第11卷 天津医科大学学报VoL11 24 第1期 JTMU 2005 No.1 组织芯片研制的几点体会 王新允，朱丛中，刘婷，李艳，孙锐，孙翠云，王爱香，吴兴业，赵敏 天津医科大学病理教研室，天津300070) [摘要]目的：进行组织芯片制作可行性探讨，为快速、规范、简便、经济地进行各项科研工作提供一种新的技术方法。 方法：制作出组织芯片蜡块，进行HE、免疫组织化学和荧光原位杂交(FISH)染色，对组织芯片免疫组化与普通免疫组 化的结果进行比较。结果：各种染色切片上的组织芯基本符合观察需要，芯片免疫组化结果与普通免疫组化结果在 统计学上无显著性差异。结论：组织芯片的研制具有高通量、经济节约、减少实验误差的特点，是科研工作中的一种 新方法。 关键词]肺癌：组织芯片：技术：方法 中图分类号]R3612 [文献标识码]A 文章编号]1006-8147(2005)01-0024-03 A study on manufacture of tissue microarray WANG Xin-yun. ZHU Cong-zhong. LIU Ting, LI Yan. SUN Rui. SUN Cui-yun. WANG Ai-xiang, WU Xing-ye, ZHAO Min Department of Pathology, Tianjin Medical University, Tianjin 300070. China) ABSTRACT Objective: To detect the feasibility of tissue microarray so that a new method could be provided for research. Methods: Two tissue microarray blocks were manufactured and stained on the sections cutting from them by HE, immunohistochemical and fluorescence in situ hybridization (FISH) methods were manufactured and compared with the normal sections. Results: The cores on slides were basically accordant with requirement of research, and there were no significant differences between the results of tissue microarray and normal sections that were dealed with immunohistochemical method. Conclusion: Tissue microarray has characters of high-throughput, economy and low rate of experimental error; it might be a new technique in scientific researches in the future. KEY WORDS Lung cancer; Tissue microarray; Technique; Method 组织芯片是20世纪末发展起来的一种新技术， 1材料和方法 它将数十甚至数百个小组织芯整齐地排布于一张载 1.1供体蜡块的选取和准备收集所需的供体蜡 玻片上，可以同时对多个组织样本进行研究，并能与 块，重新切片作HE染色，在显微镜下观察并选取富 免疫组织化学、原位杂交和荧光原位杂交uores- 含肿瘤细胞的区域作标记，然后在供体蜡块的相应 cence in situ hybridization, FISH)等技术结合起来运 位置作标记。由于组织芯片中每一块组织的面积都 用，非常简便经济。 非常小，因此在选材时应选取含有目标组织多的区 我们经过长期摸索和实践，逐渐掌握了一套较 域，避开坏死较多处。 高水平的组织芯片制作方法，现将在这方面的几点 1.2受体蜡块的准备制作组织芯片的受体蜡块 体会介绍如下。 需要有较好的柔韧度和硬度，我们经过反复研究和 摸索，最后选用了将德国蜡和美国蜡按49：1混合， ·天津市科委重点攻关课题编号：033804211) 经3次沉淀去除杂质。蜡快制成后，用阵列仪按事先 作者简介：王新允1945-)，女，教授，研究方向：肺癌的分子生物学： 设计好的阵列打孔，孔径0.6mm,间距1mm= 朱丛中1977-).女，硕士学位，研究方向：肺癌的分子生物学
