免疫电泳试验
免疫电泳试验
实验原理 免疫电泳是将区带电泳和双向免疫扩散相结合的一种免疫学 分析技术。 将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因 电泳迁移率的不同而被分离成肉眼不可见的区带，停止电泳 后，在与电泳方向平行的槽内加入相应抗血清，使抗原和抗 体呈双向扩散，已分离的各抗原与相应抗体在琼脂中扩散而 相遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的沉淀弧。 ·根据沉淀弧的数量、位置和形态与已知标准抗原进行比较 可分析待测样品中抗原成分及性质
• 免疫电泳是将区带电泳和双向免疫扩散相结合的一种免疫学 分析技术。 • 将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因 电泳迁移率的不同而被分离成肉眼不可见的区带，停止电泳 后，在与电泳方向平行的槽内加入相应抗血清，使抗原和抗 体呈双向扩散，已分离的各抗原与相应抗体在琼脂中扩散而 相遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的沉淀弧。 • 根据沉淀弧的数量、位置和形态与已知标准抗原进行比较， 可分析待测样品中抗原成分及性质。 实验原理
1抗城的分离 Ag ●r心●● Ag●=● 2向情内加入血清 3扩散和沉淀线形成
主要的试剂和器材 ·人全血清 ·兔抗人全血清 ·1.5%琼脂、0.05mol/LpH8.6巴比妥缓冲 液 ·移液管 ·玻片、刀片、打孔器 ·电泳槽、电泳仪、水浴锅
• 人全血清 • 兔抗人全血清 • 1.5％琼脂、0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲 液 • 移液管 • 玻片、刀片、打孔器 • 电泳槽、电泳仪、水浴锅 主要的试剂和器材
实验步骤 制板将洁净玻片置于水平台上，用移液管 吸取4.5ml熔化的1.5%琼脂加于载玻片 上，待冷凝 2-5mm
• 制板 将洁净玻片置于水平台上，用移液管 吸取4.5ml熔化的1.5％琼脂加于载玻片 上，待冷凝 。 实验步骤 2-5mm
·打孔及开槽（见图）（打一个孔）挑去孔 内的琼脂，槽内琼脂暂不挑出。 4-5mm 2mm 3mm 10mm 中央偏右
• 打孔及开槽（见图）（打一个孔）挑去孔 内的琼脂，槽内琼脂暂不挑出。 4－5mm 10mm 中央偏右 2mm 3mm
加样用微量进样器吸取10μ稀释的正常人全血 清于小孔中。 电泳以0.05mol/LpH8.6巴比妥缓冲液为电 泳缓冲液，将加样后的琼脂板置于电泳槽上 样品孔靠近阴极端，用缓冲液浸湿的双层纱布 搭桥电泳。一般稳定端电压100V,电泳1h,即 可终止电泳。 双扩散取出电泳后的琼脂板，挑出中间槽内的 琼脂，取100μu兔抗人全血清充满槽内，注意勿 外溢。将琼脂板放于湿盒内，水平置于37℃水 浴箱中进行双扩散，24h后观察结果
• 加样 用微量进样器吸取10μι稀释的正常人全血 清于小孔中。 • 电泳 以0.05mol/L pH8.6巴比妥缓冲液为电 泳缓冲液，将加样后的琼脂板置于电泳槽上， 样品孔靠近阴极端，用缓冲液浸湿的双层纱布 搭桥电泳。一般稳定端电压100V，电泳1h，即 可终止电泳。 • 双扩散 取出电泳后的琼脂板，挑出中间槽内的 琼脂，取100μι兔抗人全血清充满槽内，注意勿 外溢。将琼脂板放于湿盒内，水平置于37℃水 浴箱中进行双扩散，24h后观察结果
实验结果 观察沉淀弧的位置和条数，并画出沉淀弧。 19 正常人血清 清蛋悠 绕比G 抗人全血清抗体 免疫球蛋白的迁移范围
• 观察沉淀弧的位置和条数，并画出沉淀弧。 实验结果
注意事项 抗原与抗体浓度比例应适当，否则会使某些成分 不出现沉淀线。 ·所用抗血清最好用两只或两只以上免疫动物的混 合血清，增加抗血清的抗体谱。 浇板时要求厚度均匀，无气泡。打孔挖槽时要求 外壁整齐，防止琼脂破裂。 ，每次电泳后应倒换正负电极或将两槽缓冲液混合 后再使用
• 抗原与抗体浓度比例应适当，否则会使某些成分 不出现沉淀线。 • 所用抗血清最好用两只或两只以上免疫动物的混 合血清，增加抗血清的抗体谱。 • 浇板时要求厚度均匀，无气泡。打孔挖槽时要求 外壁整齐，防止琼脂破裂。 • 每次电泳后应倒换正负电极或将两槽缓冲液混合 后再使用。 注意事项
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