实验四 DNA片段的连接 （向质粒载体中插入外源DNA）
实验四 DNA片段的连接 （向质粒载体中插入外源DNA）
❖ 实验目的 ❖ 实验原理 ❖ 实验仪器、材料与试剂 ❖ 实验步骤 ❖ 实验结果及讨论
❖ 实验目的 ❖ 实验原理 ❖ 实验仪器、材料与试剂 ❖ 实验步骤 ❖ 实验结果及讨论
实验目的 ❖ 了解DNA片段连接的原理， ❖ 掌握DNA连接的方法
实验目的 ❖ 了解DNA片段连接的原理， ❖ 掌握DNA连接的方法
实验原理 ❖ DNA片段之间的连接主要是在DNA连接酶的作 用下，使DNA裂口上核苷酸裸露的3‘羟基和5’磷 酸之间形成共价结合的磷酸二酯键，使原来断开 的DNA裂口连接起来,需ATP
实验原理 ❖ DNA片段之间的连接主要是在DNA连接酶的作 用下，使DNA裂口上核苷酸裸露的3‘羟基和5’磷 酸之间形成共价结合的磷酸二酯键，使原来断开 的DNA裂口连接起来,需ATP
连接酶：把基因连在一起
连接酶：把基因连在一起
DNA重组
DNA重组
装0 00
实验仪器、材料与试剂 （一）仪器 ❖ 1. 恒温水浴锅或恒温箱 ❖ 2. 微量取液器
实验仪器、材料与试剂 （一）仪器 ❖ 1. 恒温水浴锅或恒温箱 ❖ 2. 微量取液器
（二）材料 ❖ 实验三回收的DNA片段
（二）材料 ❖ 实验三回收的DNA片段
( 三) 试剂 ❖ T4 DNA连接酶 ❖ 10X T4 DNA ligase buffer：Tris-HCl（pH 7.6）； MgCl2；DTT；ATP
( 三) 试剂 ❖ T4 DNA连接酶 ❖ 10X T4 DNA ligase buffer：Tris-HCl（pH 7.6）； MgCl2；DTT；ATP