绿素的提取及理化性质的鉴定 叶绿素的提取及理化性质的鉴定17 叶绿素是植物吸收太阳光能进行光合作用的主要色素,高等植物叶绿体中主要含叶绿素 a和叶绿素b 图17.1叶绿素分子式 叶绿素是一个双羧酸的酯,在碱的作用下可发生皂化反应,产生叶绿酸钾。在酸性条件 下,卟啉环中央的镁离子可以被H取代,产生褐色的去镁叶绿素。叶绿素中的Mg”也可以 被其它金属离子,如Cu”或Zn”等取代,此时叶绿素仍保持绿色。叶绿素在光照下会发出 暗红色的荧光。 实验目的: 1.了解叶绿素的分子结构、理化性质及其生物学功能。 2.学习提取叶绿素并对其理化性质进行分析的基本方法 实验内容: 利用叶绿素能溶于有机溶剂的特性,用丙酮将叶绿素从叶中提取出来,再运用一些简单 的物理和化学方法鉴定叶绿素的理化性质。 实验步骤: 1.叶绿素的提取 ▲将新鲜菠菜( spinacia)叶片洗净擦干,去叶柄及叶脉。称取样品8g,剪碎置硏 钵内,加入8cm3丙酮及少许固体碳酸钠,迅速研磨成匀浆;然后再加入20cm丙酮充分研磨 在一玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉,将匀浆通过脱脂棉过滤至已装有20cm3石油醚 的分液漏斗中,再用少量的丙酮冲洗叶片残渣及研钵,合并滤液 ▲沿分液漏斗的壁小心加入40cm3蒸镏水,轻轻摇动,使色素转移到上面的石油醚层 静置数分钟,待分层清楚后弃去下面的丙酮一一水层。如发生乳化现象可加入2-3cm3饱和 NaCl溶液。 ▲在分液漏中再加入40cm3蒸镏水,轻轻摇动,以洗去石油醚中残留的丙酮,共洗 次。然后将叶绿素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中,置暗处或用黑纸包好备用。 2.叶绿素理化性质的观察 ▲光对叶绿素的破坏作用 分别在两支具塞试管中注入2cm叶绿素的石油醚提取液,盖紧塞子。一支置暗处 支置强光(如太阳光)下,2-3h后,观察比较两者的变化差异,或在分光光度计的663mm处
17． 叶绿素的提取及理化性质的鉴定 66 叶绿素的提取及理化性质的鉴定 17 叶绿素是植物吸收太阳光能进行光合作用的主要色素，高等植物叶绿体中主要含叶绿素 a 和叶绿素 b。 叶绿素是一个双羧酸的酯，在碱的作用下可发生皂化反应，产生叶绿酸钾。在酸性条件 下，卟啉环中央的镁离子可以被 H+ 取代，产生褐色的去镁叶绿素。叶绿素中的 Mg++ 也可以 被其它金属离子，如 Cu++ 或 Zn++ 等取代，此时叶绿素仍保持绿色。叶绿素在光照下会发出 暗红色的荧光。 实验目的： 1． 了解叶绿素的分子结构、理化性质及其生物学功能。 2． 学习提取叶绿素并对其理化性质进行分析的基本方法。 实验内容： 利用叶绿素能溶于有机溶剂的特性，用丙酮将叶绿素从叶中提取出来，再运用一些简单 的物理和化学方法鉴定叶绿素的理化性质。 实验步骤： 1．叶绿素的提取 ▲ 将新鲜菠菜（Spinacia）叶片洗净擦干，去叶柄及叶脉。称取样品 8g，剪碎置研 钵内，加入 8cm3 丙酮及少许固体碳酸钠，迅速研磨成匀浆；然后再加入 20cm3 丙酮充分研磨。 ▲ 在一玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉，将匀浆通过脱脂棉过滤至已装有 20cm3 石油醚 的分液漏斗中，再用少量的丙酮冲洗叶片残渣及研钵，合并滤液。 ▲ 沿分液漏斗的壁小心加入 40cm3 蒸镏水，轻轻摇动，使色素转移到上面的石油醚层 静置数分钟，待分层清楚后弃去下面的丙酮一一水层。