第十六章糖类药物 糖类广布于生物体中单糖、低聚糖和多糖 多糖类药物在抗凝、降血脂、提高机体免疫和抗 肿瘤、抗辐射方面都具有显著药理作用与疗效。 在细胞内的存在方式有游离型与结合型两种。结合 型多糖有糖蛋白、脂多糖。 糖基在糖蛋白分子中的作用有的与抗原性有关,有 的与细胞“识别”功能有关
第十六章 糖类药物 糖类广布于生物体中单糖、低聚糖和多糖。 多糖类药物在抗凝、降血脂、提高机体免疫和抗 肿瘤、抗辐射方面都具有显著药理作用与疗效。 在细胞内的存在方式有游离型与结合型两种。结合 型多糖有糖蛋白、脂多糖。 糖基在糖蛋白分子中的作用有的与抗原性有关，有 的与细胞“识别”功能有关
第一节糖类药物制备的一般方法 游离单糖及小分子寡糖易溶于冷水及温乙醇。 用水或在中性条件下以50%乙醇,也可以用82%乙 醇,在70~78℃下回流提取。溶剂用量一般为材料的 20倍,需多次提取。 植物材料磨碎经乙醚或石油醚脱脂,拌加碳酸钙, 以50%乙醇温浸,浸液合并,于40~45℃减压浓缩至 适当体积,用中性醋酸铅去杂蛋白及其他杂质,铅离 子可通H2S除去,再浓缩至粘稠状 以甲醇或乙醇温浸,去不溶物如无机盐或残留蛋白 质等
第一节 糖类药物制备的一般方法 游离单糖及小分子寡糖易溶于冷水及温乙醇。 用水或在中性条件下以50％乙醇，也可以用82％乙 醇，在70～78℃下回流提取。溶剂用量一般为材料的 20倍，需多次提取。 植物材料磨碎经乙醚或石油醚脱脂，拌加碳酸钙， 以50％乙醇温浸，浸液合并，于40～45℃减压浓缩至 适当体积，用中性醋酸铅去杂蛋白及其他杂质，铅离 子可通H2S除去，再浓缩至粘稠状。 以甲醇或乙醇温浸，去不溶物如无机盐或残留蛋白 质等
醇液经活性炭脱色、浓缩、冷却、滴加乙醚, 或置于硫酸干燥器中旋转,析出结晶。单糖或小分子 寡糖也可以在提取后,用吸附层析法或离子交换法进 行纯化。 多糖的分离与纯化 多糖可来自动物、植物和微生物,植物体内含有 水解多糖衍生物的酶,必须抑制或破坏酶的作用后, 才能制取天然存在形式的多糖。 使多糖免受到内原酶的作用 速冻冷藏是保存提取多糖材料的有效方法
醇液经活性炭脱色、浓缩、冷却、滴加乙醚， 或置于硫酸干燥器中旋转，析出结晶。单糖或小分子 寡糖也可以在提取后，用吸附层析法或离子交换法进 行纯化。 二、多糖的分离与纯化 多糖可来自动物、植物和微生物 ，植物体内含有 水解多糖衍生物的酶，必须抑制或破坏酶的作用后， 才能制取天然存在形式的多糖。 使多糖免受到内原酶的作用。 速冻冷藏是保存提取多糖材料的有效方法
昆布多糖、果聚糖、糖原易溶于水;壳多糖与纤 维素溶于浓酸;直链淀粉易溶于稀碱;酸性粘多糖 常与蛋白质结合在一起,提取分离时,通常先用蛋 白酶或浓碱、浓中性盐解离蛋白质与糖的结合键后, 用水提取,以乙醇或十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 沉淀酸性多糖,最后用离子交换色谱法进一步纯化 (一)多糖的提取 提取多糖时,一般先需进行脱脂,以便多糖释放。 方法是将材料粉碎,用甲醇或1:1乙醇乙醚混合液, 加热搅拌1~3小时,也可用石油醚脱脂。动物材料 可用丙酮脱脂、脱水处理
昆布多糖、果聚糖、糖原易溶于水；壳多糖与纤 维素溶于浓酸；直链淀粉易溶于稀碱；酸性粘多糖 常与蛋白质结合在一起，提取分离时，通常先用蛋 白酶或浓碱、浓中性盐解离蛋白质与糖的结合键后， 用水提取，以乙醇或十六烷基三甲基溴化铵（CTAB） 沉淀酸性多糖，最后用离子交换色谱法进一步纯化。 （－）多糖的提取 提取多糖时，一般先需进行脱脂，以便多糖释放。 方法是将材料粉碎，用甲醇或1∶1乙醇乙醚混合液， 加热搅拌1～3小时，也可用石油醚脱脂。动物材料 可用丙酮脱脂、脱水处理
