IgG测定的方法学评价
IgG测定的方法学评价
IgG测定方法 ■单向免疫扩散试验 ■免疫比浊法
IgG测定方法 ◼ 单向免疫扩散试验 ◼ 免疫比浊法
单向免疫扩散试验的原理 ■利用可溶性抗原在含有相应抗体的凝胶中向周围 自由扩散，形成浓度梯度，在抗原与抗体浓度比 例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀环，沉淀环直 径的大小与孔中抗原的浓度成正相关，与一系列 的标准品对照，即可计算出样品中待测抗原的含 量
一、单向免疫扩散试验的原理 ◼ 利用可溶性抗原在含有相应抗体的凝胶中向周围 自由扩散，形成浓度梯度，在抗原与抗体浓度比 例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀环，沉淀环直 径的大小与孔中抗原的浓度成正相关，与一系列 的标准品对照，即可计算出样品中待测抗原的含 量
主要试剂与器材 1、待测血清1和2 2、人IgG参考品(IgG含量11.43g/八，50ul) 3、羊抗人IgG诊断血清、1.5%琼脂、生理盐水 4、载玻片、打孔器、三角烧瓶、吸管等
主要试剂与器材 1、待测血清1和2 2、人IgG参考品（IgG含量11.43g/l，50ul） 3、羊抗人IgG诊断血清、1.5％琼脂、生理盐水 4、载玻片、打孔器、三角烧瓶、吸管等
操作步骤 制板：10ml1.5%琼脂+0.1ml抗工gG,颠倒 混匀，浇板，待冷凝。 ■打孔：用打孔器打14个孔，孔径3mm,孔距 10mm. 稀释IgG参考 1 2 3 4 5 生理盐水 4751 501 125 125 125 IgG标谁 25 了4200J4 125 125
操作步骤 ◼ 制板：10ml 1.5％琼脂+0.1ml抗IgG，颠倒 混匀，浇板，待冷凝。 ◼ 打孔：用打孔器打14个孔，孔径3mm，孔距 10mm。 ◼ 稀释IgG参考
加样：五个稀释度的工gG参考和两个待测血清， 每个加两孔，每孔9。 ■温育：放在湿盒中，37℃，24h
◼ 加样：五个稀释度的IgG参考和两个待测血清， 每个加两孔，每孔9μl。 ◼ 温育：放在湿盒中，37℃，24h
结果观察 现象： 加样孔 周围出 现大小 不同的 沉淀环。 上排为5个不同浓度的参考品； 下排为待测血清，下排右2为异常病理血清
结果观察 现象： 加样孔 周围出 现大小 不同的 沉淀环。 上排为5个不同浓度的参考品； 下排为待测血清，下排右2为异常病理血清
记录各沉淀环的直径。 制作标准曲线，求出待测浓度。以直径为横坐标，以 IgG标准品浓度的对数值为纵坐标，制作标准曲线，从 而计算出待测血清中IgG的浓度。 1 2 3 4 5 街测1 测2 生理盐水 475 50 125 125 125 IgG标谁 25 200 125 125 125 IgG稀释度 1:20 1:25 1:50 1:100 1:200 IgG浓度 IgG浓度对徽值 直径1 直径2 平均值径
• 记录各沉淀环的直径。 • 制作标准曲线，求出待测浓度。以直径为横坐标，以 IgG标准品浓度的对数值为纵坐标，制作标准曲线，从 而计算出待测血清中IgG的浓度
注意事项 溶化琼脂的温度控制在56℃左右； ■抗血清与琼脂充分混匀，制板要均匀、 平整、厚度一致，无气泡； ■孔要打得圆整光滑：
注意事项 ◼ 溶化琼脂的温度控制在56℃左右； ◼ 抗血清与琼脂充分混匀，制板要均匀、 平整、厚度一致，无气泡； ◼ 孔要打得圆整光滑；
方法学评价 定量试验； ■方法简便易行，但试验所需时间较长： 灵敏度低； ■影响因素多，误差较大，重复性不好； ▣每批实验均应同步绘制标准曲线； ■目前基本上已被自动化分析所替代
方法学评价 ◼ 定量试验； ◼ 方法简便易行，但试验所需时间较长； ◼ 灵敏度低； ◼ 影响因素多，误差较大，重复性不好； ◼ 每批实验均应同步绘制标准曲线； ◼ 目前基本上已被自动化分析所替代