高效液相色谱法同时测定饮料中的9种食品添加剂 作者:廊坊师范学院化学系300届毕业生祁楠 指导教师:孙欣 摘要:研究了等梯度高效液色谱法直接测定饮料中的防腐剂、甜味剂、色素的方法。采用C柱以啷醇乙酸氨 (0.ml/)一溴化四J铵o0m/),田6.0为流动相紫外检测波长为2m可在15分钟内将山梨酸、苯甲 酸、糖精、吣、咖啡因、日落黄、柠檬黄、胭脂红、苋菜红完全分离 关键词:高效液相色谱、山霂酸、苯甲酸、糖精、吣、咖啡因、日落黄、柠檬黄、胭脂红、苋菜红 前言:高效液相色谱(HO是上世纪6年代末7年代初,发展起来的种新型分析分离技术它 是在经典液相色谱法的基础上,引入了气相色谱的理论,采用高压输送流动相和髙灵敏度检测器 发展而成的现代化液相色谱分析方法,具有分离效率髙、选择性好、分析速度快、检测灵敏 度高、操作自动化和应用范围广等特点。 近年来,由于消费者对于食品的安全性日益的关注,食品中的各种添加剂越来越受到人们 的重视。食品添加剂指为改善食品品质和色、香、味,而加入食品中的化学合成或天然物质, 但在目前所使用的添加剂中,绝大多数为化学合成添加剂,它们是通过氧化、还原、缩合等系 列化学合成反应所得,有的具有一定毒性,有的在食品中起变态反应或转化成其它有毒物质。通 过动物实验证明有些物质有致癌、致畸形等作用,如果不加以限制使用,将对人体健康产生危 害。 髙效液相色谱具备分离效果好、灵敏度髙和重现性好等优点因此是目前食品添加剂定性、 定量分析的首选方法,本实验采用甲醇一乙酸氨(0.02ml/)—溴化四丁铵(0.007ml/)(35: 65:4,rK0)为流动相能将食品中的食用色素、防腐剂、甜味剂、抗氧化剂、兴奋剂完全分 1.实验部分 1.1仗器与试剂 ACS2000高效毛细管电泳仪液相色谱一体机(京彩科学仪器公司)、紫外可见光检测器Ⅳ DECRⅸK205)、FS霅数字计(上海精密科学仪器有限公司)、双频超声清洗机型号 SK8200H(上海科导超声仪器有限公司)、氨水溶液分析纯氨水:原子水=:9)、醋酸溶液(分析纯 醋酸:原子水=1:9 标准储备液:吣、胭脂红、柠檬黄、日落黄、苋菜红均为1.∞∞0∽~苯甲酸、山梨酸均为 5mol,咖咄因Q800gL 标准混合液:取各组分标准储备液各1ml,混合均匀后备用 1.2样品处理 选择市售饮料三种(科力福、醒目、非常甜橙)充分混匀后用虹吸法分层取样,每层各取 5oml左右,装入小口瓶中混和均匀后超声波除气lmin,用1:9氨水调节由6.0,经α2μm水相滤 膜过滤后,备用。科力福:取原样品液用原子水稀释5倍后,进行以上操作
高效液相色谱法同时测定饮料中的9种食品添加剂 作者：廊坊师范学院化学系2005届毕业生祁楠 指导教师：孙欣 摘要:研究了等梯度高效液相色谱法直接测定饮料中的防腐剂、甜味剂、色素的方法。采用C18柱以甲醇—乙酸氨 （0.02mol/L)—溴化四丁铵(0.007mol/L),pH 6.0为流动相,紫外检测波长为230nm,可在15分钟内将山梨酸、苯甲 酸、糖精、VC、咖啡因、日落黄、柠檬黄、胭脂红、苋菜红完全分离。 关键词：高效液相色谱、山梨酸、苯甲酸、糖精、VC、咖啡因、日落黄、柠檬黄、胭脂红、苋菜红 前言：高效液相色谱(HPLC)是上世纪60年代末70年代初,发展起来的一种新型分析分离技术,它 是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱的理论，采用高压输送流动相和高灵敏度检测器, 发展而成的现代化液相色谱分析方法, 具有分离效率高、 选择性好、分析速度快、 检测灵敏 度高、操作自动化和应用范围广等特点。 近年来，由于消费者对于食品的安全性日益的关注，食品中的各种添加剂越来越受到人们 的重视。 