实验八化学因素对微生物 的影响
实验八 化学因素对微生物 的影响
一、目的要求 ▣1·了解常用化学药品对微生物的作用： 口2·学习测定石炭酸系数的方法
一、目的要求 1．了解常用化学药品对微生物的作用。 2．学习测定石炭酸系数的方法
二、基本原理 口重金属离子可与菌体蛋白质结合使之变性或 与某些蛋白的巯基结合而使酶失活，重金属 盐则是蛋白质沉淀剂，或与代谢产物发生螯 合作用而使其变为无效化合物； ▣有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可以破 坏细胞膜透性使内含物外溢： ▣碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋 白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化 剂也有杀菌作用；
二、基本原理 重金属离子可与菌体蛋白质结合使之变性或 与某些蛋白的巯基结合而使酶失活，重金属 盐则是蛋白质沉淀剂，或与代谢产物发生螯 合作用而使其变为无效化合物； 有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可以破 坏细胞膜透性使内含物外溢； 碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋 白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化 剂也有杀菌作用；
▣为了比较各种化学消毒剂的杀菌能力，常以石 炭酸为标准，即将某一消毒剂作不同稀释后， 在一定条件下，一定时间内致死全部供试微生 物的最高稀释浓度，与达到同样效果的石炭酸 的最高稀释度的比值，称为这种消毒剂对该种 微生物的石炭酸系数（酚系数)。石炭酸系数 越大，说明该消毒剂杀菌能力越强
为了比较各种化学消毒剂的杀菌能力，常以石 炭酸为标准，即将某一消毒剂作不同稀释后， 在一定条件下，一定时间内致死全部供试微生 物的最高稀释浓度，与达到同样效果的石炭酸 的最高稀释度的比值，称为这种消毒剂对该种 微生物的石炭酸系数（酚系数）。石炭酸系数 越大，说明该消毒剂杀菌能力越强
三、器材 ▣1、菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌； 口2、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，牛肉膏 蛋白胨液体培养基。 ▣3、溶液或试剂：2.5%碘酒、0.1%升汞、5% 石炭酸、75%乙醇，100%乙醇，1%来苏 尔，0.25%新洁尔灭0.005%龙胆紫，0.05%龙 胆紫，无菌水生理盐水。 ▣4、仪器或其他用具：无菌培养皿，无菌滤纸片、 试管、吸管、三角涂棒、涂布器、镊子、移液 枪等
三、器材 1、菌种：大肠杆菌,金黄色葡萄球菌； 2、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,牛肉膏 蛋白胨液体培养基. 3、溶液或试剂：2.5%碘酒、0.1%升汞、5% 石炭酸、75%乙醇,100%乙醇,1%来苏 尔,0.25%新洁尔灭,0.005%龙胆紫，0.05%龙 胆紫，无菌水生理盐水。 4、仪器或其他用具：无菌培养皿，无菌滤纸片、 试管、吸管、三角涂棒、涂布器、镊子、移液 枪等
四、操作步骤 图X一1贴滤纸片 ▣1，滤纸片法测定化学消毒剂的杀菌作用 (1)将已灭菌并冷却至50°℃左右的牛肉膏蛋 白胨琼脂培养基倒入无菌平皿中，水平放 置待凝固。 (2)用无菌吸管吸取0.2ml培养18小时的金 黄色葡萄球菌菌液加入到上述平板中，用 无菌三角涂棒涂布均匀。 (3)将已涂布好的平板底皿划分成4~6等份， 每一等份内标明一种消毒剂的名称
四、操作步骤 1．滤纸片法测定化学消毒剂的杀菌作用 (1)将已灭菌并冷却至50℃左右的牛肉膏蛋 白胨琼脂培养基倒入无菌平皿中，水平放 置待凝固。 (2)用无菌吸管吸取0.2ml培养18小时的金 黄色葡萄球菌菌液加入到上述平板中，用 无菌三角涂棒涂布均匀。 (3)将已涂布好的平板底皿划分成4～6等份， 每一等份内标明一种消毒剂的名称
目 (4)用无菌镊子将已灭菌的小圆形滤纸片 (D5mm)分别浸入装有各种消毒溶液的试管 中浸湿。注意取出滤纸片时保证过滤纸片所含 消毒剂溶液量基本一致，并在试管内壁沥去多 余药液。无菌操作将滤纸片贴在平板相应区域 平板中间贴上浸有无菌生理盐水的滤纸片作为 对照。 ▣5)将上述贴好滤纸片的含菌平皿，倒置于37°℃ 温室中培养24小时后，取出测定抑菌圈大小 并说明其杀菌强弱
(4)用无菌镊子将已灭菌的小圆形滤纸片 （D5mm）分别浸入装有各种消毒溶液的试管 中浸湿。注意取出滤纸片时保证过滤纸片所含 消毒剂溶液量基本一致，并在试管内壁沥去多 余药液。无菌操作将滤纸片贴在平板相应区域， 平板中间贴上浸有无菌生理盐水的滤纸片作为 对照。 (5)将上述贴好滤纸片的含菌平皿，倒置于37℃ 温室中培养24小时后，取出测定抑菌圈大小， 并说明其杀菌强弱
图Ⅸ-2圆滤纸片法测定化学消毒剂的杀（抑）菌作用
