附录6.常用染料和试剂的配制与使用 附录6.常用染料和试剂的配制与使用 1.碘一硫酸法 植物细胞细胞壁的主要成分是纤维素,纤维素被硫酸水解后,遇碘呈蓝色反应。因此用 碘一硫酸法可鉴定细胞壁的成分。 试剂配制方法: 1%碘液将1.5克碘化钾溶于100毫升的蒸馏水中,待完全溶解后,加入1克碘,震 荡溶解。 66.5%硫酸7份浓硫酸加入3份蒸馏水配制而成。配制时要将浓硫酸慢慢地加入λ水中 并不断地用玻璃棒搅拌,否则会因急剧发热,而使容器炸裂。 2.苏丹Ⅲ反应 苏丹Ⅲ可将细胞中脂肪、栓质、角质染为桔红色,因此可用此染料显示出上述物质在细 胞中的分布和位置。 配制方法:将苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染料0.1克,溶于10毫升95%酒精中,然后加入 10毫升甘油 3.间苯三酚反应法 间苯三酚反应是植物显微化学中确定木质化细胞壁的最常用和最简单的方法。这一反应 的原理是当间苯三酚在酸性环境下与细胞壁中的木质素相遇时,发生樱桃红色或紫红色反 应。其方法是将要鉴定的切片先用一滴lmol/L盐酸浸透(间苯三酚要在酸性环境下才能与 木质素起作用),然后滴一滴5-10%间苯三酚的85%酒精溶液,木质化的细胞壁即发生颜色 4.碘液测试淀粉法 淀粉遇碘呈蓝色反应,它是鉴定淀粉的最常用方法。 碘液配制方法:将2克碘化钾放入5毫升蒸馏水中,加热使其完全溶解;然后加入1 克碘,完全溶解后用蒸馏水稀释至300毫升,放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中,置于暗处 保存 测定淀粉时,可将上述溶液稀释2-10倍,使染色不致过深,效果更好。 5.压片法常用的染料 (1)醋酸洋红为压片法中最常用的染料。 配制方法是:先将100毫升45%醋酸水溶液放于烧瓶中煮沸,移去火焰,停止加热 然后缓慢加入1克洋红粉末,全部加入后再煮沸1-2分钟。此时可将一枚生锈铁钉用棉线悬 入溶液中约1分钟后取出(铁为媒染剂)。静置12小时后经过过滤,放入磨口玻璃塞棕色瓶 中保存备用。 (2)石炭酸-—品红为近年创用的一种优良核染色剂,将细胞核和染色体染为红紫色, 细胞质一般不着色,背景清晰。 其配制方法有二 配方I 原液A:取3克碱性品红溶于100毫升的70%酒精中(此液体可长期保存)。 原液B:取10毫升原液A,加入90毫升5%的石炭酸(酚)水溶液中(可保存两周)
附录 6. 常用染料和试剂的配制与使用 附录 6. 常用染料和试剂的配制与使用 1. 碘－硫酸法 植物细胞细胞壁的主要成分是纤维素，纤维素被硫酸水解后，遇碘呈蓝色反应。因此用 碘－硫酸法可鉴定细胞壁的成分。 试剂配制方法： 1% 碘液 将 1.5 克碘化钾溶于 100 毫升的蒸馏水中，待完全溶解后，加入 1 克碘，震 荡溶解。 66.5% 硫酸 7 份浓硫酸加入 3 份蒸馏水配制而成。配制时要将浓硫酸慢慢地加入水中， 并不断地用玻璃棒搅拌，否则会因急剧发热，而使容器炸裂。 2. 苏丹Ⅲ反应 苏丹Ⅲ可将细胞中脂肪、栓质、角质染为桔红色，因此可用此染料显示出上述物质在细 胞中的分布和位置。 配制方法：将苏丹Ⅲ （或苏丹Ⅳ）染料 0.1 克，溶于 10 毫升 95% 酒精中，然后加入 10 毫升甘油。 3. 间苯三酚反应法 间苯三酚反应是植物显微化学中确定木质化细胞壁的最常用和最简单的方法。这一反应 的原理是当间苯三酚在酸性环境下与细胞壁中的木质素相遇时，发生樱桃红色或紫红色反 应。其方法是将要鉴定的切片先用一滴 1mol/L 盐酸浸透（间苯三酚要在酸性环境下才能与 木质素起作用），然后滴一滴 5-10% 间苯三酚的 85% 酒精溶液，木质化的细胞壁即发生颜色 反应。 4．碘液测试淀粉法 淀粉遇碘呈蓝色反应，它是鉴定淀粉的最常用方法。 碘液配制方法：将 2 克碘化钾放入 5 毫升蒸馏水中，加热使其完全溶解；然后加入 1 克碘，完全溶解后用蒸馏水稀释至 300 毫升，放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中，置于暗处 保存。 