食品添加剂指为改善食品品质和色、香、味，而加入食品中的化学合成或天然物质， 但在目前所使用的添加剂中，绝大多数为化学合成添加剂，它们是通过氧化、还原、缩合等一系 列化学合成反应所得，有的具有一定毒性，有的在食品中起变态反应或转化成其它有毒物质。通 过动物实验证明有些物质有致癌、致畸形等作用，如果不加以限制使用，将对人体健康产生危 害。 高效液相色谱具备分离效果好、灵敏度高和重现性好等优点,因此是目前食品添加剂定性、 定量分析的首选方法,本实验采用甲醇—乙酸氨 (0.02mol/L)—溴化四丁铵(0.007mol/L)（35： 65：4，pH6.0）为流动相,能将食品中的食用色素、防腐剂、甜味剂、抗氧化剂、兴奋剂完全分 离。 1. 实验部分 1.1 仪器与试剂 ACS2000高效毛细管电泳仪液相色谱一体机(北京彩陆科学仪器公司)、紫外可见光检测器(UV DETECTOR VK-2051)、PHS-2F数字pH计（上海精密科学仪器有限公司）、双频超声清洗机型号 SK8200LH(上海科导超声仪器有限公司)、氨水溶液(分析纯氨水：原子水=1：9)、醋酸溶液(分析纯 醋酸：原子水=1：9) 标准储备液：VC、胭脂红、柠檬黄、日落黄、苋菜红 均为 1.0000g/L、苯甲酸、山梨酸均为 5mmol\L，咖啡因0.8000g/L 标准混合液：取各组分标准储备液各1ml，混合均匀后备用。 1.2 样品处理 选择市售饮料三种（科力福、醒目、非常甜橙）充分混匀后用虹吸法分层取样，每层各取 50ml 左右，装入小口瓶中混和均匀后超声波除气15min，用1：9氨水调节pH 6.0,经0.2μm水相滤 膜过滤后，备用。科力福:取原样品液用原子水稀释5倍后，进行以上操作
1.3色谱条件 C柱颗粒度⑩0m、柱温16摄氏度、检测波长α30Ⅷ、流动相甲醇一乙酸氨(O.ml)一溴化 四丁铵⑩.o0m)配比35:65:4,p6.0,流速1.Ⅷm/mn,微量进样器定量进样20μl,实验以保 留时间定性,外表物法定量。 2结果与讨论 2.1淚波长选择 用紫外一可见光分光光度计检测器,检测9种物质发现其在20m-30m范围内敏感波长分别为 山梨酸糖精咖啡因苯甲酸胭脂红苋菜红。柠檬黄VC日落黄 260m 202nm206,273rm229mm215nm2l6nm257nr 234nm 兼顾九种组分在200m-300m的紫外吸收值,选择23m为检测波长。 2.2流动相选择 实验以甲醇一乙酸氨作为流动相对组分进行分离如图 (1)甲醇一乙酸氨0.0ml=30:70 图1添加剂组分拟合图 胭脂红和苯甲酸分离不开,且六种组分αw℃、柠檬黄、日落黄、胭脂红、山梨酸、苯甲酸 出峰时间集中在27min5.4min范围内,不易于最终分离测定。 (2)甲醇一乙酸氨0.02ml/=40:60 图2添加剂组分拟合图
1. 3 色谱条件 C18柱颗粒度10um、柱温16摄氏度、检测波长230nm、流动相甲醇—乙酸氨（0.02mol/L）—溴化 四丁铵(0.007mol/L)配比35:65:4 ，pH 6.0，流速1.0ml/min，微量进样器定量进样20μl,实验以保 留时间定性，外表物法定量。 2 结果与讨论 2..1检测波长选择 用紫外—可见光分光光度计检测器,检测9种物质发现其在200nm—300nm范围内敏感波长分别为 山梨酸 糖精 咖啡因 苯甲酸 胭脂红 苋菜红 柠檬黄 VC 日落黄 260nm 202nm 206，273nm 229nm 215nm 216nm 257nm 262nm 234nm 兼顾九种组分在200nm—300nm的紫外吸收值,选择230nm为检测波长。 2..2 流动相选择 实验:以甲醇—乙酸氨作为流动相[1]对[组分进行分离,如图： （1）甲醇—乙酸氨0.02mol/L =30：70 图 1 添加剂组分拟合图 胭脂红和苯甲酸分离不开，且六种组分（VC、柠檬黄、日落黄、胭脂红、山梨酸、苯甲酸） 出峰时间集中在2.7min-5.4min范围内，不易于最终分离测定。 （2）甲醇—乙酸氨0.02mol/L=40：60 图 2 添加剂组分拟合图
