接放在 Schiff试剂中染色，然后按步骤4-7制片观察。 (方法二：先将材料放在5%三氯醋酸中90°℃水浴 15min,主要把DA抽提掉，然后按步骤1-7制 片观察。) College of Life Science and Technology,XINJIANG University
College of Life Science and Technology, XINJIANG University 方法一：材料不经1mol/L盐酸水解，直接放在 Schiff试剂中染色，然后按步骤4-7制片观察。 （方法二：先将材料放在5%三氯醋酸中90℃水浴 15 min，主要把DNA抽提掉，然后按步骤1-7制 片观察。） * 对照片
Feulgen反应对照结果 (洋葱鳞茎表皮细胞) 洋葱鳞茎表皮细胞Feulgen反应 College of Life Science and Technology,XINJIANG University
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