测定淀粉时，可将上述溶液稀释 2-10 倍，使染色不致过深，效果更好。 5. 压片法常用的染料 (1) 醋酸洋红 为压片法中最常用的染料。 配制方法是：先将 100 毫升 45% 醋酸水溶液放于烧瓶中煮沸，移去火焰，停止加热。 然后缓慢加入 1 克洋红粉末，全部加入后再煮沸 1-2 分钟。此时可将一枚生锈铁钉用棉线悬 入溶液中约 1 分钟后取出（铁为媒染剂）。静置 12 小时后经过过滤，放入磨口玻璃塞棕色瓶 中保存备用。 (2) 石炭酸---品红 为近年创用的一种优良核染色剂，将细胞核和染色体染为红紫色， 细胞质一般不着色，背景清晰。 其配制方法有二： 配方Ⅰ： 原液 A：取 3 克碱性品红溶于 100 毫升的 70％酒精中（此液体可长期保存）。 原液 B：取 10 毫升原液 A，加入 90 毫升 5% 的石炭酸(酚)水溶液中(可保存两周)
附录6.常用染料和试剂的配制与使用 染色液:取55毫升原液B加6毫升冰醋酸和6亳升37%甲醛。 此染色液因含有较多的甲醛,可使原生质体硬化,而能保持其固有的形态。但也因此不 易使组织软化,因而不太适用于植物组织的染色体压片染色(本染色液适于植物原生质体培 养中使用)。在此基础上加以改进的配方Ⅱ,则可普遍地用于一般植物组织的染色体压片的 染色。 配方Ⅱ 取配方Ⅰ中的染色液20毫或加80亳升45%醋酸和1.8克山梨醇。 染色液配制后为淡品红色,如立即使用染色较浅。放置2周后,染色能力显著增强,而 且放置时间越久,染色效果越好 6.铬酸一硝酸离析法 为了观察一个细胞完整的立体形态结构,可以用一些化学药品把细壁中的中层物质(果 胶质)溶解,使细胞分离散开,便于观察。 离析前先把材料洗净,用刀切成1-2毫米宽的狭条(如叶片)或切成火柴棍粗细的长约 1厘米的小条(如根或茎)。然后把切好的材料放进小玻璃瓶中,加入离析液(加入量约为材 料的20倍),塞紧瓶塞,放于30-40℃温箱中。浸渍时间因材料性质而异,叶片和幼嫩的 根茎组织3-4小时即可,而有些次生结构(如木质部)则需要更长的时间。离析情况应随时 检査,检査的方法是取少许离析材料,放在载玻片上,加一滴水,盖上盖玻片,然后用解剖 针尖端轻轻敲打,如果材料分离则表明浸渍时间已够。浸渍时间超过一天以上时,应更换离 析液一次。离析时间已够的材料,用水洗净后放入70%酒精中保存 离析液配方: 10%铬酸1份 10%硝酸 两种溶液应在使用时才混合,混合均匀后再使用
附录 6. 常用染料和试剂的配制与使用 染色液：取 55 毫升原液 B 加 6 毫升冰醋酸和 6 毫升 37% 甲醛。 此染色液因含有较多的甲醛，可使原生质体硬化，而能保持其固有的形态。但也因此不 易使组织软化，因而不太适用于植物组织的染色体压片染色（本染色液适于植物原生质体培 养中使用）。在此基础上加以改进的配方Ⅱ，则可普遍地用于一般植物组织的染色体压片的 染色。 配方Ⅱ： 取配方Ⅰ中的染色液 20 毫或加 80 毫升 45% 醋酸和 1.8 克山梨醇。 染色液配制后为淡品红色，如立即使用染色较浅。放置 2 周后，染色能力显著增强，而 且放置时间越久，染色效果越好。 6．铬酸－硝酸离析法 为了观察一个细胞完整的立体形态结构，可以用一些化学药品把细壁中的中层物质（果 胶质）溶解，使细胞分离散开，便于观察。 离析前先把材料洗净，用刀切成 1-2 毫米宽的狭条（如叶片）或切成火柴棍粗细的长约 1 厘米的小条(如根或茎)。然后把切好的材料放进小玻璃瓶中，加入离析液（加入量约为材 料的 20 倍），塞紧瓶塞，放于 30-40℃ 温箱中。浸渍时间因材料性质而异，叶片和幼嫩的 根茎组织 3-4 小时即可，而有些次生结构（如木质部）则需要更长的时间。离析情况应随时 检查，检查的方法是取少许离析材料，放在载玻片上，加一滴水，盖上盖玻片，然后用解剖 针尖端轻轻敲打，如果材料分离则表明浸渍时间已够。浸渍时间超过一天以上时，应更换离 析液一次。离析时间已够的材料，用水洗净后放入 70% 酒精中保存。 离析液配方： 10% 铬酸 1 份 10%硝酸 1 份 两种溶液应在使用时才混合，混合均匀后再使用