柠檬黄与苋菜红,出峰重叠:胭脂红与日落黄,岀峰重叠,分离效果不好,且组分峰比较集 中,不易分离测定 (3)甲醇一乙酸氨0.02ml=44:56 日落置 山梨 柠黄 图3添加剂组分拟合图 柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄四种物质岀峰重叠:苯甲酸、山梨酸岀峰干扰,且各 组分出峰时间相对集中,不易于最终分离测定。 结论:由以上三个图形显示,最佳流动相配比,介于甲醇一乙酸氨QO2mL[30:70至甲醇一乙 酸氨0.0aml/L[40:6中间的一个配比,经实验摸索最终选择甲醇一乙酸氨 Q cmol/L[35:65为 最佳配比。 (4)甲醇一乙酸氨0.02ml/=35:65 图4添加剂组分拟合图 1-柠檬黄2苋菜红3日落黄4-V5-胭脂红θ苯甲酸7山梨酸8咖啡因 由图4可知七种组分(1柠檬黄2-苋菜红3-日落黄5-胭脂红δ-苯甲酸7-山梨酸8-咖啡 因)基本分离,但是出峰时间接近,易发生干扰。 拟解决方案:添加改性剂 2.3添加改性尔溴化四铵,选择最佳添加量
柠檬黄与苋菜红，出峰重叠；胭脂红与日落黄，出峰重叠，分离效果不好，且组分峰比较集 中，不易分离测定。 （3）甲醇—乙酸氨0.02mol/L =44：56 图 3 添加剂组分拟合图 柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄四种物质出峰重叠；苯甲酸、山梨酸出峰干扰，且各 组分出峰时间相对集中，不易于最终分离测定。 结论：由以上三个图形显示，最佳流动相配比，介于甲醇—乙酸氨0.02mol/L [30：70]至甲醇—乙 酸氨 0.02mol/L [40：60]中间的一个配比，经实验摸索最终选择甲醇—乙酸氨0.02mol/L[35：65]为 最佳配比。 （4）甲醇—乙酸氨0.02mol/L=35：65 图 4 添加剂组分拟合图 1-柠檬黄 2-苋菜红 3-日落黄 4-VC 5-胭脂红 6-苯甲酸 7-山梨酸 8-咖啡因 由图 4 可知七种组分（1-柠檬黄 2-苋菜红3-日落黄 5-胭脂红6-苯甲酸 7-山梨酸8-咖啡 因）基本分离，但是出峰时间接近，易发生干扰。 拟解决方案：添加改性剂 2..3添加改性剂溴化四丁铵，选择最佳添加量
(1)甲醇—乙酸氨(0.02ml/一溴化四丁铵0.0mo/配比35:65:4 图5九种组分分离图 由图5知,加入改性剂后基本上能将九种物质分离 (2)甲醇—乙酸氨(0.02ml/)一溴化四丁铵(0.08m/)配比35:65:4 图6九种组分分离图 由图6知,糖精与苋菜红峰重叠,分离效果不佳。 (3)甲醇—乙酸氨(0.02ml/)一溴化四丁铵(0.0mo/配比35:65:4 图7九种组分分离图 由图7知,糖精与苋菜红峰重叠且与苯甲酸峰重叠趋势增加
（1）甲醇—乙酸氨 (0.02mol/L)—溴化四丁铵(0.007mol/L)配比35：65：4 图 5 九种组分分离图 由图 5 知，加入改性剂后基本上能将九种物质分离。 （2）甲醇—乙酸氨 (0.02mol/L)—溴化四丁铵(0.008mol/L)配比35：65：4 图 6 九种组分分离图 由图 6 知，糖精与苋菜红峰重叠，分离效果不佳。 （3）甲醇—乙酸氨 (0.02mol/L)—溴化四丁铵(0.009mol/L)配比35：65：4 图 7 九种组分分离图 由图 7 知，糖精与苋菜红峰重叠且与苯甲酸峰重叠趋势增加
