4.3 特殊变异菌的筛选方法：
4.3 特殊变异菌的筛选方法：
以温度敏感突变为例： 筛选方法： 用途：常用于提高代谢物产量 原因：是由于某一酶蛋白结构 改变后，在高温下活力丧失 重要性：如果此酶为蛋白质、 核酸合成途径中所需的酶， 则此变异株在高温下的表型 就是营养缺陷型。 4.3.1条件抗性突变型的筛选
以温度敏感突变为例： 筛选方法： 用途：常用于提高代谢物产量 原因：是由于某一酶蛋白结构 改变后，在高温下活力丧失 重要性：如果此酶为蛋白质、 核酸合成途径中所需的酶， 则此变异株在高温下的表型 就是营养缺陷型。 4.3.1条件抗性突变型的筛选
举例： ◆由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌2256，经诱变处理 得到温度敏感变异株Ts88: ◆30℃培养时能正常生长 ◆40℃是死亡，但能在富含生物素的培养基中积累谷 氨酸（而野生型却受生物素的反馈抑制）。 ◆在富含生物素的培养基中进行发酵时： ◆先在30℃（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞， 适当时间后提高温度（ 40℃ ，非允许条件），即能获 得谷氨酸的过量生产
举例： ◆由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌2256，经诱变处理 得到温度敏感变异株Ts88: ◆30℃培养时能正常生长 ◆40℃是死亡，但能在富含生物素的培养基中积累谷 氨酸（而野生型却受生物素的反馈抑制）。 ◆在富含生物素的培养基中进行发酵时： ◆先在30℃（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞， 适当时间后提高温度（ 40℃ ，非允许条件），即能获 得谷氨酸的过量生产
方法：梯度平板法（gradient plate） 4.3.2抗药性突变株的筛选 抗药性突变株的应用： ◆作为菌株的遗传标记 ◆作为生产菌种（结构类似物抗性变异株）
方法：梯度平板法（gradient plate） 4.3.2抗药性突变株的筛选 抗药性突变株的应用： ◆作为菌株的遗传标记 ◆作为生产菌种（结构类似物抗性变异株）
4.3.3抗生素抗性变异株的筛选：
4.3.3抗生素抗性变异株的筛选：
★与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体： 营养缺陷型：经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必 须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌 株。如：lys -， bio- 野生型：自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷 突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。 如：lys + ; bio + ; 原养型 ：指营养缺陷型突变菌株回复突变或重组后产生的 菌株，与野生型的表型相同。 4.3.4 营养缺陷型(auxotroph)的筛选
★与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体： 营养缺陷型：经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必 须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌 株。如：lys -， bio- 野生型：自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷 突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。 如：lys + ; bio + ; 原养型 ：指营养缺陷型突变菌株回复突变或重组后产生的 菌株，与野生型的表型相同。 4.3.4 营养缺陷型(auxotroph)的筛选
★与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基 基本培养基（MM）[-]：凡是能满足野生型菌株 营养要求的最低成分的合成培养基。 完全培养基（CM）[+]：满足一切营养缺陷型菌 株生长的天然或半合成培养基。 补充培养基（SM）[x]：在MM中有针对性地加 入一或几种营养成分以满足相应营养缺陷型 菌株生长的合成培养基
★与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基 基本培养基（MM）[-]：凡是能满足野生型菌株 营养要求的最低成分的合成培养基。 完全培养基（CM）[+]：满足一切营养缺陷型菌 株生长的天然或半合成培养基。 补充培养基（SM）[x]：在MM中有针对性地加 入一或几种营养成分以满足相应营养缺陷型 菌株生长的合成培养基
★营养缺陷型诱变筛选步骤及方法 auxo的鉴定 诱变处理 auxo的浓缩 auxo的检出
★营养缺陷型诱变筛选步骤及方法 auxo的鉴定 诱变处理 auxo的浓缩 auxo的检出
缺陷型的浓缩： ①抗生素法 原理： 青霉素、制霉 菌素等抗生素作用于生 长着的微生物细胞，对 休止态细胞无作用。 方法：将菌培养在含抗 生素的MM基中
缺陷型的浓缩： ①抗生素法 原理： 青霉素、制霉 菌素等抗生素作用于生 长着的微生物细胞，对 休止态细胞无作用。 方法：将菌培养在含抗 生素的MM基中
②菌丝过滤法 ◆ 适用于：丝状（放线菌、霉 菌） ◆ 原理：基本培养基上只有发 育成菌丝；auxo孢子可通 过滤膜，野生型菌丝不能通 过
②菌丝过滤法 ◆ 适用于：丝状（放线菌、霉 菌） ◆ 原理：基本培养基上只有发 育成菌丝；auxo孢子可通 过滤膜，野生型菌丝不能通 过