第三章高效液相色谱法 high performance liquid chromatography, HPLC
第三章 高效液相色谱法 high performance liquid chromatography,HPLC
概述 1. HPLC: 是以高压输送流动相,采用高效固定相 和高灵敏度检测器,在经典液相色谱 法的基础上发展而成的一种现代液相 色谱分离分析技术
一 . 概述 1.HPLC: 是以高压输送流动相,采用高效固定相 和高灵敏度检测器,在经典液相色谱 法的基础上发展而成的一种现代液相 色谱分离分析技术
2.经典液相色谱 ■主要指经典填充柱液相色谱。 n一般使用大于100μm粒经的多孔吸附剂作为固 定相,固定相的粒径范围较宽; 色谱柱内径一般为10-20mm; ■流动相依靠重力作用自上而下通过色谱固定相, 分离速度慢;
2.经典液相色谱 主要指经典填充柱液相色谱。 一般使用大于100μm粒经的多孔吸附剂作为固 定相,固定相的粒径范围较宽; 色谱柱内径一般为10-20mm; 流动相依靠重力作用自上而下通过色谱固定相, 分离速度慢;
2.经典液相色谱 ■色谱系统传质阻力大,纵向扩散明显,柱效 色谱柱填充、样品收集等为手工操作,自动 化水平不高; 不需特殊仪器设备,成本低,适用于样品的 初步分离、纯品制备等
2.经典液相色谱 色谱系统传质阻力大,纵向扩散明显,柱效 低; 色谱柱填充、样品收集等为手工操作,自动 化水平不高; 不需特殊仪器设备,成本低,适用于样品的 初步分离、纯品制备等
3.HPLC优点 与经典液相色谱比较: 1)固定相颗粒极细(一般小于10μm),粒度 规则均匀,传质阻力小,柱效高,分离效率 2)采用高压泵输送流动相,流速快,分析速 度快; 3)采用高灵敏度检测器,在线检测,自动化 程度髙,定量准确、精密度高
3.HPLC优点 与经典液相色谱比较: 1) 固定相颗粒极细(一般小于10μm),粒度 规则均匀,传质阻力小,柱效高,分离效率 高; 2) 采用高压泵输送流动相,流速快,分析速 度快; 3) 采用高灵敏度检测器,在线检测,自动化 程度高,定量准确、精密度高
与GC比较: 1)不受样品的挥发性和热稳定性的影响, 应用范围广; 2)可选用性质不同的各种溶剂为流动相, 提高了分离选择性; 3)室温条件下进行分离,不需高柱温
与GC比较: 1) 不受样品的挥发性和热稳定性的影响, 应用范围广; 2) 可选用性质不同的各种溶剂为流动相, 提高了分离选择性; 3) 室温条件下进行分离,不需高柱温
4.HPLC的主要类型 1)按固定相的聚集状态分:液液色谱法(LLC) 和液固色谱法(LSC) 2)按分离机制分: 分配、吸附、离子交换和空间排阻色谱法; 亲和色谱法;手性色谱法; 胶束色谱法;毛细管电色谱法。 3)化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的一大类色谱法
4.HPLC的主要类型 1)按固定相的聚集状态分:液液色谱法(LLC) 和液固色谱法(LSC) 2) 按分离机制分: 分配、吸附、离子交换和空间排阻色谱法; 亲和色谱法;手性色谱法; 胶束色谱法;毛细管电色谱法。 3)化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的一大类色谱法
二.仪器装置一高效液相色谱仪 包括输液系统、进样系统、色谱柱分离系 统、检测系统和数据处理系统 1输液系统 高压输液泵:分恒压泵和恒流泵,常用恒 流泵。 贮液瓶:其中的流动相应脱气(超声波脱 气和抽真空脱气)
二. 仪器装置—--高效液相色谱仪 包括输液系统、进样系统、色谱柱分离系 统、检测系统和数据处理系统。 1. 输液系统 高压输液泵:分恒压泵和恒流泵,常用恒 流泵。 贮液瓶:其中的流动相应脱气(超声波脱 气和抽真空脱气)