第四章 有害物质的测定 ▪ 一、测定意义 ▪ 二、农药残留量的测定 ▪ （一）有机氯农药残留量的测定 ▪ 1、气相色谱法 ▪ 2、薄层色谱法 ▪ 3、高效液相色谱法 ▪ （二）有机磷农药残留量的测定 ▪ 1、气相色谱法 ▪ 2、薄层色谱法 ▪ 3、高效液相色谱法
第四章 有害物质的测定 ▪ 一、测定意义 ▪ 二、农药残留量的测定 ▪ （一）有机氯农药残留量的测定 ▪ 1、气相色谱法 ▪ 2、薄层色谱法 ▪ 3、高效液相色谱法 ▪ （二）有机磷农药残留量的测定 ▪ 1、气相色谱法 ▪ 2、薄层色谱法 ▪ 3、高效液相色谱法
▪ 三、有害元素的测定 ▪ （一）铅的测定 ▪ 1、双硫腙比色法 ▪ ①原理：样品经消化后，在pH=8～9时Pb2+ + 双硫腙 →红色螯合物，可被三氯甲烷、四氯化碳等有机溶 剂萃取，加入盐酸羟胺、氰化钾、柠檬酸铵，可防 止Fe、Cu、Zn等干扰，比较颜色深浅可测Pb浓度 ▪ ②测定 ▪ 吸取10μg/ml Pb标准溶液0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5ml分 液漏斗中，加入1％HNO3 20ml加入柠檬酸铵/盐酸羟 胺/氰化钾/三氯甲烷于λ=510nm测A ▪ 同样测待测液，绘制标准溶液 ▪ 2、原子吸收分光光度法（259-262）
▪ 三、有害元素的测定 ▪ （一）铅的测定 ▪ 1、双硫腙比色法 ▪ ①原理：样品经消化后，在pH=8～9时Pb2+ + 双硫腙 →红色螯合物，可被三氯甲烷、四氯化碳等有机溶 剂萃取，加入盐酸羟胺、氰化钾、柠檬酸铵，可防 止Fe、Cu、Zn等干扰，比较颜色深浅可测Pb浓度 ▪ ②测定 ▪ 吸取10μg/ml Pb标准溶液0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5ml分 液漏斗中，加入1％HNO3 20ml加入柠檬酸铵/盐酸羟 胺/氰化钾/三氯甲烷于λ=510nm测A ▪ 同样测待测液，绘制标准溶液 ▪ 2、原子吸收分光光度法（259-262）
▪ 四、黄曲霉毒素AFTB1的测定（P236-239) ▪ （一）方法原理（薄层色谱法） ▪ 经有机溶剂提取、净化、浓缩，经薄层色谱分离，在365nm 紫外光下产生蓝紫色荧光，据薄层板上显示荧光的最低检出量 测定黄曲霉毒素B1的含量。 ▪ （二）样品预处理 ▪ 1、提取：根据性质，可选用甲醇、氯仿为溶剂。油脂高的需用 己烷、石油醚脱除。用甲醇：水=55：45萃取（AFT B1易与蛋 白质大分子包围）AFT B1 ▪ 2、净化：用乙醚、己烷去油脂、色素、用甲醇、氯仿洗下AFT, 采用液—液分配萃取法 ▪ 3、浓缩：蒸发皿中挥干后再溶解,溶解液为苯—乙腈液 ▪ （三）样品测定 ▪ 1、薄层板的制备选择吸附剂（硅胶G） 加水成糊，涂布薄层 ▪ 2、点样（P238) 3、展开 4、观察 5、验证试验 6、定量（四） 计算 (239) ▪ XB1 = (0.0004×1000) / [(V1×w) / V2]
▪ 四、黄曲霉毒素AFTB1的测定（P236-239) ▪ （一）方法原理（薄层色谱法） ▪ 经有机溶剂提取、净化、浓缩，经薄层色谱分离，在365nm 紫外光下产生蓝紫色荧光，据薄层板上显示荧光的最低检出量 测定黄曲霉毒素B1的含量。 ▪ （二）样品预处理 ▪ 1、提取：根据性质，可选用甲醇、氯仿为溶剂。油脂高的需用 己烷、石油醚脱除。用甲醇：水=55：45萃取（AFT B1易与蛋 白质大分子包围）AFT B1 ▪ 2、净化：用乙醚、己烷去油脂、色素、用甲醇、氯仿洗下AFT, 采用液—液分配萃取法 ▪ 3、浓缩：蒸发皿中挥干后再溶解,溶解液为苯—乙腈液 ▪ （三）样品测定 ▪ 1、薄层板的制备选择吸附剂（硅胶G） 加水成糊，涂布薄层 ▪ 2、点样（P238) 3、展开 4、观察 5、验证试验 6、定量（四） 计算 (239) ▪ XB1 = (0.0004×1000) / [(V1×w) / V2]
