实验五 微生物显微镜 直接计数法
实验五 微生物显微镜 直接计数法
一、目的要求 。1.掌握显微镜计数的原理。 ·2.学习使用血球计数板进行微生物计 数的方法
一、目的要求 ⚫ 1．掌握显微镜计数的原理。 ⚫ 2．学习使用血球计数板进行微生物计 数的方法
二、基本原理 ·将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在 血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中， 在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一 定的（0.1mm3),所以可以根据在显微镜下 观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微 生物总数目。 由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故 又称为总菌计数法
二、基本原理 ⚫ 将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在 血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中， 在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一 定的（0.1mm3），所以可以根据在显微镜下 观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微 生物总数目。 ⚫ 由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故 又称为总菌计数法
播6深了 ×每长25 0204,1 ·血球计数板上由四条相 8.18m四 1/499 台又被一短横槽隔成病 有一个方格网，每个方 G 间的大方格即为计数 室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方 格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小 方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25 个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总 共也是400小格。 ·所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中 的小方格数都是相同的
⚫ 血球计数板上由四条槽构成三个平台。中间的平 台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻 有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中 间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数 室中进行。 ⚫ 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方 格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小 方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25 个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总 共也是400小格。 ⚫ 所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中 的小方格数都是相同的
小方格 中方格 0.1mm XB-K-25 406nm3 # B 图Ⅷ-1血细胞计数板构造（一） 16×25 A正面图；B纵切面图： 图VB2血细胞计数板构造（二） 放大后的方格网，中间大方格为计数室 1血细胞计数板；2盖玻片；3计数室 血细胞计数板
血细胞计数板
● 每一个大方格边长为1mm,则每一大方格的 面积为1mm2,盖上盖玻片后，载玻片与盖 玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容 积为0.1mm3。其计算方法如下： 1.16×25的计数板计算公式 细胞个数/l=(100小格内的细胞数 100)×400×1000×稀释倍数 2.25×16的计数板计算公式 细胞个数/l=(80小格内的细胞数 80)×400×1000×稀释倍数
⚫ 每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的 面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖 玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容 积为0.1mm3。其计算方法如下： 1．16×25的计数板计算公式 细胞个数/ml=(100小格内的细胞数 100)×400 ×1000×稀释倍数 2．25×16的计数板计算公式 细胞个数/ml=(80小格内的细胞数 80)×400×1000×稀释倍数
三、器材 菌种：酵母菌悬液 ò 仪器或其他用具：血球计数板，显微 镜，盖玻片，无菌毛细管等
三、器材 ⚫ 菌种：酵母菌悬液 ⚫ 仪器或其他用具：血球计数板，显微 镜，盖玻片，无菌毛细管等
四、操作步骤 。1.菌悬液制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适 当的菌悬液。 ·2.镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜 检。若有污物，则需清洗后才能进行计 数
四、操作步骤 ⚫ 1．菌悬液制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适 当的菌悬液。 ⚫ 2．镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜 检。若有污物，则需清洗后才能进行计 数
●3.加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的 细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小 滴，使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数 室，一般计数室均能充满菌液。静置5~10分钟 即可计数
⚫ 3．加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的 细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小 滴，使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数 室，一般计数室均能充满菌液。静置5～10分钟 即可计数
。4.显微镜计数 将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜 找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。 一般样品稀释度要求每小格内约有5~10个菌体 为宜
⚫ 4．显微镜计数 将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜 找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。 一般样品稀释度要求每小格内约有5～10个菌体 为宜