实验九 玻璃器皿的清洗包扎， 培养基的配制及灭菌
实验九 玻璃器皿的清洗包扎， 培养基的配制及灭菌
目的要求 ● 1、明确培养基的配制原理。 ●2、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制 培养基的一般方法和步骤。 ●3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 ●4、了解干热灭菌的原理和应用范围。 ●5、了解紫外线灭菌的原理和方法。 ●6、玻璃器皿的清洗包扎要熟练操作
一、目的要求 ⚫ 1、明确培养基的配制原理。 ⚫ 2、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制 培养基的一般方法和步骤。 ⚫ 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 ⚫ 4、了解干热灭菌的原理和应用范围。 ⚫ 5、了解紫外线灭菌的原理和方法。 ⚫ 6、玻璃器皿的清洗包扎要熟练操作
二、 基本原理 ●牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。 它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为 微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要 提供氮源，而NaC提供无机盐。在配制固体培 养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在 常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸 水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂 烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分 解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的 质量和气温的不同而有所不同
二、基本原理 ⚫ 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。 它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为 微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要 提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培 养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在 常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸 水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂 烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分 解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的 质量和气温的不同而有所不同
由于这种培养基多用于培养细菌，因此 要用稀酸或稀碱将其H调至中性或微碱性 以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培 养基的配方如下： 牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15~20g 水 1000ml pH7.4~7.6
由于这种培养基多用于培养细菌，因此， 要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性， 以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培 养基的配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂15～20g 水 1000ml pH 7．4～7．6
压力表 互有南用 排气阀 安全阀 软管 紧固螺栓 灭菌桶 筛架 9 “水别量圆醒酒 图Ⅱ-7手提式灭菌锅
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。 搁板观察窗箱门 门拉手 0 00 00 用 电源指示灯 铭牌 硅橡胶门封条 电源开关洲 控温仪 图Ⅱ-5电热干燥箱的外观和结构
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的
空面名 压力表一 83 装气气阀- 排气口 夹层 温度计阀 蒸气供应阀一》 路分通 图92手提式灭菌锅 1.安全阀：2.压力表：3放气阀：4.软管：5.紧固 图91卧式灭菌锅 螺栓：6灭菌桶：7筒架：8.水 表91蛋白质含水量与凝固所需温度的关系 卵白蛋白含水量/代 30分钟内凝的所福温度/℃ 50 56 25 74-80 18 80-90 6 145
●紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长 为200一300nm的紫外线都有杀菌能力， 其中以260nm的杀菌力最强。 为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外 线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内) 喷洒3一5%的石炭酸溶液，一方面使空 气中附着有微生物的尘埃降落，另一方 面也可以杀死一部分细菌
⚫紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长 为200—300nm的紫外线都有杀菌能力， 其中以260nm的杀菌力最强。 为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外 线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内） 喷洒3—5％的石炭酸溶液，一方面使空 气中附着有微生物的尘埃降落，另一方 面也可以杀死一部分细菌
超净工作台内紫外灯（线）灭菌 oxunew
超净工作台内紫外灯（线）灭菌
三、器材 ●牛肉膏，蛋白胨，NaCl,琼脂； 1mol/L NaOH,1mol/L HCI; 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培 养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸 汽灭菌锅，pH试纸(pH5.5~9.0), 棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等
三、器材 ⚫牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH， 1mol/L HCl； 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培 养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸 汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5～9．0）， 棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等