多糖的提取方法主要有以下几种: 1、难溶于冷水、热水,可溶于稀碱液者 这一类多糖主要是不溶性胶类,如木聚精、半乳聚 糖等。用冷水浸润材料后用0.5mo/ L Naoh提取 提取液用盐酸中和、浓缩后,加乙醇沉淀得多糖。 如在稀碱中仍不易溶出者,可加入硼砂,对甘露 聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸络合物的多糖,此法 可得相当纯的物质 2、易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者 材料用冷水浸过,用热水提取,必要时可加热至 80~90℃搅拌提取
多糖的提取方法主要有以下几种： 1、难溶于冷水、热水，可溶于稀碱液者 这一类多糖主要是不溶性胶类，如木聚精、半乳聚 糖等。用冷水浸润材料后用0.5mol／L NaOH提取， 提取液用盐酸中和、浓缩后，加乙醇沉淀得多糖。 如在稀碱中仍不易溶出者，可加入硼砂，对甘露 聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸络合物的多糖，此法 可得相当纯的物质。 2、易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者 材料用冷水浸过，用热水提取，必要时可加热至 80～90℃搅拌提取
提取液用正丁醇与氯仿混合液除去杂蛋白(或用 氯乙酸除杂蛋白),离心除去杂蛋白后的清液, 透析后用乙醇沉淀得多糖 3、粘多糖 有些粘多糖可用水或盐溶液直接提取,但因大部 粘多糖与蛋白质结合于细胞中,因此需用酶解法或 碱解法使糖-白质间的结合键断裂,促使多糖释放 般组织中存在多种粘多糖。需要对粘多糖进行 分离纯化
提取液用正丁醇与氯仿混合液除去杂蛋白（或用 三氯乙酸除杂蛋白），离心除去杂蛋白后的清液， 透析后用乙醇沉淀得多糖。 3、粘多糖 有些粘多糖可用水或盐溶液直接提取，但因大部 粘多糖与蛋白质结合于细胞中，因此需用酶解法或 碱解法使糖-白质间的结合键断裂，促使多糖释放。 一般组织中存在多种粘多糖。需要对粘多糖进行 分离纯化
(1)碱解法多糖与蛋白质结合的糖肽键对碱不稳 定,故可用碱解法使糖与蛋白质分开 但若硫酸基与邻羟基处于反式结构或硫酸基在C 3或C-6,此时易发生脱硫作用。这类多糖不宜用碱 解法提取 (2)酶解法理想的工具酶是专一性低的、具有广 泛水解作用的蛋白酶。鉴于蛋白酶不能断裂糖肽键 及其附近的肽键,为除去长肽段,常可与碱解法合 用 常用的酶制剂有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和链霉菌 蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶
（1）碱解法 多糖与蛋白质结合的糖肽键对碱不稳 定，故可用碱解法使糖与蛋白质分开。 但若硫酸基与邻羟基处于反式结构或硫酸基在C- 3或C-6，此时易发生脱硫作用。这类多糖不宜用碱 解法提取。 （2）酶解法 理想的工具酶是专一性低的、具有广 泛水解作用的蛋白酶。鉴于蛋白酶不能断裂糖肽键 及其附近的肽键，为除去长肽段，常可与碱解法合 用。 常用的酶制剂有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和链霉菌 蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶
(二)多糖的纯化 (1)乙醇沉淀法乙醇沉淀法是制备粘多糖的最常 用手段。乙醇的加人,改变了溶液的极性,导致糖溶 解度下降。 向溶液中加入一定浓度的盐,如醋酸钠,醋酸钾 醋酸铵或氯化钠有助于使粘多糖从溶液屮析出,盐的 最终浓度5%即足够。使用醋酸盐的优点是在乙醇中 其溶解度更大,即使在乙醇过量时,也不会发生这类 盐的共沉淀。 可以使用多次乙醇沉淀法脱盐,也可以用超滤法或 分子筛法( Sephadex-10或G-15)进行多糖脱盐
（二）多糖的纯化 （1）乙醇沉淀法 乙醇沉淀法是制备粘多糖的最常 用手段。乙醇的加人，改变了溶液的极性，导致糖溶 解度下降。 向溶液中加入一定浓度的盐，如醋酸钠，醋酸钾、 醋酸铵或氯化钠有助于使粘多糖从溶液中析出，盐的 最终浓度5％即足够。使用醋酸盐的优点是在乙醇中 其溶解度更大，即使在乙醇过量时，也不会发生这类 盐的共沉淀。 可以使用多次乙醇沉淀法脱盐，也可以用超滤法或 分子筛法（SephadexG-10或G-15）进行多糖脱盐
沉淀物可用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水,真空干 燥即可得疏松粉末状产品。 (2)分级沉淀法不同多糖在不同浓度的甲醇、乙 醇或丙酮中的溶解度不同,因此可用不同浓度的有机 溶剂分级沉淀分子大小不同的粘多糖 在Ca2+、Zn2+等二价金属离子的存在下,采用乙醇 分级分离粘多糖可以获得最佳效果 (3)季胺盐络合法粘多糖与一些阳离子表面活 性剂如十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和十六烷基 氯化砒啶(CPC)等能形成季胺盐绺合物 这些络合物在,在离子强度大时,这种络合物可以 解离,溶解,释放
沉淀物可用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水，真空干 燥即可得疏松粉末状产品。 （2）分级沉淀法 不同多糖在不同浓度的甲醇、乙 醇或丙酮中的溶解度不同，因此可用不同浓度的有机 溶剂分级沉淀分子大小不同的粘多糖。 在Ca2+ 、Zn2+等二价金属离子的存在下，采用乙醇 分级分离粘多糖可以获得最佳效果。 （3）季胺盐络合法 粘多糖与一些阳离子表面活 性剂如十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）和十六烷基 氯化砒啶（CPC）等能形成季胺盐络合物。 这些络合物在，在离子强度大时，这种络合物可以 解离，溶解，释放
使其溶解度发生明显改变时的无机盐浓度(临界 盐浓度)这主要取决于聚阴离子的电荷密度。粘多 糖的硫酸化程度影响其电荷密度,根据其临界盐浓 度的差异可以将粘多糖分离。 降低pH可抑制羧基的电离,有利于增强硫酸粘多 糖的选择性沉淀。季胺盐的沉淀能力受其烷基链中 的CH-基数的影响,还可以用不同种季胺盐的混合 物作为酸性粘多糖的分离沉淀剂。 应用季胺盐沉淀多糖是分级分离复杂粘多糖与从 稀溶液中回收粘多糖的最有用方法之
使其溶解度发生明显改变时的无机盐浓度（临界 盐浓度）这主要取决于聚阴离子的电荷密度。粘多 糖的硫酸化程度影响其电荷密度，根据其临界盐浓 度的差异可以将粘多糖分离。 降低pH可抑制羧基的电离，有利于增强硫酸粘多 糖的选择性沉淀。季胺盐的沉淀能力受其烷基链中 的-CH-基数的影响，还可以用不同种季胺盐的混合 物作为酸性粘多糖的分离沉淀剂。 应用季胺盐沉淀多糖是分级分离复杂粘多糖与从 稀溶液中回收粘多糖的最有用方法之一