结论:添加改性剂—溴化四丁铵能初步将九种物质分离,原因:由于中性条件下(6左右)溴 化四丁铵带有正电荷,可以促进带负电荷的日落黄、胭脂红出峰时间增长,从而达到分离组分的要 求。溴化四丁铵量不宜过多,否则日落黄与胭脂红峰重叠,糖精、苋菜红、苯甲酸峰重叠,因此远择 流动相配比为:甲醇-乙酸氨(Q.0aml/)-溴化四丁铵(Q00ml/)=35:65:4 问题:9种组分,出峰时间相对比较集中。拟解决方案:调节流动相pH值 24流动相p值 择 p值主要决定流动相极性,调节9种组分出峰时间,能更好的将9种物质分离 (1)pH7 图8九种组分分离图 由图8知,进混合样发现糖精与胭脂红峰重叠且与苯甲酸峰有重叠趋势,日落黄与胭脂红重 叠,完全出峰时间13分钟 (2)p65 图9九种组分分离图 苋菜红与糖精分离不好,完全出峰时间1分钟
结论：添加改性剂----溴化四丁铵能初步将九种物质分离，原因[2]:由于中性条件下(pH=6左右)溴 化四丁铵带有正电荷,可以促进带负电荷的日落黄、胭脂红出峰时间增长，从而达到分离组分的要 求。溴化四丁铵量不宜过多,否则日落黄与胭脂红峰重叠,糖精、苋菜红、苯甲酸峰重叠,因此远择 流动相配比为：甲醇-乙酸氨(0.02mol/L)-溴化四丁铵(0.007mol/L)=35:65:4 问题：9 种组分，出峰时间相对比较集中。拟解决方案：调节流动相pH值 2..4 流动相pH值选择 pH 值主要决定流动相极性,调节9种组分出峰时间,能更好的将9种物质分离 （1） pH=7 图 8 九种组分分离图 由图 8 知，进混合样发现糖精与胭脂红峰重叠且与苯甲酸峰有重叠趋势，日落黄与胭脂红重 叠，完全出峰时间13分钟 （2）pH=6.5 图 9 九种组分分离图 苋菜红与糖精分离不好,完全出峰时间14分钟
D) pH6 图10九种组分分离图 苋菜红与糖精基本分离,完全出峰时间15分钟 (4)pH55 图11九种组分分离图 苋菜红与糖精基本分离,胭脂红与咖啡因重叠,完全出峰时间18分钟 (5)pH5 图12九种组分分离图 苋菜红与糖精分离不开,苯甲酸与日落黃重叠,完全出峰时间¤分钟
（3）pH=6 图 10 九种组分分离图 苋菜红与糖精基本分离,完全出峰时间15分钟 （4）pH=5.5 图 11 九种组分分离图 苋菜红与糖精基本分离,胭脂红与咖啡因重叠,完全出峰时间18分钟 （5）pH=5 图 12 九种组分分离图 苋菜红与糖精分离不开,苯甲酸与日落黄重叠，完全出峰时间20分钟
结论:考虑到分离效果、检测时间与重现性选择60,为最佳p值。 对以上三个条件综合考虑,流动相最终确定为: 甲醇一乙酸氨(Q0hmol)一溴化四丁铵Q00ml/)配比为35:65:4,pH=6.0 25线性关系考察 将配制好的以下一系列标准溶液,以C(g/)对相应的h(m)作外标物曲线(表一),得到相 应的回归方程及相关系数(表二): 表一 C(g/L)、h(mv) 苯甲酸 山梨酸 日落黄 柠檬黄 h h C h 10.61063634110.56073623521.0001097531.0002128171.00021429 20.3502148300.2804224920.500545920.5001206750.5000113185 30.2035148000.1869157980.3333295470.3333815270.333378148 40.15271172030.140115980.2000235350.2500683670.250061791 50.1221920470.112192123 0.2000544230.20042905 60.101875741 0.1667470390.166737104 0.142929398 糖精 胭脂红 苋菜红 咖啡因 10.50002414371.0001127580.50002887260.8000156085 