! 天津市科委重点攻关课题（编号："##$"%&’’） 作者简介：王新允（’(%)*），女，教授，研究方向：肺癌的分子生物学； 朱丛中（’(++*），女，硕士学位，研究方向：肺癌的分子生物学。 ,摘要- 目的：进行组织芯片制作可行性探讨，为快速、规范、简便、经济地进行各项科研工作提供一种新的技术方法。 方法：制作出组织芯片蜡块，进行 ./、免疫组织化学和荧光原位杂交0123.4染色，对组织芯片免疫组化与普通免疫组 化的结果进行比较。结果：各种染色切片上的组织芯基本符合观察需要，芯片免疫组化结果与普通免疫组化结果在 统计学上无显著性差异。结论：组织芯片的研制具有高通量、经济节约、减少实验误差的特点，是科研工作中的一种 新方法。 ［关键词］肺癌；组织芯片；技术；方法 ［中图分类号］5#6’7 8& !文献标识码" 9 ［文章编号］’""6*$’%+0&"")4"’*""&%*"# # $%&’( )* +,*&-,.%&/0 )- %1$$&0 +1./),//,( :9;?*@A?，B.C DE?F*GHE?F，I2C J>?F，I2 KL?，3C; 5A>， 3C; DA>*@A?M:9;*N>L?F，:C =>?F*@O，B.9P Q>? （ROSLTUVO?U EW XLUHEYEF@，J>L?Z>? QO[>\LY C?>]OT^>U@，J>L?Z>? #"""+"，DH>?L） #2345#64 7890.%1:0_ JE [OUO\U UHO WOL^>‘>Y>U@ EW U>^^AO V>\TELTTL@ ^E UHLU L ?Oa VOUHE[ \EAY[ ‘O STE]>[O[ WET TO^OLT\H8 ;0%^^AO V>\TELTTL@ ‘YE\b^ aOTO VL?AWL\UATO[ L?[ ^UL>?O[ E? UHO ^O\U>E?^ \AUU>?F WTEV UHOV ‘@ ./，>VVA?EH>^UE\HOV>\LY L?[ WYAETO^\O?\O >? ^>UA H@‘T>[>GLU>E? 0123.4 VOUHE[^ aOTO VL?AWL\UATO[ L?[ \EVSLTO[ a>UH UHO ?ETVLY ^O\U>E?^8 50$&=%$_ JHO \ETO^ E? ^Y>[O^ aOTO ‘L^>\LYY@ L\\ET[L?U a>UH TOcA>TOVO?U EW TO^OLT\HM L?[ UHOTO aOTO ?E ^>F?>W>\L?U [>WWOTO?\O^ ‘OUaOO? UHO TO^AYU^ EW U>^^AO V>\TELTTL@ L?[ ?ETVLY ^O\U>E?^ UHLU aOTO [OLYO[ a>UH >VVA?EH>^UE\HOV>\LY VOUHE[8 6)*.=&$1)*_ J>^^AO V>\TELTTL@ HL^ \HLTL\UOT^ EW H>FH*UHTEAFHSAUM O\E?EV@ L?[ YEa TLUO EW ONSOT>VO?ULY OTTETd >U V>FHU ‘O L ?Oa UO\H?>cAO >? ^\>O?U>W>\ TO^OLT\HO^ >? UHO WAUATO8 >?@ A75B3 IA?F \L?\OTd J>^^AO V>\TELTTL@d JO\H?>cAOd QOUHE[ 组织芯片是 &" 世纪末发展起来的一种新技术， 它将数十甚至数百个小组织芯整齐地排布于一张载 玻片上，可以同时对多个组织样本进行研究，并能与 免疫组织化学、原位杂交和荧光原位杂交（WYAETO^e \O?\O >? ^>UA H@‘T>[>GLU>E?M 123.）等技术结合起来运 用，非常简便经济,’- 。 