第三章高效液相色谱法 high performance liquid chromatography, HPLC
第三章 高效液相色谱法 high performance liquid chromatography，HPLC
概述 1. HPLC: 是以高压输送流动相,采用高效固定相 和高灵敏度检测器,在经典液相色谱 法的基础上发展而成的一种现代液相 色谱分离分析技术
一 . 概述 1．HPLC： 是以高压输送流动相，采用高效固定相 和高灵敏度检测器，在经典液相色谱 法的基础上发展而成的一种现代液相 色谱分离分析技术
2.经典液相色谱 ■主要指经典填充柱液相色谱。 n一般使用大于100μm粒经的多孔吸附剂作为固 定相,固定相的粒径范围较宽; 色谱柱内径一般为10-20mm; ■流动相依靠重力作用自上而下通过色谱固定相, 分离速度慢;
2．经典液相色谱 主要指经典填充柱液相色谱。 一般使用大于100μm粒经的多孔吸附剂作为固 定相，固定相的粒径范围较宽； 色谱柱内径一般为10-20mm； 流动相依靠重力作用自上而下通过色谱固定相， 分离速度慢；
2.经典液相色谱 ■色谱系统传质阻力大,纵向扩散明显,柱效 色谱柱填充、样品收集等为手工操作,自动 化水平不高; 不需特殊仪器设备,成本低,适用于样品的 初步分离、纯品制备等
2．经典液相色谱 色谱系统传质阻力大，纵向扩散明显，柱效 低； 色谱柱填充、样品收集等为手工操作，自动 化水平不高； 不需特殊仪器设备，成本低，适用于样品的 初步分离、纯品制备等
3.HPLC优点 与经典液相色谱比较: 1)固定相颗粒极细(一般小于10μm),粒度 规则均匀,传质阻力小,柱效高,分离效率 2)采用高压泵输送流动相,流速快,分析速 度快; 3)采用高灵敏度检测器,在线检测,自动化 程度髙,定量准确、精密度高
3．HPLC优点 与经典液相色谱比较： 1) 固定相颗粒极细（一般小于10μm），粒度 规则均匀，传质阻力小，柱效高，分离效率 高； 2) 采用高压泵输送流动相，流速快，分析速 度快； 3) 采用高灵敏度检测器，在线检测，自动化 程度高，定量准确、精密度高
与GC比较: 1)不受样品的挥发性和热稳定性的影响, 应用范围广; 2)可选用性质不同的各种溶剂为流动相, 提高了分离选择性; 3)室温条件下进行分离,不需高柱温
与GC比较： 1) 不受样品的挥发性和热稳定性的影响， 应用范围广； 2) 可选用性质不同的各种溶剂为流动相， 提高了分离选择性； 3) 室温条件下进行分离，不需高柱温
4.HPLC的主要类型 1)按固定相的聚集状态分:液液色谱法(LLC) 和液固色谱法(LSC) 2)按分离机制分: 分配、吸附、离子交换和空间排阻色谱法; 亲和色谱法;手性色谱法; 胶束色谱法;毛细管电色谱法。 3)化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的一大类色谱法
4．HPLC的主要类型 1）按固定相的聚集状态分：液液色谱法（LLC） 和液固色谱法（LSC） 2) 按分离机制分： 分配、吸附、离子交换和空间排阻色谱法； 亲和色谱法；手性色谱法； 胶束色谱法；毛细管电色谱法。 3）化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的一大类色谱法
二.仪器装置一高效液相色谱仪 包括输液系统、进样系统、色谱柱分离系 统、检测系统和数据处理系统 1输液系统 高压输液泵:分恒压泵和恒流泵,常用恒 流泵。 贮液瓶:其中的流动相应脱气(超声波脱 气和抽真空脱气)
二. 仪器装置—--高效液相色谱仪 包括输液系统、进样系统、色谱柱分离系 统、检测系统和数据处理系统。 1. 输液系统 高压输液泵：分恒压泵和恒流泵，常用恒 流泵。 贮液瓶：其中的流动相应脱气（超声波脱 气和抽真空脱气）
2.进样及分离系统 1)进样器:分六通进样阀和自动进样装置。 六通进样阀进样:体积由固定体积的进样管 ( sampling loop)控制。装样位置(load) 和进样位置( injection)。为了确保进样准确, 用微量注射器装样时,所取样品体积应大于 进样管的体积 样品残流问题及排除方法
2. 进样及分离系统 1）进样器：分六通进样阀和自动进样装置。 六通进样阀进样：体积由固定体积的进样管 （sampling loop）控制。装样位置（load） 和进样位置(injection)。为了确保进样准确， 用微量注射器装样时，所取样品体积应大于 进样管的体积。 样品残流问题及排除方法
2.进样及分离系统 2)色谱柱:分离核心,常用46mmid×15or 25 cm long不锈钢柱 装柱:匀浆法 柱平衡: ■柱头堵塞,填料变松或塔陷 ■流动相对色谱柱的影响:实验完毕先后用水、 甲醇冲洗色谱柱至柱压恒定
2. 进样及分离系统 2）色谱柱：分离核心，常用4.6mm id ×15 or 25cm long 不锈钢柱 装柱：匀浆法 柱平衡： 柱头堵塞，填料变松或塔陷： 流动相对色谱柱的影响：实验完毕先后用水、 甲醇冲洗色谱柱至柱压恒定