20.33331819380.1667355190.33332183770.400079184 30.25001374840.100024000.25001698670.266755293 40.1667114908 0.20001455540.200039093 5 0.142979938 0.160032471 0.133327649 0.114322460 表2线性回归方程、相关系数 添加剂 线性回归方程IRE 相关系数(r) 咖啡因 Y=14225492+1.99e+00X VC ￥=30628391+2142e+05X 0.9983 山梨酸 ￥=3710.3956+5.99le+005X 0.9918 苯甲酸 ￥=26745.041215.5le+m5X 0.9983 糖精 ￥=18685.203144.612e+005X 0.9941 苋菜红 ￥=51212.847+4.813e+005x 0.9974 日落黄 Y=2987.6231+1 0.9954 胭脂红 Y=630075+1 0.9698 柠檬黄 ￥=16334.693+1.987e+05X 0.9988 注:Y:计算机给出的峰高响应值:X:组分质量液度(g^)
结论：考虑到分离效果、检测时间与重现性,选择pH=6.0，为最佳pH值。 对以上三个条件综合考虑，流动相最终确定为： 甲醇—乙酸氨（0.02mol/L）—溴化四丁铵(0.007mol/L)配比为35:65:4，pH=6.0 2..5线性关系考察 将配制好的以下一系列标准溶液，以C（g/L）对相应的 h (mv)作外标物曲线（表一），得到相 应的回归方程及相关系数（表二）： 表一 C （g/L）、h （m v） 苯甲酸 山梨酸 日落黄 柠檬黄 VC C h C h C h C h C h 1 0.6106 363411 0.5607 362352 1.000 109753 1.000 212817 1.000 214293 2 0.3503 214830 0.2804 224927 0.500 54592 0.5000 120675 0.5000 113185 3 0.2035 148002 0.1869 157982 0.3333 29547 0.3333 81527 0.3333 78148 4 0.1527 117203 0.1402 115982 0.2000 23535 0.2500 68367 0.2500 61791 5 0.1221 92047 0.1121 92123 0.2000 54423 0.2000 42905 6 0.1018 75741 0.1667 47039 0.1667 37104 7 0.1429 29398 糖精 胭脂红 苋菜红 咖啡因 C h C h C h C h 1 0.5000 241437 1.000 112758 0.5000 288726 0.8000 156085 2 0.3333 181938 0.1667 35519 0.3333 218377 0.4000 79184 3 0.2500 137484 0.1000 2400 0.2500 169867 0.2667 55293 4 0.1667 114908 0.2000 145554 0.2000 39093 5 0.1429 79938 0.1600 32471 6 0.1333 27649 7 0.1143 22460 表 2 线性回归方程、相关系数 添加剂 线性回归方程LRE 相关系数（r） 咖啡因 Y=1422.5492+1.939e+005X 0.9997 VC Y=3062.8391+2.142e+005X 0.9983 山梨酸 Y=37100.3956+5.991e+005X 0.9918 苯甲酸 Y=26745.0412+5.521e+005X 0.9983 糖精 Y=18685.2031+4.612e+005X 0.9941 苋菜红 Y=51212.8427+4.813e+005x 0.9974 日落黄 Y=-2987.6231+1.128e+005X 0.9954 胭脂红 Y=-630.0775+1.185e+005X 0.9698 柠檬黄 Y=16334.6903+1.987e+005X 0.9988 注：Y：计算机给出的峰高响应值；X:组分质量浓度（g/L）