我们经过长期摸索和实践，逐渐掌握了一套较 高水平的组织芯片制作方法，现将在这方面的几点 体会介绍如下。 C 材料和方法 CDC 供体蜡块的选取和准备 收集所需的供体蜡 块，重新切片作 ./ 染色，在显微镜下观察并选取富 含肿瘤细胞的区域作标记，然后在供体蜡块的相应 位置作标记。由于组织芯片中每一块组织的面积都 非常小，因此在选材时应选取含有目标组织多的区 域，避开坏死较多处。 CDE 受体蜡块的准备 制作组织芯片的受体蜡块 需要有较好的柔韧度和硬度，我们经过反复研究和 摸索，最后选用了将德国蜡和美国蜡按 %(f’ 混合， 经 # 次沉淀去除杂质。蜡快制成后，用阵列仪按事先 设计好的阵列打孔，孔径 "86 VV，间距 ’ VV。 组织芯片研制的几点体会 ! 王新允，朱丛中，刘 婷，李 艳，孙 锐，孙翠云，王爱香，吴兴业，赵 敏 （天津医科大学病理教研室，天津 #"""+"） 第 ’’ 卷 天 津 医 科 大 学 学 报 gEY8’’ 24 第 ’ 期 hJQC &"") ;E8’
2 13切片前的准备工作在所有组织芯注入受体蜡的发展和完善,具有广阔的应用前景。笔者对组织芯 块后,将其放入温箱中15min,待石蜡软化使组织芯片制作方法进行深入的分析研究,层层把关,有效控 和受体蜡块融合均匀。取出蜡块,用一张干净载玻片制了每个步骤可能出现的误差和失败,制成了较高 稍用力按压组织芯面,使其表面水平一致。切片前将质量的组织芯片。 蜡块置入4℃冰箱过夜。连续切片,厚度3μm,捞片 首先在组织芯的选取上。因为每个组织芯都很 水温控制在45℃左右,有利于展片 小,所以需要选取富含肿瘤细胞的区域,并且避开坏 1.4切片后的处理切好的片子立即放入50℃左死等不利于观察的部位,以保证芯片的观察和统计。 右的温箱中烤片12h,以保证组织牢固地粘附于载另外供体蜡块制作的年份也是要考虑的因素之 玻片上。然后将切片取出自然降至室温,装盒备用。最好不要选用年代久远的蜡块,因为蜡块中抗原丢 如切片长期不用可封蜡后保存于4℃冰箱中。 失有逐年增多的趋势。但是有学者报道组织中的抗 2结果 原在制成蜡块60余年后仍然可以检测出其抗原性門 2.1芯片蜡块和HE切片的观察按上述方法制成 在受体蜡块石蜡的选用方面,由于该蜡块所含 2个蜡块,一个为20×12点阵,另一个为21×13点组织芯较多,组织芯的大小和之间的间距也较小,要 阵。2个蜡块蜡质细腻均匀,四周无开裂现象。切片求石蜡的柔韧度和硬度之间达到一个平衡。太软则 经HE染色后可见各个组织芯整齐排布于载玻片容易滞针,切片时容易掉片和点阵移位:太硬则打孔 上,基本无移位和扭曲现象,符合观察和进一步研究时容易引起点阵周边的石蜡出现裂纹。我们参考大 的需要。 量文献,最后选定将德国蜡和美国蜡按一定比例 2.2免疫组化染色结果笔者对肺癌组织芯片进混合49:1)经沉淀去除杂质的方法,保证了蜡块的 行了一些指标的检测,包括癌基因EphB4;肿瘤抑质量。 制基因PTEN;调亡抑制因子 Survivin,转移抑制因 在制作芯片蜡块前应根据研究的需要设计好阵 子CD9,CD82,FAK:生长因子IGF-2,bFGF:核转列,充分利用现有的空间,尽量让所有的组织芯排布 录因子HF-lα,NF-kB等抗体的染色。经过免疫组于蜡块中央。一般说来受体蜡块的四周应该留有 化染色过程后,绝大部分组织芯完好无缺地排布于0.5-1cm的边距:另外,各个组织芯之间应保持一定 载玻片上,得出的阳性结果与普通切片免疫组化阳的间距,有文献报道两个组织芯之间的距离两个中 性结果基本一致,在统计学上无显著性差异P心之间的距离)应为组织芯直径的1~1.5倍,我们所 0.05)3。提示组织芯片对原组织蜡块具有很好的取的组织芯直径为0.6mm,间距为1mm,略小于上 代 表性 述值,但是效果也很好。 23FISH染色结果进行了 Survivin的mRNA 由于供体蜡块所用的石蜡性质不一,所以在所有 FISH,荧光显微镜观察,绝大部分组织符合观察需组织芯注入受体蜡块后,应将其放入温箱中15min, 要,肿瘤细胞的胞浆中可见黄绿色荧光。 待石蜡软化使组织芯和受体蜡块融合均匀。