考试6 1X、γ线的杀菌机理是什么? 2氧化剂的杀菌机理是什么? 3福尔马林的主要成分是什么? 4乙醇杀菌机理是什么?其最佳杀菌浓 度是多少? 5青霉素的抗菌机理是什么? 6直接计数法的特点是什么?有哪些具 体方法?
考试6 1.X、γ射线的杀菌机理是什么? 2.氧化剂的杀菌机理是什么? 3.福尔马林的主要成分是什么? 4.乙醇杀菌机理是什么?其最佳杀菌浓 度是多少? 5.青霉素的抗菌机理是什么? 6.直接计数法的特点是什么?有哪些具 体方法?
4.比浊计数法 n浊细菌悬浮液的浊度 细菌不完全透光,一定范围内菌溶液的混浊度与 菌数量成正比
4.比浊计数法 浊——细菌悬浮液的浊度 细菌不完全透光,一定范围内菌溶液的混浊度与 菌数量成正比
(1)制标准曲线(ODNo) 分光光度法测 浊度仪 浊度 2 3 或721 其他细菌计数法 细菌数量 10100100分光 度仪 细菌数量 制标准曲线 菌液浊度 0(2)测菌液浊度,查图表得出细菌数量
(1)制标准曲线(OD~No) (2)测菌液浊度,查图表得出细菌数量 分光光度法测 浊度 1 2 3 4 其他细菌计数法 细菌数量 10 100 1000 10000 个/mL 细菌数量 制标准曲线 菌液浊度 浊度仪 或721 分光光 度仪
(二)间接计数法(活菌计数法) 提问:前述方法中计数的不都是活菌,如何分辨菌死活? 繁殖 口提问:细菌繁殖的可见现象是什么? 产生菌落(固体培养基培养)、菌液混浊(液体培养基培养) 0计数原理:一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌 缺点;慢 分固体培养法和液体培养法
(二)间接计数法(活菌计数法) 提问:前述方法中计数的不都是活菌,如何分辨菌死活? 繁殖 提问:细菌繁殖的可见现象是什么? 产生菌落(固体培养基培养)、菌液混浊(液体培养基培养) 计数原理:一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌. 缺点:慢 分固体培养法和液体培养法
01.稀释平板计数法一固体培养法 第一·苗她释 混合 菌样被 无菌水 不同稀 M-o 释倍率 原平板 培养图 得到不同 稀释度 (10x 10 04 菌液
无菌水 1. 稀释平板计数法—固体培养法 第一步:菌样巧妙稀释 1mL 混合 1mL 混合 9mL 10mL 1 : 10-1 10-1 : 10-2 10-2 10-3 10-4 10-5 得到不同 稀释度 (10-x) 菌液 菌样被 无菌水 不同稀 释倍率 后平板 培养图
第二步:接种平板 各取1ml,均匀涂布于 -5 冷固体培养基平板上或 10 与温热液态固体培养基 混合冷却。 第三步:培养 每一个细菌会生成一个 菌落 稀释度 量太少 过低, 误差因 菌落密 太大, 集无法 放计数 计数 果
10-2 10 -3 10-4 10 -5 各取1ml,均匀涂布于 冷固体培养基平板上或 与温热液态固体培养基 混合冷却。 第三步:培养 稀 释 度 过 低 , 菌 落 密 集 无 法 计数 可以计数 ,但数量 过多,费 时费力 数量合 适,统 计计算, 作为结 果 数 量 太 少 , 误 差 因 素 太 大 , 不做计数 第二步:接种平板 每一个细菌会生成一个 菌落
一般计数平板的细菌生长菌落数以30-300个为 第四步:均 细菌数量=? 细菌数量出的菌落数 例如:105稀释度时菌落数为125个 细菌数量=125/105=1.25×107个mL 平板让数法是采用最广的一种活菌计数法 如国标法水中细总的测定。。 注意;作空自及取平行样2~3组)均值减小 误差
一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为 宜。 第四步: 计数 细菌数量=? 细菌数量=数出的菌落数/稀释度 例如:10-5稀释度时菌落数为125个 细菌数量=125/10-5=1.25×107个/mL 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法 如国标法水中细菌总数的测定 。 注意:作空白及取平行样(2~3组)均值减小 误差 平 均
2稀释液体计数法 特点:液体培养、统计学查表计数 又称MPN法(或最可能数法) n Most probable numl 例如测定SRB(硫酸盐还原菌,厌氧)的数量 提问:能用稀释平板法计数吗?为什么? 般不能,厌氧菌暴露在空气中不能生长(除非厌氧 培养箱) 对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进 行深层區氢液体培养,按MPN法进行计数
2.稀释液体计数法 特点:液体培养、统计学查表计数 又称MPN法(或最可能数法) Most Probable Number 例如测定SRB(硫酸盐还原菌,厌氧)的数量 提问:能用稀释平板法计数吗?为什么? 一般不能,厌氧菌暴露在空气中不能生长(除非厌氧 培养箱) 对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进 行深层隔氧液体培养,按MPN法进行计数
提问:为什么有些试 管变黑有些没有? 10210310103稀释程度、取样概率 (2)稀释接种样品 在液体表面加一层无菌 培养基 液体石蜡隔绝氧气, 9m 103 106 (3)培养 恒温37℃培养14天 记录变黑的试管情况 332
3 3 2 0 10 -4 10-5 10 3 -6 10- 10-2 10-3 10-4 10-5 (1)稀释 (2)稀释接种样品 在液体表面加一层无菌 液体石蜡隔绝氧气, 恒温37℃培养14天 记录变黑的试管情况 (3)培养 1ml + 9ml 培 养 基 提问:为什么有些试 管变黑有些没有? 稀释程度、取样概率
4)统计一查表一计算 根据不同稀释度变黑试管 0①统计出数量指标 ②查表 0三位数及其中最低稀释度表MPN表 (取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管 数,为第一位数字,后面两个稀释度的生长管 数后两位数) 提问:上例情况而言统计数量是几? 320104
(4)统计-查表-计算 根据不同稀释度变黑试管 ①统计出数量指标 三位数及其中最低稀释度 (取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管 数,为第一位数字,后面两个稀释度的生长管 数后两位数) 提问:上例情况而言统计数量是几? ②查表 表——MPN表 320 10-4