九种组分线形工作曲线图谱 Y陛高咖因 Y高 1800010￥14225492+1939+05 2400006283912142+0 150000 r=09997 120000 160000 9000 120000 80000 40000 X[度 依度 0.9 日落黄 高山梨酸 120000y=2975231+1128e+05 42000￥371039599150 r=0.9954 360000 r=09918 100000 30000 80000 60000 180000 度 60000 X依浓度 0.2 1.0 0.09 0.63 Y陛商苋菜红 Y商 35000￥51212827+4.13+05 28000￥=18685.2031+4612e+05X 30000 r=0.9974 240000 r=0.9941 20000 160000 8000 X[度 40000 X陈度 0.08 0.56 0.08 056 Y高脂红 Y高柠檬黄 Y=630.0775+1.185+005X 24000￥=1633.6903+1.987e+005X 100000 r=0.9698 20000 r=0.99 80000 6000 120000 40000 X[度 依度
九种组分线形工作曲线图谱
Y高]苯甲酸 2000Y=26745.0412+5.521:+005X r=0.9983 4000 6000 X依剷 0.1 26本方法准确度测试 取科力福、非常甜橙、醒目、绿茶样品,每个样品精确移取l置于⑩m离心试管中,按本实 验的方法处理及测定3),以标准样品的测定结果作为本底值,结果见表4 表4样品中食品添加剂加标回收率(单位g) 食品添加剂 非常甜橙 本底值(g/)加标量(g/)测得值(g/)回收率() 苯甲酸 0.4500 0.2035 0.6404 93.56 0.635 0.1752 0.1667 0.332 94.48 0.428 日落黄 0.112 0.1667 0.2687 93.82 0.21 食品添加剂 科力福(稀释液) 本底值(g^)加标量(g∧)测得值(g/)回收率()RDS(% 山梨酸 0.1869 0.4201 0 VC 0.1944 0.1667 0.3532 0.733 柠檬黄 0.4240 0.1667 0.5553 0.31 食品添加剂 醒目 本底值(g/)加标量(g/)测得值(g)回收率()RDS(%) 苯甲酸 0.1725 0.2035 0.3580 1.15 0.393 0.034 0.0834 0.1071 87.64 0.55 绿茶 本底值(g/)加标量g/)测得值(g)回收率()RDS 咖啡因 0.125 0.1143 0.2303 0.847 2.7样品的测定绵果 四种饮料按本实验的色谱条件进样分析,得到四科样品的添加剂含量如表5