▪ 食品分析方法的建立 ▪ 食品分析方法的建立主要从两个方面考虑 ▪ 1、样品处理 ▪ 是食品分析的前提 ▪ 应根据不同样品采用不同方法进行样品处理，采取的措施：分离、 掩蔽 ▪ A.待测组分的性质 ▪ 如黄曲霉毒素AFT B1,难溶于水、己烷、戊烷、石油醚、乙醚 ▪ 易溶于氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、油对光、热、酸稳定,对碱、 氧化剂不稳定,在365nm紫外光照射下（激发λ=425nm） ▪ B.被测食品样品的特征 ▪ 根据不同食品样品的不同特征，采取相应的样品处理方法;提取： 根据性质，可选用甲醇、氯仿为溶剂。油脂高的需用己烷、石油 醚脱除。 ▪ 用甲醇：水=55：45萃取（AFT B1易与蛋白质大分子包围）AFT B1 ▪ 净化：用乙醚、己烷去油脂、色素、用甲醇、氯仿洗下AFT,采 用液—液分配法,色谱柱分离 ▪ 浓缩：蒸发皿中挥干后再溶解,溶解液为苯—乙腈液
▪ 食品分析方法的建立 ▪ 食品分析方法的建立主要从两个方面考虑 ▪ 1、样品处理 ▪ 是食品分析的前提 ▪ 应根据不同样品采用不同方法进行样品处理，采取的措施：分离、 掩蔽 ▪ A.待测组分的性质 ▪ 如黄曲霉毒素AFT B1,难溶于水、己烷、戊烷、石油醚、乙醚 ▪ 易溶于氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、油对光、热、酸稳定,对碱、 氧化剂不稳定,在365nm紫外光照射下（激发λ=425nm） ▪ B.被测食品样品的特征 ▪ 根据不同食品样品的不同特征，采取相应的样品处理方法;提取： 根据性质，可选用甲醇、氯仿为溶剂。油脂高的需用己烷、石油 醚脱除。 ▪ 用甲醇：水=55：45萃取（AFT B1易与蛋白质大分子包围）AFT B1 ▪ 净化：用乙醚、己烷去油脂、色素、用甲醇、氯仿洗下AFT,采 用液—液分配法,色谱柱分离 ▪ 浓缩：蒸发皿中挥干后再溶解,溶解液为苯—乙腈液
▪ 2、选择适宜的测定方法 ▪ ①建立测定方法的依据 ▪ 根据待测组分的性质特点及要求进行选择 ▪ ②建立分析方法的原理及技术 ▪ A.分离方法、分析方法的确定 ▪ 一般采用提取、净化、浓缩步骤 ▪ 如：AFTB1可采用荧光分光光度法进行测定。 ▪ 激发λ=365nm，发射λ425nm ▪ 可采用薄层色谱法进行定性、定量分析。关键是选择良好的吸附 剂（硅胶G）和适宜的展开剂（乙醚、丙酮+氯仿） ▪ B.进样量的确定 ▪ 稀释定量：样液中AFTB1荧光点强度与AFTB1标准点最低检出量 （0.0004μg）的荧光强度一致（5μg/Kg）若不一致，再稀释至一 致为止。 ▪ C.论证所用方法的可靠性 ▪ 通常采用测定回收率方法。还可与仲裁方法（或标准方法）比 较。（如不溶性膳食纤维测定）
▪ 2、选择适宜的测定方法 ▪ ①建立测定方法的依据 ▪ 根据待测组分的性质特点及要求进行选择 ▪ ②建立分析方法的原理及技术 ▪ A.分离方法、分析方法的确定 ▪ 一般采用提取、净化、浓缩步骤 ▪ 如：AFTB1可采用荧光分光光度法进行测定。 ▪ 激发λ=365nm，发射λ425nm ▪ 可采用薄层色谱法进行定性、定量分析。关键是选择良好的吸附 剂（硅胶G）和适宜的展开剂（乙醚、丙酮+氯仿） ▪ B.进样量的确定 ▪ 稀释定量：样液中AFTB1荧光点强度与AFTB1标准点最低检出量 （0.0004μg）的荧光强度一致（5μg/Kg）若不一致，再稀释至一 致为止。 ▪ C.论证所用方法的可靠性 ▪ 通常采用测定回收率方法。还可与仲裁方法（或标准方法）比 较。（如不溶性膳食纤维测定）
思考题： 1、简述有机氯农药残留量的测定方法。 2、简述有机磷农药残留量的测定方法。 3、简述有害元素的测定方法。 4、简述 铅的测定方法。 5、简述黄曲霉毒素AFTB1的测定方法
思考题： 1、简述有机氯农药残留量的测定方法。 2、简述有机磷农药残留量的测定方法。 3、简述有害元素的测定方法。 4、简述 铅的测定方法。 5、简述黄曲霉毒素AFTB1的测定方法