实验通知 A.分组一一— 每班以三人为单位分成小组，其中两男 一女；并从一班到三班依次每7小组为一大组，分为五 大组（下周一交名单） B.财间一一4.24（周六）、4.25（周日）、4.28日 下午每半天一大组作试验 0上午7：30 下午2：00开始 C.内容一一一1.显微镜介绍及基本操作；2.细菌及其 它微生物的特殊结构观察3.微生物染色技术4.环境中微 生物 D.要求一一一写试验预习报告，试验前检查（没有不 得试验)，并提问（回答情况同样作为成绩记录）；
实验通知 A.分组———每班以三人为单位分成小组，其中两男 一女；并从一班到三班依次每7小组为一大组，分为五 大组（下周一交名单） B.时间———4.24（周六）、4.25（周日）、4.28日 下午每半天一大组作试验 上午7:30 下午2:00开始 C.内容———1.显微镜介绍及基本操作；2.细菌及其 它微生物的特殊结构观察3.微生物染色技术4.环境中微 生物 D.要求———写试验预习报告，试验前检查（没有不 得试验），并提问（回答情况同样作为成绩记录）；
考试8 口1.细菌数量生长曲线包括哪几个阶段？ 口2.细菌的代时G为哪个时期的？如何测算？ ▣3.各种废水生物处理法中微生物所处生长状态由 什么决定？ 0 4.细菌连续培养有哪些培养方式？如何测稀释率 (D)? ▣5.为什么恒化培养D提高产生不同生物逐次“洗 脱”现象？ 6.什么是细菌的选育？如何进行特殊细菌筛选？
1.细菌数量生长曲线包括哪几个阶段？ 2. 细菌的代时G为哪个时期的？如何测算？ 3.各种废水生物处理法中微生物所处生长状态由 什么决定？ 4.细菌连续培养有哪些培养方式？如何测稀释率 (D)? 5.为什么恒化培养D提高产生不同生物逐次“洗 脱”现象? 6.什么是细菌的选育？如何进行特殊细菌筛选？ 考试 8
(2)细菌的驯化 ①渐变一诱导法（休眠的酶基因复活+自然突变） 口方法： 选择性培养基（待降解 5 物，如石油)浓度升高 0-5( 67 N N死 + 大一 大四 待降解物通常为有机毒物或惰性物。 果 筛选与诱导驯化可以同时进行 ▣特点：操作简便，驯化的潜力有限，慢
（2）细菌的驯化 ①渐变－诱导法(休眠的酶基因复活+自然突变) 方法： 待降解物通常为有机毒物或惰性物。 5 6 7 N 选择性培养基（待降解 物，如石油）浓度升高 5 n 大一 → 大四 N + 1 死 筛选与诱导驯化可以同时进行 特点:操作简便，驯化的潜力有限，慢。 结 果
还蛤發两缺招 清南因 ②突变-诱变法 接他缺号 性物 寄生 失去平南 胚蛤發有缺陷 鹽度 溶氧 遗唐因索 辐射 源度 外 電流 毒性物質 锥他命缺乏 具他原因 寄生贵 激素失去平衡
诱变剂：温度、紫外线、核辐射、酸、碱、化 学诱变剂等等。 ②突变—诱变法 提问：哪些因素可以引起基因突变呢？ 提问： 基因突变的分子机制？ DNA碱基丢失、增多、错配等 点突变→染色体畸变 基因突变有这样几个特点
A.基因突变的特点 ▣发生I随机性结果Ⅱ无定向性 口基因突变在哪一个细菌中发生是随机的，突变基因的部 位也是随机的。突变的发生没有固定的方向。 0 频率Ⅲ稀有性可Ⅳ.诱变性 口突变率（每一细菌在每一世代中发生某一性状突变的机 率)通常为105~1010。十万至一百亿个细菌中才可能 有一个细菌的基因发生突变。 人工诱变可提高10~105倍
