生化技术
生化技术
绪论 ●1定义 生化技术—在生物化学及其相关学科 应用的各种技术,主要指生物体内物质 及其代谢产物,特别是生物大分子的分 离、检测、制备与改造技术
绪论 ⚫ 1定义 ⚫ 生化技术——在生物化学及其相关学科 应用的各种技术，主要指生物体内物质 及其代谢产物，特别是生物大分子的分 离、检测、制备与改造技术
2发展过程 1923 Svedberg设计超速离心机 1925 Warberg发明微量检压仪 ●1930放射性同位素技术在生物化学过程中应用 1931Kuhn柱层析分离a、β-胡萝卜素 1940电泳、层析技术 50-52气相色谱(GC) ●1956 Sanger x射线衍射技术确定蛋白质一级结构 ●1953 Watson、 Crick x射线衍射技术DNA双螺旋结构 1960操纵子学说 1964人工合成胰岛素 1969固定化酶、细胞技术 ●1973基因工程 ●1975细胞工程(杂交瘤技术) ●1990启动人类基因组计划 1996“多莉”羊诞生
2发展过程 ⚫ 1923 Svedberg设计超速离心机 ⚫ 1925 Warberg发明微量检压仪 ⚫ 1930 放射性同位素技术在生物化学过程中应用 ⚫ 1931 Kuhn柱层析分离α、β-胡萝卜素 ⚫ 1940 电泳、层析技术 ⚫ 50-52 气相色谱（GC） ⚫ 1956 Sanger x射线衍射技术确定蛋白质一级结构 ⚫ 1953 Watson、Crick x射线衍射技术 DNA双螺旋结构 ⚫ 1960 操纵子学说 ⚫ 1964 人工合成胰岛素 ⚫ 1969 固定化酶、细胞技术 ⚫ 1973 基因工程 ⚫ 1975 细胞工程（杂交瘤技术） ⚫ 1990 启动人类基因组计划 ⚫ 1996 “多莉”羊诞生
第一篇生化分离技术 ●第一章生物大分子的提取与沉淀分离 技术 生物大分子:蛋白质、酶、核酸、多糖 和脂类
第一篇 生化分离技术 ⚫ 第一章 生物大分子的提取与沉淀分离 技术 ⚫ 生物大分子：蛋白质、酶、核酸、多糖 和脂类
第一节细胞破碎 ●细胞破碎的原因 ●破碎的主要方法:机械法、物理法、化 学法、酶法
第一节 细胞破碎 ⚫ 细胞破碎的原因： ⚫ 破碎的主要方法：机械法、物理法、化 学法、酶法
1机械破碎方法 1.1高速组织捣碎机 原理 ●操作:装料,低速→高速 ●效果:作用强烈,活性物质易受破坏 1.2匀浆器 原理: ●效果:破碎程度较捣碎机高,破坏较少 ●1.3研磨器
1 机械破碎方法 ⚫ 1. 1高速组织捣碎机 ⚫ 原理 ⚫ 操作：装料，低速→高速 ⚫ 效果：作用强烈，活性物质易受破坏 ⚫ 1. 2匀浆器 ⚫ 原理： ⚫ 效果：破碎程度较捣碎机高，破坏较少 ⚫ 1. 3研磨器
2物理破碎 ●2.1温度差破碎法 ●22压力差破碎法 ●2.3超声波破碎法 ●影响因素:样品浓度、超声波频率、功 率、破碎时间 ●操作:冰浴、间歇进行 ●适用于悬浮细胞破碎
2 物理破碎 ⚫ 2.1温度差破碎法 ⚫ 2.2压力差破碎法 ⚫ 2.3超声波破碎法 ⚫ 影响因素：样品浓度、超声波频率、功 率、破碎时间 ⚫ 操作：冰浴、间歇进行 ⚫ 适用于悬浮细胞破碎
3化学破碎法 ●原理:化学试剂改变或破坏细胞膜结构 ●常用试剂:有机溶剂、表面活性剂 4酶学破碎法 ●外加酶制剂或自溶法
⚫ 3化学破碎法 ⚫ 原理：化学试剂改变或破坏细胞膜结构 ⚫ 常用试剂：有机溶剂、表面活性剂 ⚫ 4 酶学破碎法 ⚫ 外加酶制剂或自溶法
第二节提取 1提取的基本概念与影响因素 提取(抽提或萃取): ●主要影响因素: ●a欲提取的物质在所用的溶剂中的溶解度;b该 物质向溶剂扩散的难易 溶解度大小:a溶剂:相似相溶;b温度c等 电点 2蛋白质和酶的提取 ●提取方法:水溶液提取、有机溶剂提取、混合 提取 ●选择方法依据:存在部位、分子结构和溶解性 质
第二节 提取 1 提取的基本概念与影响因素 ⚫ 提取（抽提或萃取）： ⚫ 主要影响因素： ⚫ a 欲提取的物质在所用的溶剂中的溶解度；b该 物质向溶剂扩散的难易 ⚫ 溶解度大小：a 溶剂：相似相溶；b 温度 c等 电点 2 蛋白质和酶的提取 ⚫ 提取方法：水溶液提取、有机溶剂提取、混合 提取 ⚫ 选择方法依据：存在部位、分子结构和溶解性 质
2.1水溶液提取 ●水、稀盐、稀酸、稀碱溶液 ●常用稀盐溶液和缓冲液,应注意控制盐 浓度、温度、p 21.1盐浓度的选择 般用等渗盐溶液。但根据溶解度,有 些蛋白质要用较高浓度盐溶液提取,而 有些则用纯水提取
2.1水溶液提取 ⚫ 水、稀盐、稀酸、稀碱溶液 ⚫ 常用稀盐溶液和缓冲液，应注意控制盐 浓度、温度、pH ⚫ 2.1.1盐浓度的选择 ⚫ 一般用等渗盐溶液。但根据溶解度，有 些蛋白质要用较高浓度盐溶液提取，而 有些则用纯水提取