拿出蜡 3讨论 块后用一张干净的载玻片稍用力按压组织芯面,使 组织芯片是将数十个、数百个乃至上千个组织其表面水平一致,以保证切出来的切片均含有组织 芯整齐地排列于某一载体上通常是载玻片〕而成的芯而不会岀现组织空缺现象。切片之前将蜡块在4℃ 微缩组织切片。组织芯片技术首先由 Kononen等于冰箱中过夜,连续切片之前用冰块稍微冰一下组织 l998年研制出来,到现在已经日趋完善。组织芯片可以使组织收缩利于切片。捞片的水温控制在45℃ 技术被认为是在生理学、病理学和细胞生物学等方左右,过高容易飞片,过低则不利于展片 面的一个革命性的技术创新。其主要优点有:4)体 切好的片子应立即放入50℃左右温箱中烤片 积小,信息含量高,可根据不同需要进行组合和设12h以上,以保证组织牢固地粘附于载玻片上,防止 计。Q)可同时检测大量组织,提高了工作效率,减少后续实验中的掉片现象。如果短期内不用,应该将切 了时间和资金的消耗。B)由于实验是一次完成,实片封蜡并保存于4℃冰箱中。 验条件相同,大大降低了实验误差,使其对比性和可 总之,组织芯片技术具备了其他方法无可比拟 重复性增强。 的优越性,还处在不断成熟、完善的过程中,随着其 随着科学技术的发展,组织芯片技术也在不断 不下转第35页)
!"# 切片前的准备工作 在所有组织芯注入受体蜡 块后，将其放入温箱中 !" #$%，待石蜡软化使组织芯 和受体蜡块融合均匀。取出蜡块，用一张干净载玻片 稍用力按压组织芯面，使其表面水平一致。切片前将 蜡块置入 & ’冰箱过夜。连续切片，厚度 ( !#，捞片 水温控制在 &" ’左右，有利于展片。 !"$ 切片后的处理 切好的片子立即放入 ") ’左 右的温箱中烤片 !* +，以保证组织牢固地粘附于载 玻片上。然后将切片取出自然降至室温，装盒备用。 如切片长期不用可封蜡后保存于 & ’冰箱中。 % 结果 %"! 芯片蜡块和 ,- 切片的观察 按上述方法制成 * 个蜡块，一个为 *).!* 点阵，另一个为 *!.!( 点 阵。* 个蜡块蜡质细腻均匀，四周无开裂现象。切片 经 ,- 染色后可见各个组织芯整齐排布于载玻片 上，基本无移位和扭曲现象，符合观察和进一步研究 的需要。 %"% 免疫组化染色结果 笔者对肺癌组织芯片进 行了一些指标的检测，包括癌基因 -/+0&；肿瘤抑 制基因 12-3；调亡抑制因子 4567$7$%，转移抑制因 子 89:，89;*，；生 长 因 子 ?@I%I%J% 等E&G 于 !::; 年研制出来，到现在已经日趋完善。组织芯片 技术被认为是在生理学、病理学和细胞生物学等方 面的一个革命性的技术创新。其主要优点有：（!）体 积小，信息含量高，可根据不同需要进行组合和设 计。（*）可同时检测大量组织，提高了工作效率，减少 了时间和资金的消耗。（(）由于实验是一次完成，实 验条件相同，大大降低了实验误差，使其对比性和可 重复性增强。 随着科学技术的发展，组织芯片技术也在不断 的发展和完善，具有广阔的应用前景。笔者对组织芯 片制作方法进行深入的分析研究，层层把关，有效控 制了每个步骤可能出现的误差和失败，制成了较高 质量的组织芯片。 首先在组织芯的选取上。因为每个组织芯都很 小，所以需要选取富含肿瘤细胞的区域，并且避开坏 死等不利于观察的部位，以保证芯片的观察和统计。 另外供体蜡块制作的年份也是要考虑的因素之一， 最好不要选用年代久远的蜡块，因为蜡块中抗原丢 失有逐年增多的趋势。但是有学者报道组织中的抗 原在制成蜡块 K) 余年后仍然可以检测出其抗原性E"G 在受体蜡块石蜡的选用方面，由于该蜡块所含 组织芯较多，组织芯的大小和之间的间距也较小，要 求石蜡的柔韧度和硬度之间达到一个平衡。太软则 容易滞针，切片时容易掉片和点阵移位；太硬则打孔 时容易引起点阵周边的石蜡出现裂纹。我们参考大 量文献，最后选定将德国蜡和美国蜡按一定比例 混合（&:L!）经沉淀去除杂质的方法，保证了蜡块的 质量。 在制作芯片蜡块前应根据研究的需要设计好阵 列，充分利用现有的空间，尽量让所有的组织芯排布 于蜡块中央。一般说来受体蜡块的四周应该留有 )D"F! M# 的边距；另外，各个组织芯之间应保持一定 的间距，有文献报道两个组织芯之间的距离（两个中 心之间的距离）应为组织芯直径的 !F!D" 倍，我们所 取的组织芯直径为 )DK ##，间距为 ! ##，略小于上 述值，但是效果也很好。 