如发生乳化现象可加入 2－3cm3 饱和 NaCl 溶液。 ▲ 在分液漏中再加入 40cm3 蒸镏水，轻轻摇动，以洗去石油醚中残留的丙酮，共洗两 次。然后将叶绿素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中，置暗处或用黑纸包好备用。 2．叶绿素理化性质的观察 ▲ 光对叶绿素的破坏作用 分别在两支具塞试管中注入 2cm3 叶绿素的石油醚提取液，盖紧塞子。一支置暗处，一 支置强光(如太阳光)下，2－3h 后，观察比较两者的变化差异，或在分光光度计的 663nm 处 图 17.1 叶绿素分子式
绿素的提取及理化性质的鉴定 比较二者的吸光度值的差异,将结果记录在实验报告中。 ▲叶绿素的皂化反应 在一支试管中先加入2cm3叶绿素石油醚提取液,再加入2cm3新配制的30%KOH-甲醇 溶液,用力摇动混匀后静置,待分层清楚后观察各层的变化,将观察结果记录在实验报告中, ▲去镁叶绿素的形成 在一支试管中加2cm3叶绿素石油醚提取液,然后小心加入3cm36mol/dm3HC1,摇动混 匀后静置,待分层后观察各层的变化,记录观察结果 ▲铜的取代作用 在一支试管中加入3cm3叶绿素丙酮提取液,然后加入3cm26mol/dm3HC1,摇匀后再加 入一小块醋酸铜结晶,将试管在水溶中微微加热,观察溶液的颜色变化,记录观察结果 叶绿素的荧光 在一支试管中加入2cm3叶绿素石油醚提取液,在与入射光(如窗口的自然光)相垂直的 方向观察叶绿素荧光,记录观察结果 综合分析: 1.叶绿素在植物光合作用过程中起什么作用? 2.提取叶绿素时加入NaCO2的作用是什么?加多了可能出现什么问题? 实殓报告
17． 叶绿素的提取及理化性质的鉴定 67 比较二者的吸光度值的差异，将结果记录在实验报告中。 ▲ 叶绿素的皂化反应 在一支试管中先加入 2cm3 叶绿素石油醚提取液，再加入 2cm3 新配制的 30％ KOH－甲醇 溶液，用力摇动混匀后静置，待分层清楚后观察各层的变化，将观察结果记录在实验报告中。 ▲ 去镁叶绿素的形成 在一支试管中加 2cm3 叶绿素石油醚提取液，然后小心加入 3cm3 6mol/dm3 HC1，摇动混 匀后静置，待分层后观察各层的变化，记录观察结果。 ▲ 铜的取代作用 在一支试管中加入 3cm3 叶绿素丙酮提取液，然后加入 3cm3 6mol/dm3 HC1，摇匀后再加 入一小块醋酸铜结晶，将试管在水溶中微微加热，观察溶液的颜色变化，记录观察结果。 ▲ 叶绿素的荧光 在一支试管中加入 2cm3 叶绿素石油醚提取液，在与入射光(如窗口的自然光)相垂直的 方向观察叶绿素荧光，记录观察结果。 综合分析： 1． 叶绿素在植物光合作用过程中起什么作用？ 2． 提取叶绿素时加入 Na2CO2的作用是什么？加多了可能出现什么问题？ 实验报告
绿素的提取及理化性质的鉴定 姓名 学号: 组(桌)号 叶绿素理化性质的分析鉴定 植物材料 实验日期 处理方法和试剂 反应结果 结果分析 68
17． 叶绿素的提取及理化性质的鉴定 68 姓名： 学号： 组（桌）号： ▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁ 叶绿素理化性质的分析鉴定 植物材料： 实验日期： 处理方法和试剂 反应结果 结果分析 ▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁▁