实验七 士壤中微生物的分离 及纯化（设计性实验）
实验七 土壤中微生物的分离 及纯化（设计性实验）
目的要求 ▣掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物 的基本操作技术。 口学习平板菌落计数的基本原理和方法 。 ▣初步观察来自土壤中的三大类群微生物的 菌落形态特征
一、目的要求 掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物 的基本操作技术。 学习平板菌落计数的基本原理和方法 。 初步观察来自土壤中的三大类群微生物的 菌落形态特征
二、 基本原理 ▣在士壤、水、空气或人及动、植物体中 不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活 在一起，当我们希望获得某一种微生物时 就必须从混杂的微生物类群中分离它，以 得到只含有这一种微生物的纯培养，这种 获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化
二、基本原理 在土壤、水、空气或人及动、植物体中， 不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活 在一起，当我们希望获得某一种微生物时， 就必须从混杂的微生物类群中分离它，以 得到只含有这一种微生物的纯培养，这种 获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化
▣为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该 微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同， 而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂 造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环 境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用 稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线 分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌 株
为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该 微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同， 而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂 造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环 境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用 稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线 分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌 株
▣土壤是微生物生活的大本营，在这里生活 的微生物无论是数量和种类都是极其多样 的，因此，土壤是我们开发利用微生物资 源的重要基地，可以从其中分离、纯化到 许多有用的菌株
土壤是微生物生活的大本营，在这里生活 的微生物无论是数量和种类都是极其多样 的，因此，土壤是我们开发利用微生物资 源的重要基地，可以从其中分离、纯化到 许多有用的菌株
▣平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后 其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量 的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个 单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一 个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计 菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换 算出样品中的含菌数
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后， 其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量 的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个 单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一 个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计 菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换 算出样品中的含菌数
口但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个 细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品 中的2~3或更多个细胞。因此平板菌落计数的 结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数 的结果，现在已倾向使用菌落形成单位 (colony-forming units,cf而不以绝对菌 落数来表示样品的活菌含量
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个 细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品 中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的 结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数 的结果，现在已倾向使用菌落形成单位 (colony-forming units，cfu)而不以绝对菌 落数来表示样品的活菌含量
三器材 ▣高氏1号琼脂培养基，肉膏蛋白胨琼脂培养基 马丁氏琼脂培养基，盛9m无菌水的试管，盛 90无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻 璃涂棒，无菌吸管，接种环，10%酚，无菌培 养皿，链霉素，土样等。 ▣大肠杆菌菌悬液、牛肉膏蛋白胨培养基。m1 无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5m无菌水的试 管，试管架，恒温培养箱等
三、器材 高氏1号琼脂培养基，肉膏蛋白胨琼脂培养基， 马丁氏琼脂培养基，盛9ml无菌水的试管，盛 90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻 璃涂棒，无菌吸管，接种环，10％酚，无菌培 养皿，链霉素，土样等。 大肠杆菌菌悬液、 牛肉膏蛋白胨培养基。lm1 无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试 管，试管架，恒温培养箱等
四、操作步骤一一获得纯培养的方法 1,稀释涂布平板法 (1)倒平板将肉膏蛋白胨培养基、高氏1号 琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基溶化，待冷至 55~60°℃时，向高氏1号琼脂培养基中加入10 %酚数滴，向马丁氏培养基中加入链霉素溶液， 使每毫升培养基中含链霉素30μg。然后分别倒 平板，每种培养基倒三皿
四、操作步骤-获得纯培养的方法 1．稀释涂布平板法 （1）倒平板 将肉膏蛋白胨培养基、高氏1号 琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基溶化，待冷至 55～60℃时，向高氏1号琼脂培养基中加入10 ％酚数滴，向马丁氏培养基中加入链霉素溶液， 使每毫升培养基中含链霉素30μg。然后分别倒 平板，每种培养基倒三皿
①液体稀释法 1.0m 10m 10m 10 ml Tentold Tan'old 130 dilution dilution diution bacteria 10 ml Agar poured into 9ml H2O 9'ml H2O 10 mi melted agar at 45 amp e of 69m 41.000 (100 bactera/mh 10 bacteria/ml:100 162ml per tube) dish hactera (10.000 bacterla/mi) 0'/ml 10*m1 首先将待分离的样品进行连续稀释，目的是得到高度稀释 的效果，使一支试管中分配不到一个微生物如果经过稀 释后的大多数试管中没有微生物生长，那么有微生物生长 的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而 来的纯培养物. 这种方法适合于细胞较大的微生物
首先将待分离的样品进行连续稀释,目的是得到高度稀释 的效果,使一支试管中分配不到一个微生物.如果经过稀 释后的大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物生长 的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而 来的纯培养物. 这种方法适合于细胞较大的微生物. ①液体稀释法