由于供体蜡块所用的石蜡性质不一，所以在所有 组织芯注入受体蜡块后，应将其放入温箱中 !" #$%， 待石蜡软化使组织芯和受体蜡块融合均匀。拿出蜡 块后用一张干净的载玻片稍用力按压组织芯面，使 其表面水平一致，以保证切出来的切片均含有组织 芯而不会出现组织空缺现象。切片之前将蜡块在 & ’ 冰箱中过夜，连续切片之前用冰块稍微冰一下组织， 可以使组织收缩利于切片。捞片的水温控制在 &" ’ 左右，过高容易飞片，过低则不利于展片。 切好的片子应立即放入 ") ’左右温箱中烤片 !* + 以上，以保证组织牢固地粘附于载玻片上，防止 后续实验中的掉片现象。如果短期内不用，应该将切 片封蜡并保存于 & ’冰箱中。 总之，组织芯片技术具备了其他方法无可比拟 的优越性，还处在不断成熟、完善的过程中，随着其 （下转第 (" 页） 25
35 的吸收破坏作用增加而引起骨的过快丢失。可见RA 关节局部炎症虽不是引起骨质疏松的独立危险因 (4 Rravallese EM, Goldring SR. Cellular mechanisms and the roles of 素,但能协同加快炎性关节附近骨质丢失。 cytokines in bone erosions in heumatoid[J). Arthritis Rheum. 2000. 参考文献 5]蔡春友,张维铭,孙保存,等.自细胞介素1对Ⅱ型胶原诱导类 [1马东来,李俊,陈敏珠,等.大鼠佐剂性关节炎的诱导及其免疫 风湿性关节炎模型的影响[中华骨科杂志,199,19(10):614 异常研究中华实验临床免疫学杂志,1995,7(3):13 [6] Goldring SR, Gravallese EM. Psthologenesis of bone rosins in rheuma- 2]章明放,张乃鑫,谭郁彬,等.不同剂量羟乙磷酸钠周期口服对 雌性大鼠去势后骨质疏松的作用中华骨科杂志,1996,16 toid arthritis[J]. Curr Opin Rheumetol, 2000. 12: 195 ulates osteoclast differention by a mechanism independencent of the 3] Shibuya K, Hagino H, Morio Y, et al. Cross-sectional and longi ODE/RANK interactin[J- J Exd Med, 2000, 191: 275 tudinal study of osteoporosis in with rheumatoid arthritis [J]. Clin (2004-07-02收稿) 止接第25页王新允文章) 不断地更新和发展,必将在将来的科研和临床诊断 PTEN and bFGF in lung cancer progression tissue microarray [J 等方面发挥重大的作用。 Chi J Cancer Res, 2004, 16(4): 297 参考文献 [4] Kononen J, Bubendorf L, Kallioniemi A, et al. Tissue microarrays 朱丛中,王新允,刘婷,等.肺癌中EphB4表达的生物学意义 for high-throughput molecular profiling of tumor specimens[J]. Na- 世界肿瘤杂志,2004,3(2:154 ture Med. 1998. 4: 844 2]李艳,王新允,刘婷,等. Survivin在肺癌中的表达和生物学意义 [5] Camp RL- Charette LA, Rimm DL. Validation of tissue microarray 门世界肿瘤杂志,2004,3(2157 technology in breast carcinoma[J] Lab Inv, 2000, 80: 1 943 (2004-11-19收稿) 3 Wang Xin-yun, Yao Zhi, Li Yan, et al. Expression of Survivin. 