第二节 重组DNA技术
第二节 重组DNA技术
、重组DNA技术相关概念 (一)DNA克隆 克隆( clone): 来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 克隆化( cloning): 获取同一拷贝的过程,即无性繁殖。 分子克隆(DNA克隆) 细胞克隆 个体克隆(动物或植物)
一、重组DNA技术相关概念 （一）DNA克隆 克隆（clone）： 来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 克隆化（cloning）： 获取同一拷贝的过程，即无性繁殖。 分子克隆（DNA克隆） 细胞克隆 个体克隆（动物或植物）
DNA克隆: 应用酶学的方法,在体外将各种来源的 DNA与载体DNA结合成具有自我复制能力的 DNA分子,继而通过转化或转染宿主细胞, 筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行 扩增、提取获得大量同一DNA分子。又称基 因克隆或重组DNA
DNA克隆： 应用酶学的方法，在体外将各种来源的 DNA与载体DNA结合成具有自我复制能力的 DNA分子，继而通过转化或转染宿主细胞， 筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行 扩增、提取获得大量同一DNA分子。又称基 因克隆或重组DNA
基因工程: 实现基因克隆所采用的方法及相关 的工作,又称为重组DNA技术( recom- binant dNa technology)
基因工程： 实现基因克隆所采用的方法及相关 的工作，又称为重组DNA技术 (recombinant DNA technology)
(二)工具酶 限制性核酸内切酶 DNA聚合酶 逆转录酶 DNA连接酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 7 ag DNA聚合酶
（二）工具酶 限制性核酸内切酶 DNA聚合酶I 逆转录酶 DNA连接酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 Taq DNA聚合酶
限制性核酸内切酶 (restriction endonuclease) 识别DNA的特异序列,并在识别位 点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 是细菌內存在的保护性酶。分为I IⅠ、IIE三类。I类酶识别序列特点为回 文结构。 GGATCC ...3' 3 CCTAGG…5
限制性核酸内切酶 （restriction endonuclease） 识别DNA的特异序列，并在识别位 点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 是细菌内存在的保护性酶。分为I、 II、III三类。II类酶识别序列特点为回 文结构。 ··· ··· GGATCC ··· ··· ··· ··· CCTAGG ··· ··· 5' 3' 5' 3
限制性核酸内切酶作用后产生两种末端 钝性末端( blunt end)粘性末端( sticky end) Hind l Bamh I GTCGAC GGATCC CAGCTG CCTAGG GTC GAC G GATCC CAG CTG CCTAG G
限制性核酸内切酶作用后产生两种末端： 钝性末端(blunt end) 粘性末端(sticky end) Hind III BamH I G CCTAG GATCC G + GTC CAG GAC CTG + GTCGAC CAGCTG GGATCC CCTAGG
5′-端突出5 性末端 3G— 3′-端突出 5G- 3'ACGTC 限制性核酸内切酶炽别序列长度为48个bpo 不同酶切产生的相同粘性末端称配伍末端 ( compatible end),可用连接酶连接
5´-端突出 粘性末端 3´-端突出 限制性核酸内切酶识别序列长度为4~8个bp。 不同酶切产生的相同粘性末端称配伍末端 （compatible end），可用连接酶连接。 AATTC G 5' 3' ACGTC 5'G 3
(三)目的基因 应用重组DNA技术所要分离、获得的基因。 1.cDNA( complementary dNA):是指经反转 录合成的,与RNA互补的单链DNA。以单链 cDNA为模板,经聚合反应可合成双链cDNA。 2.基因组DNA( genomic dna):是指代 表一个细胞或生物体整套遗传信息(染色体 及线粒体)的所有DNA序列
（三）目的基因 应用重组DNA技术所要分离、获得的基因。 1. cDNA(complementary DNA):是指经反转 录合成的，与RNA互补的单链DNA。以单链 cDNA为模板，经聚合反应可合成双链cDNA。 2. 基因组DNA（genomic DNA）：是指代 表一个细胞或生物体整套遗传信息（染色体 及线粒体）的所有DNA序列
(四)基因载体( vector) 能携带目的基因,实现无性繁殖所采用的 可独立复制的完整DNA分子。又称克隆载体。 其中为表达出蛋白质设计的载体又称表达载 体。 常用的载体: 质粒、噬菌体DNA、病毒DNA
（四）基因载体（vector） 能携带目的基因，实现无性繁殖所采用的 可独立复制的完整DNA分子。又称克隆载体。 其中为表达出蛋白质设计的载体又称表达载 体。 常用的载体： 质粒、噬菌体DNA、病毒DNA