2..6本方法准确度测试 取 科力福、非常甜橙、醒目、绿茶样品，每个样品精确移取5ml置于10ml离心试管中，按本实 验的方法处理及测定(n=3)，以标准样品的测定结果作为本底值，结果见表4 表 4 样品中食品添加剂加标回收率（单位g/L） 食品添加剂 非常甜橙 本底值(g/L) 加标量(g/L) 测得值(g/L) 回收率(%) RDS (%) 苯甲酸 0.4500 0.2035 0.6404 93.56 0.635 VC 0.1752 0.1667 0.3327 94.48 0.428 日落黄 0.1123 0.1667 0.2687 93.82 0.21 食品添加剂 科力福(稀释液) 本底值(g/L) 加标量(g/L) 测得值(g/L) 回收率(%) RDS (%) 山梨酸 0.2250 0.1869 0.4201 104.4 0.2 VC 0.1944 0.1667 0.3532 95.26 0.733 柠檬黄 0.4240 0.1667 0.5553 78.76 0.31 食品添加剂 醒目 本底值(g/L) 加标量(g/L) 测得值(g/L) 回收率(%) RDS (%) 苯甲酸 0.1725 0.2035 0.3580 91.15 0.393 VC 0.034 0.0834 0.1071 87.64 0.55 绿茶 本底值(g/L) 加标量(g/L) 测得值(g/L) 回收率(%) RDS (%) 咖啡因 0.125 0.1143 0.2303 92.12 0.847 2..7样品的测定结果 四种饮料按本实验的色谱条件进样分析，得到四种样品的添加剂含量如表5
表5四种样品中添加剂含量测定结果(n3)单位(g/L) 样品 苯甲酸 山梨酸 柠檬黄日落黄咖啡因 非常甜橙0.4500未检出 0.1752 未检出 0.1123 未检出 科力福原液未检出 1.125 0.972 2.120 检出 未检出 醒目 0.1725 未检出 0.034 检出未检出未检出 未检出 未检出 未检出 未检出未检出 0.125 非常甜橙分离图 科力福浓缩橙汁分离图 醒目分离图 绿茶分离图 3原因讨论 实验过程中发现糖精、咖啡因、胭脂红、苋菜红的峰型有脱尾、前瞻现象,分析原因: (1):苯甲酸、山梨酸中混有杂质对分离峰型有影响。 (2):在紫外吸收带(2om~4om)以外有最大吸收峰在不加入改性剂溴化四丁铵情况下, 对本实验的九种组分出峰情况不产生千扰(附表2)。但加入溴化四丁铵后,造成甲醇吸收峰红移 结果导致流动相甲醇—乙酸氨(0.0am)一溴化四丁铵αα 7m1/D)在205m处有最大吸收峰值 (附表3)其紫外吸收带宽度为》m-250m而九种被测组分紫外吸收波长范围均集中3m 262Ⅷ处,其结果导致九种组分尤其是糖精、咖啡因、胭脂红、苋菜红(其最大吸收波长分别为
表 5 四种样品中添加剂含量测定结果（n=3） 单位（ g / L） 样品 苯甲酸 山梨酸 VC 柠檬黄 日落黄 咖啡因 非常甜橙 0.4500 未检出 0.1752 未检出 0.1123 未检出 科力福原液 未检出 1.125 0.972 2.120 检出 未检出 醒目 0.1725 未检出 0.034 检出 未检出 未检出 绿茶 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 0.125 非常甜橙分离图 科力福浓缩橙汁分离图 醒目分离图 绿茶分离图 3 原因讨论： 实验过程中发现 糖精、咖啡因、胭脂红、苋菜红的峰型有脱尾、前瞻现象，分析原因： （1）：苯甲酸、山梨酸中混有杂质对分离峰型有影响。 （2）：在紫外吸收带（200nm～400nm）以外有最大吸收峰在不加入改性剂溴化四丁铵情况下， 对本实验的九种组分出峰情况不产生干扰（附表2）。但加入溴化四丁铵后，造成甲醇吸收峰红移 结果导致流动相甲醇—乙酸氨(0.02mol/L)—溴化四丁铵(0.007mol/L)在205nm处有最大吸收峰值 （附表 3）其紫外吸收带宽度为200nm～250nm而九种被测组分紫外吸收波长范围均集中203nm～ 262nm 处，其结果导致九种组分尤其是糖精、咖啡因、胭脂红、苋菜红（其最大吸收波长分别为