止接第29页王凯文章) 4]戴力扬,杜晓冰.黄韧带的形态学观察及其临床意义中华外8] Postacchini F, Gumina s, Cinotti G.etal. Ligamenta flava in 科杂志,1994327410 lumbar dise herniation and spinal stenosis [JI Spine, 1994. 19: 917 5]戴力扬,成培来.腰椎韧带的三维有限元分析第二军医大学p9] Verbiest h. A radicular syndrome from developmental narrow- 报,1992,13(2:1 ing of the lumbar vertebral canal [). J Bone Joint Surg(Br) [6] Yoshida M, Shima K, Taniguchi Y, et al. Hypertrophied ligamen- Im flavum in lumbar spinal canal stenosis: pathogenesis and (10)PK. Schrader, Dieter Grob, Beron A Rahn, et al. Histology of the lig- morphologic and immunohistochemical observation[J Spine, 1992, amentum flavum in patients with degenerative lumbar spinal steno- 17:1353 sis[J]. Eur Spine, 1999. 8: 323 [7 Nakamura E, Hashimoto N. Maeda Y, et al. Degeneration and [11] Okuda T, Baba L, Fujimoto Y, et al. The pathology of ligamentum ossification of the yellow ligament in unstable spine [J]. J Spinal flavum in degenerative lumbar disease[ Spine, 2004, 29: 1 689 004-06-03收稿)
!"# 戴力扬，杜晓冰$ 黄韧带的形态学观察及其临床意义 !%#$ 中华外 科杂志，&’’"()*+,-."&/ !0# 戴力扬，成培来$ 腰椎韧带的三维有限元分析 !%#$ 第二军医大学 学报，&’’*(&)+*-.&)) !1# 2345678 9( :56;8 6?@A56 2( BC 8D$ EFGBHCH3G56B7 D6?8;B>I C@; JD8K@; 6> D@;L8H 4G6>8D A8>8D 4CB>3464.G8C53?B>B464 8>7 ;3HG53D3?6A 8>7 6;;@>3564C3A5B;6A8D 3L4BHK8C63>!%#$ :G6>B (&’’*( &,.& )0) !,# M8N8;@H8 O( E8456;3C3 M( 98B78 2( BC 8D$ PB?B>BH8C63> 8>7 3446J6A8C63> 3J C5B FBDD3Q D6?8;B>C 6> @>4C8LDB 4G6>B !%#$ % :G6>8D P643H7 ( &’’/() .*RR !R# S34C8AA56>6 T( U@;6>8 : ( V6>3CC6 U( BC 8D$ W6?8;B>C8 JD8K8 6> D@;L8H 764A 5BH>68C63> 8>7 4G6>8D 4CB>3464 !%#$ :G6>B(&’’"( &’.’&, !’# XBHL6B4C E $ Y H876A@D8H 4F>7H3;B JH3; 7BKBD3G;B>C8D >8HH3QI 6>? 3J C5B D@;L8H KBHCBLH8D A8>8D !%#$ % Z3>B %36>C :@H? +ZH-( &’0"( )1.*)/ !