实验三 微生物菌落制片技术
实验三 微生物菌落制片技术
一、目的要求 ÷1.学习并掌握放线菌形态的制片方法 。 ÷2.学习并掌握霉菌的制片方法
一、目的要求 ❖ 1 ．学习并掌握放线菌形态的制片方法． ❖ 2．学习并掌握霉菌的制片方法
二、基本原理 放线菌扦片法：将放线菌接种在琼脂平板上，托 上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基 表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观 察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。 ·这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征 而且便于观察不同生长期的形态
二、基本原理 ❖ 放线菌扦片法：将放线菌接种在琼脂平板上，扦 上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基 表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观 察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。 ❖ 这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征， 而且便于观察不同生长期的形态
÷霉菌载玻片培养法：无菌操作将培养基琼脂薄层置 于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养物，霉菌即在 载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生 长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微 镜下观察。 ·这种方法既可以保持了霉菌自然生长状态，还便于 观察不同发育期的培养物
❖ 霉菌载玻片培养法：无菌操作将培养基琼脂薄层置 于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养物，霉菌即在 载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生 长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微 镜下观察。 ❖ 这种方法既可以保持了霉菌自然生长状态，还便于 观察不同发育期的培养物
三、器材 ÷菌种链霉菌；曲霉，青霉，根霉 ÷培养基马铃薯琼脂培养基 ÷仪器或其他用具灭菌平皿、载玻片、盖玻 片、U形玻棒，接种环，解剖刀，镊子， 20%的甘油，显微镜等
三、器材 ❖ 菌种 链霉菌；曲霉，青霉，根霉 ❖ 培养基 马铃薯琼脂培养基 ❖ 仪器或其他用具 灭菌平皿、载玻片、盖玻 片、U形玻棒，接种环，解剖刀，镊子， 20%的甘油，显微镜等
四、操作步骤 1.放线菌扦片法 盥玻片 培养基 冬倒平板取融化并冷至丝 琼脂约20mL倒平 图V-7扦片法 接种用接种环挑取菌 脂平板上划线接种。 扦片以无菌操作用镊手 片以大约45角扦) 片数量可根据需要
四、操作步骤 ❖ 1.放线菌扦片法 ❖ 倒平板 取融化并冷至约50 ℃ 的高氏1 号 琼脂约20mL 倒平板，凝固待用； 接 种 用接种环挑取菌种斜面培养物在琼 脂平板上划线接种。 扦 片 以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻 片以大约45 °角扦入琼脂内，扦 片数量可根据需要而定
培养将扦片平板倒置，28℃培养3~ 5d, 镜检用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面 培养物，将有菌的一面朝上放在载玻 片上，直接镜检
培养 将扦片平板倒置，28 ℃ 培养3 ～ 5d 。 镜检 用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面 培养物，将有菌的一面朝上放在载玻 片上，直接镜检
注意 1划线要细密些，以利扦片； 2扦片要扦在接种线上；
注意 1 划线要细密些,以利扦片； 2 扦片要扦在接种线上；
÷2霉菌载玻片培养法 培养小室的灭菌 图V一8载玻片培养法示意图 上正面观：下：侧测面观 1.平皿：2.U形玻棒；3.益玻片： 4,培养物：5.载破片；6.保显用滤 琼脂块的制作取已灭菌的马 入另一灭菌的平皿中，使 剖刀切成0.5~1cm2的琼 培养室中的载玻片上（每
❖ 2 霉菌载玻片培养法 培养小室的灭菌 琼脂块的制作 取已灭菌的马铃薯培养基6～7mL注 入另一灭菌的平皿中，使之凝固成薄层。用解 剖刀切成0.5～1cm2的琼脂快，并将其移至上述 培养室中的载玻片上（每片放两块）
接种用尖细的接种针挑取少 琼脂快的边缘上，用无菌 玻片覆盖在琼脂快上。 培养先在平皿的滤纸上加3~5ml灭菌的20% 甘油，盖上皿盖，28℃培养。 镜检根据需要可在不同的培养时间内取出载 玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜
接种 用尖细的接种针挑取少量的孢子接种于 琼脂快的边缘上，用无菌操作镊子将盖 玻片覆盖在琼脂快上。 培养 先在平皿的滤纸上加3～5ml灭菌的20% 甘油，盖上皿盖，28℃培养。 镜检 根据需要可在不同的培养时间内取出载 玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜
