牛颜冰 基因兄程原理 niuniugood@yahoo.com.cn
基 因 工 程 原 理 牛 颜 冰 niuniugood@yahoo.com.cn
《鷂囚理原理》 第一章导论 第二章基因操作的工具酶 第三章基因克隆的载体 第四章基因克隆的策略 第五章克隆基因的表达 第六章基因工程的基本技术
《基因工程原理》 第一章 导 论 第二章 基因操作的工具酶 第三章 基因克隆的载体 第四章 基因克隆的策略 第五章 克隆基因的表达 第六章 基因工程的基本技术
第二章基因操作的工具酶 Genetic engineering is largely an exercise in carefully controlled enzymology. A variety of enzymes form the basic toolkit of the genetic engineer. e 第一节限制性核酸内切酶及其应用 第二节DNA连接酶及其应用 第三节DNA聚合酶及其应用 第四节修饰性工具酶
第二章 基因操作的工具酶 第一节 限制性核酸内切酶及其应用 第二节 DNA连接酶及其应用 第三节 DNA聚合酶及其应用 第四节 修饰性工具酶 Genetic engineering is largely an exercise in carefully controlled enzymology. A variety of enzymes form the basic toolkit of the genetic engineer
第一节限制性核酸内切酶及其应用 1、限制性核酸内切酶的发现 限制性核酸内切酶的分类合命名 3、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 4、限制性核酸内切酶的消化反应
1、限制性核酸内切酶的发现 2、限制性核酸内切酶的分类合命名 3、II型限制性核酸内切酶的基本特性 4、限制性核酸内切酶的消化反应 第一节 限制性核酸内切酶及其应用
×10-4 大肠杆菌B 大肠杆菌K 10 EOP成斑率 efficiency of plating 50年代初发现了由寄主控制的限制和修饰现象
50年代初发现了由寄主控制的限制和修饰现象 大肠杆菌B 大肠杆菌K 1 1 4×10 — 4 10 — 4 E.O.P 成斑率 efficiency of plating
酶切位点 y噬菌体DNA 不被修饰 被切割 酶切位点 基因组DNA 被修饰 不被切割 Methylation 限制修饰的酶学假说■ 1968年, Meselson和Yuan大肠杆酋K和B中发现了I型限制性懷酸角切酶; 1970年, Smith和Wlox从流。嗜血杆酋中分高化了第一个∏塑限制性 酸向切酶HindⅢ,使得DNA分子的体外精确切割戚局可能
限制—修饰的酶学假说 酶切位点 不被修饰 噬菌体DNA 被切割 酶切位点 被修饰 Methylation 基因组DNA 不被切割 1968年，Meselson 和Yuan从大肠杆菌K和B中发现了I型限制性核酸内切酶； 1970年，Smith和Wilcox从流感嗜血杆菌中分离纯化了第一个II型限制性核 酸内切酶Hind II，使得DNA分子的体外精确切割成为可能
第一节限制性核酸内切酶 1、限制性核酸内切酶的发现 2、限制性核酸内切酶的分类合命名 3、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 4、限制性核酸内切酶的消化反应
1、限制性核酸内切酶的发现 2、限制性核酸内切酶的分类合命名 3、II型限制性核酸内切酶的基本特性 4、限制性核酸内切酶的消化反应 第一节 限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的概念 限制性核酸内切酶( Restriction endonucleases):是 类能够识别双链DNA分子中某种特定的核苷酸序列,并能精 确特异地切割双链DNA分子的核酸內切酶。已经从近300中微 生物中分离出了500佘种限制性核酸内切酶。 ECo82 I BstF 5 I ECOR Hin8‖ CA‖ Mnl Bst295 I Hsp92‖ Bst29 I Dde i N|a‖l i Bst2951 HinGE Fok I BSu36 I BCC I Sts I Dde I AATTCTAAGGATGGGCATGGGAGGGGGTGGGGTTTCAACCTGAGGATTTTt GATTCCTACCCGTACCCTCCCCCACCCCAAAGTTGGACTCCTAAAAA
限制性核酸内切酶的概念 限制性核酸内切酶（ Restriction endonucleases）：是一 类能够识别双链DNA分子中某种特定的核苷酸序列，并能精 确特异地切割双链DNA分子的核酸内切酶。已经从近300中微 生物中分离出了500余种限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的分类 I型 Ⅱ型 ⅢI型 1.限制修饰活性单一多功能的酶限制酶和修饰酶分开双功能酶 2.内切酶的蛋白3种不同亚基单一成分 2种亚基 质结构 3.限制辅助因子ATP、Mg2和S-M ATP、Mg2和S 腺苷甲硫氨酸 腺苷甲硫氨酸 4.切割位点 距特异性位点特异性位点及其附近特异性位点3端 1000bp 24-26bp处 5.特异性切割不是 是 是 6.基因克隆中无用 非常有用 有用
限制性核酸内切酶的分类 1. 限制修饰活性 2. 内切酶的蛋白 质结构 3. 限制辅助因子 4. 切割位点 5. 特异性切割 6. 基因克隆中 I 型 单一多功能的酶 3种不同亚基 ATP、Mg2+和S- 腺苷甲硫氨酸 距特异性位点 1000bp 不是 无用 II 型 限制酶和修饰酶分开 单一成分 Mg2+ 特异性位点及其附近 是 非常有用 III 型 双功能酶 2种亚基 ATP、Mg2+和S- 腺苷甲硫氨酸 特异性位点3‘端 24-26bp处 是 有用
限制性核酸內切酶的命名 1、寄主菌属名的第一个字母和种名的头两个字母组成3个斜体 字母的略语表示酶来源的菌种名称,如大肠杆菌 Escherichia co表示为ECo,流感嗜血菌 Haemophilus influenzae表示为 Hin 用一个正体字母表示菌株的类型,比如EcoR、Hind 3、如果一种特殊的寄主菌株具有几个不同的限制修饰体系,则 用罗马数字标出,比如 ECoRI、HindⅢ
限制性核酸内切酶的命名 1、寄主菌属名的第一个字母和种名的头两个字母组成3个斜体 字母的略语表示酶来源的菌种名称，如大肠杆菌Escherichia coli 表示为Eco , 流感嗜血菌Haemophilus influenzae 表示为 Hin； 2、用一个正体字母表示菌株的类型，比如EcoR、Hind； 3、如果一种特殊的寄主菌株具有几个不同的限制修饰体系，则 用罗马数字标出，比如Eco R I、 Hind III