A．基因突变的特点 发生Ⅰ.随机性结果Ⅱ.无定向性 基因突变在哪一个细菌中发生是随机的，突变基因的部 位也是随机的。突变的发生没有固定的方向。 频率Ⅲ.稀有性 可Ⅳ.诱变性 突变率（每一细菌在每一世代中发生某一性状突变的机 率）通常为10-5~10-10 。十万至一百亿个细菌中才可能 有一个细菌的基因发生突变。 人工诱变可提高10～105倍
口I.可逆性 修复成功 ▣V稳定性 口修复失败 产生的变异性状是稳定的、可遗传的。 口利用基因突变的特点，可以通过 人工诱变进行细菌的基因改造
Ⅵ.可逆性 修复成功 Ⅴ.稳定性 修复失败 产生的变异性状是稳定的、可遗传的。 利用基因突变的特点，可以通过 人工诱变进行细菌的基因改造
B.方法 口常用的诱变剂：紫外线、5一溴尿嘧啶、亚硝酸、卟啶染 料等。 ▣诱变的步骤 ▣1制出发菌株的单细菌悬浮液 口提问：为什么？如何在整个过程中尽量使细菌分散呢？ 诱变剂与细菌充分接触；向细菌培养液中加入玻璃珠，并 保持在诱变过程中始终进行振荡搅拌形成出发细菌的单细 菌悬浮液；
常用的诱变剂：紫外线、5—溴尿嘧啶、亚硝酸、卟啶染 料等。 诱变的步骤 Ⅰ.制出发菌株的单细菌悬浮液 提问：为什么？如何在整个过程中尽量使细菌分散呢？ 诱变剂与细菌充分接触；向细菌培养液中加入玻璃珠，并 保持在诱变过程中始终进行振荡搅拌形成出发细菌的单细 菌悬浮液； B．方法
川.选择合适的诱变剂剂量进行诱变 口提问：为什么要有剂量限制呢？ 0 少，效率低；过高“是药三分毒”会造成细菌大量死亡。 0 例如在进行细菌紫外诱变时，通常使用15或20W的紫外灯距离细菌 单细菌悬浮液1530cm,照射1520min。 .筛选突变出的高效菌 提问：如何筛？ 0 选择性培养基
Ⅱ.选择合适的诱变剂剂量进行诱变 提问：为什么要有剂量限制呢？ 少,效率低;过高“是药三分毒”会造成细菌大量死亡。 例如在进行细菌紫外诱变时，通常使用15或20W的紫外灯距离细菌 单细菌悬浮液15~30cm，照射15~20min。 Ⅲ.筛选突变出的高效菌 提问：如何筛？ 选择性培养基
评价 0 诱变法潜力要远大于透导法，但操作复杂。在 实际诱变中，往往要经过几次不同诱变方法的诱变处理 以及大量繁琐的筛选分离工作才有可能获得理想的突变 体。最后这些突变体将会在实验室小试、中试的基础上 被投放到生产实践中。 参见《环境微生物学技术手册》（图书馆X172-6201)
评价 诱变法潜力要远大于诱导法，但操作复杂。在 实际诱变中，往往要经过几次不同诱变方法的诱变处理 以及大量繁琐的筛选分离工作才有可能获得理想的突变 体。最后这些突变体将会在实验室小试、中试的基础上 被投放到生产实践中。 参见 《环境微生物学技术手册》（图书馆X172-6201）
0 通常生产上更多利用的是诱导法。 口污泥培养初期逐步提高污水比例，有些菌种不能适 应被淘汰（筛选），能产生诱导酶的菌株及自发突变体 中能来降解此类废水的菌种能够生存而被保留下来，且 能力逐步提高，使废水达到预期的排放标准： *诱变菌株环保市场的开发前景如何？目前国 内外有哪些主要的此类公司？
通常生产上更多利用的是诱导法。 污泥培养初期逐步提高污水比例，有些菌种不能适 应被淘汰(筛选)，能产生诱导酶的菌株及自发突变体 中能来降解此类废水的菌种能够生存而被保留下来，且 能力逐步提高，使废水达到预期的排放标准； *诱变菌株环保市场的开发前景如何?目前国 内外有哪些主要的此类公司?