&/# S Y [85>( BC 8D$ E64C3D3?F 3J C5B D6?I 8;B>C@; JD8K@; 6> G8C6B>C4 Q6C5 7B?B>BH8C6KB D@;L8H 4G6>8D 4CB>3I 464!%#$ O@H :G6>B( &’’’(R.)*) !&&# \N@78 =(Z8L8 ]( T@^6;3C3 2( BC 8D$ =5B G8C53D3?F 3J D6?8;B>C@; JD8K@; 6> 7B?B>BH8C6KB D@;L8H 764B84B!%#$ :G6>B(*//"(*’.& 1R’ +*//"I/1I/) 收稿- 不断地更新和发展，必将在将来的科研和临床诊断 等方面发挥重大的作用。 参考文献： !&# 朱丛中，王新允，刘婷( 等$ 肺癌中 OG5Z" 表达的生物学意义 !%#$ 世界肿瘤杂志，*//"，)+*-. &0" !*# 李艳，王新允，刘婷( 等$ :@HK6K6> 在肺癌中的表达和生物学意义 !%#$ 世界肿瘤杂志，*//"，)+*-. &0, !)# _8>? ‘6>IF@>( 283 a56( W6 28>( BC 8D$ ObGHB4463> 3J :@HK6K6>( S=OM 8>7 LTUT 6> D@>? A8>ABH GH3?HB4463> C644@B ;6AH38HH8F !%#$ V56 % V8>ABH [B4( *//"( &1+"-.*’, !"# 3>B> %( Z@LB>73HJ W( 6B;6 Y( BC 8D$ =644@B ;6AH38HH8F4 J3H 56?5IC5H3@?5G@C ;3DBA@D8H GH3J6D6>? 3J C@;3H 4GBA6;B>4!%#$ M8I C@HB 9B7( &’’R( ".R"" !0# V8;G [W( V58HBCCB WY( [6;; PW$ X8D678C63> 3J C644@B ;6AH38HH8F CBA5>3D3?F 6> LHB84C A8HA6>3;8!%# W8L ]>K( *///(R/.& ’") （*//"I&&I&’ 收稿） 的吸收破坏作用增加而引起骨的过快丢失。可见 [Y 关节局部炎症虽不是引起骨质疏松的独立危险因 素，但能协同加快炎性关节附近骨质丢失。 参考文献! !&# 马东来，李俊，陈敏珠，等$ 大鼠佐剂性关节炎的诱导及其免疫 异常研究!%#$ 中华实验临床免疫学杂志( &’’0，,（)）. &) !*# 章明放，张乃鑫，谭郁彬，等$ 不同剂量羟乙磷酸钠周期口服对 雌性大鼠去势后骨质疏松的作用!%#$ 中华骨科杂志，&’’1，&1 （’）. 0R& !)# :56L@F8 3 E( 93H63 2( BC 8D$ VH344I4BAC63>8D 8>7 D3>?6I C@76>8D 4C@7F 3J 34CB3G3H3464 6> Q6C5 H5B@;8C367 8HC5H6C64 !%#$ VD6> [5B@;C3D( *//*( *&. &0/ !"# [H8K8DDB4B O9( U3D7H6>? :[$ VBDD@D8H ;BA58>64;4 8>7 C5B H3DB4 3J AFC3N6>B4 6> L3>B BH3463>4 6> 5B@;8C367!%#$ YHC5H6C64 [5B@;( *///( "). * &") !0# 蔡春友，张维铭，孙保存，等$ 白细胞介素 & 对!型胶原诱导类 风湿性关节炎模型的影响!%#$ 中华骨科杂志，&’’’，&’（&/）. 1&" !1# U3D7H6>? :[(UH8K8DDB4B O9$ S4C53D3?B>B464 3J L3>B BH346>4 6> H5B@;8I C367 8HC5H6C64!%#$ V@HH \G6> [5B@;BC3D( *///( &*. &’0 !,# BAH3464 J8AC3H 8 4C6;I @D8CB4 34CB3AD84C 76JJBHB>C63> LF 8 ;BA58>64; 6>7BGB>7B>AB>C 3J C5B \PTc[YMCBH8AC6>!%#$ % Ob7 9B7( *///( &’&. *,0 （*//"I/,I/* 收稿） （上接第 *0 页王新允文章） （上接第 *’ 页王凯文章） 35