第十九章放射免疫技术 Radioimmunoassay (RIA) 温州州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 杨建荣
第十九章 放射免疫技术 Radioimmunoassay （RIA） 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 杨建荣
第一节概述 1.概念： 2.分类： 经典的放射免疫测定 (Radioimmunoassay,RIA) 免疫放射测定 (immunoradiometric assay,IRMA)
第一节 概述 1.概念： 2. 分类： 经典的放射免疫测定 （Radioimmunoassay,RIA) 免疫放射测定 （immunoradiometric assay, IRMA)
一、放射性核素的标记 (一) 放射性核素 (二)抗原或抗体 (三)放射性核素标记物的制备 (四)放射性标记物的纯化与鉴定
一、放射性核素的标记 （一）放射性核素 （二）抗原或抗体 （三）放射性核素标记物的制备 （四）放射性标记物的纯化与鉴定
放射性核素 ·自然界的放射性现象 ·常见的标记用放射性核素
放射性核素 • 自然界的放射性现象 • 常见的标记用放射性核素
标记方法： 125I标记方法： 直接法-氯胺T法 间接法
标记方法： 125I 标记方法： 直接法-氯胺T法 间接法
NHCHONH -NHCHONH CH2 CH2 氯胺T Na125I,4'C 125丁 1251 OH OH 酪氨酸残基 二碘酪氨酸
间接法 连接法》 OH OH NSHPP 氯胺T 1251 Na125I CH2 CH2 H-C-C-O-N-C-CH2 H-C-C-O-N-C-CH2 HO O=C-C-CH2 HO O=C-C-CH2
间接法（连接法） CH2 OH O H-C-C-O-N-C-CH2 H O O=C-C-CH2 CH2 OH O H-C-C-O-N-C-CH2 H O O=C-C-CH2 + Na125I 氯胺T 125I NSHPP
标记物的鉴定： (1)放化纯度：>95% 放射性游离碘的含量80% (3)放射性比度： 标记上总放射性活性 比度(Cig)= 标记抗原量
标记物的鉴定： （1）放化纯度：>95% 放射性游离碘的含量80% (3) 放射性比度： 标记上总放射性活性 比度（Ci/g)= 标记抗原量
二、抗体选用 抗血清中含有对其相应抗原的特异性 抗体。目前常以抗原免疫年轻、健康的 纯种小动物而诱发产生多克隆抗体，选 取抗体滴度高的血清，为RIA所用。抗血 清的质量直接影响放射免疫分析方法的 灵活敏度和特异性。检查抗血清质量的 指标主要有亲和常数(K)、免疫交叉反应 率及滴度（或抗体效价）
二、抗体选用 抗血清中含有对其相应抗原的特异性 抗体。目前常以抗原免疫年轻、健康的 纯种小动物而诱发产生多克隆抗体，选 取抗体滴度高的血清，为RIA所用。抗血 清的质量直接影响放射免疫分析方法的 灵活敏度和特异性。检查抗血清质量的 指标主要有亲和常数(K)、免疫交叉反应 率及滴度(或抗体效价)
三、对标准抗原的基本要求 (1)标准抗朱与待测抗原的免疫性必须 致，即它们与抗体的亲和力和特异性应 相同。标准抗原与待测抗原所处的介质 条件应基本相同。 (2)抗原必须纯度度。 (3)标准抗原的量必须准确。 (4)标准抗原应有很好的稳定性
三、对标准抗原的基本要求 (1)标准抗朱与待测抗原的免疫性必须一 致，即它们与抗体的亲和力和特异性应 相同。标准抗原与待测抗原所处的介质 条件应基本相同。 (2)抗原必须纯度度。 (3)标准抗原的量必须准确。 (4)标准抗原应有很好的稳定性