免疫学实验指导 脊灰疫苗
免疫学实验指导
实验要求与实验室规则 实验课要求 1.课前预习,明确目的,了解实验內容与方法。阅读实验指导 2实验过程严肃认真,按实验规程操作,要有严格的科学态度 3.仔细观察如实记录实验现象与结果,按时独立完成实验报告 实验室规则 1.进入实验室必须穿整洁的隔离衣,严禁在实验室內高声喧哗 2.禁止在实验室内饮食,吸烟和做与实验无关的其他事情 3.节约实验用品,爱护仪器设备,如有损坏及时报告老师 4.强化安全意识,注意水电安全。值日小组认真整理卫生, 保持实验台面清洁整齐,实验废物放入指定的垃圾桶内
实 验 要 求 与 实 验 室 规 则 实验课要求： 1. 课前预习，明确目的，了解实验内容与方法。阅读实验指导 2. 实验过程严肃认真，按实验规程操作，要有严格的科学态度 3. 仔细观察如实记录实验现象与结果，按时独立完成实验报告 实验室规则： 1. 进入实验室必须穿整洁的隔离衣，严禁在实验室内高声喧哗 2. 禁止在实验室内饮食，吸烟和做与实验无关的其他事情 3. 节约实验用品，爱护仪器设备，如有损坏及时报告老师 4. 强化安全意识，注意水电安全。值日小组认真整理卫生， 保持实验台面清洁整齐，实验废物放入指定的垃圾桶内
第一节凝集反应( Agglutination) 反应原理: 颗粒型抗原与相应抗体在电解质溶液中出现凝集的想象 凝集反应方法: 直接凝集:颗粒性抗原和相应抗体直接出现凝集反应 间接凝集:先将可溶性抗原吸附于大分子颗粒载体 表面,再与相应抗体结合发生凝集反应。 具体实验内容与方法: 玻片凝集试验:伤寒沙门氏菌与痢疾志贺式菌的检测,用已知抗血清 检测患者体内未知抗原。操作见实验指导 ◆试管凝集试验(微量反应板法):用已知颗粒性抗原与被检血清混合, 然后观察试管内有无凝集,并观察血清凝集效价,判断抗体浓度。 间接凝集试验(类风湿因子检测RF):属自身免疫性疾病 受外界刺激,机体lgG变性,产生抗原性(RF),刺激自身产生抗变性 lgG抗体,此抗体与RF因孑结合形成免疫复合物沉积于病变部位
第一节 凝集反应（Agglutination） 反应原理： 颗粒型抗原与相应抗体在电解质溶液中出现凝集的想象 凝集反应方法： 直接凝集：颗粒性抗原和相应抗体直接出现凝集反应 间接凝集：先将可溶性抗原吸附于大分子颗粒载体 表面,再与相应抗体结合发生凝集反应。 具体实验内容与方法： ◆ 玻片凝集试验：伤寒沙门氏菌与痢疾志贺式菌的检测，用已知抗血清 检测患者体内未知抗原。 操作见实验指导 ◆ 试管凝集试验（微量反应板法）：用已知颗粒性抗原与被检血清混合， 然后观察试管内有无凝集，并观察血清凝集效价，判断抗体浓度。 ◆ 间接凝集试验（类风湿因子检测 RF）：属自身免疫性疾病 受外界刺激，机体IgG变性，产生抗原性（RF），刺激自身产生抗变性 IgG抗体，此抗体与RF因子结合形成免疫复合物沉积于病变部位
抗原抗体反应尔意图 NaCl > 可见反应 直接凝集反应
抗原抗体反应示意图 NaCl 可见反应 直接凝集反应
实验一凝集反应 定义: 凝集反应指细菌、红细胞等颗粒性抗原或 表面覆盖抗原的颗粒状物质(如红细胞、聚苯乙 烯胶乳等),与相应抗体结合,在一定条件下, 形成肉眼可见的凝集团块现象。 实验目的: 掌握抗原抗体结合反应的原理,方法及其应用 属免疫学最简单最直接最常用的基础实验
定义： 凝集反应指细菌、红细胞等颗粒性抗原或 表面覆盖抗原的颗粒状物质(如红细胞、聚苯乙 烯胶乳等)，与相应抗体结合，在一定条件下， 形成肉眼可见的凝集团块现象。 实验目的： 掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用 属免疫学最简单最直接最常用的基础实验 实验一 凝集反应
Microscopic view Normal View 用已知的抗血清检测被检样品中有无相对应的抗原
用已知的抗血清检测被检样品中有无相对应的抗原
实验内容】 玻片凝集:常用已知抗血清检测未知抗原,定性 试管凝集:可检测未知的抗原或抗体并能报告凝集效价 玻片凝集反应(定义) 当颗粒性抗原与相应的抗体发生特异性结合时,两者 比例适宜,在电解质溶液中呈现肉眼可见的颗粒状 凝集,此现象称凝集反应
【实验内容】 玻片凝集： 常用已知抗血清检测未知抗原，定性 试管凝集：可检测未知的抗原或抗体并能报告凝集效价 一、玻片凝集反应（定义） 当颗粒性抗原与相应的抗体发生特异性结合时，两者 比例适宜，在电解质溶液中呈现肉眼可见的颗粒状 凝集，此现象称凝集反应
玻片凝集反应 实验材料】 1.1:20痢疾免疫血清,1:20伤寒免疫血清。 2.伤寒沙门菌菌液,痢疾志贺菌菌液。 3.生理盐水,瓌片,微量移液器,消毒缸等。 :2 取清洁瓌片两张,用记号笔,玻璃蜡笔作出标记和画好 分区,按实验指导要求加样操作
【实验材料】 1. 1:20痢疾免疫血清，1:20伤寒免疫血清。 2. 伤寒沙门菌菌液，痢疾志贺菌菌液。 3. 生理盐水，玻片，微量移液器，消毒缸等。 一、玻片凝集反应 1 2 取清洁玻片两张，用记号笔，玻璃蜡笔作出标记和画好 分区，按实验指导要求加样操作
方法】 1取洁净玻片2张,各用记号笔划分三等份 2.在玻片的左上角分别标记1和2。 3.按下列要求依次加入反应物。各种加量均为20微升 4.转动玻片,充分混匀1-2min后观察反应结果并作出解释 解释说明出现凝集和不岀现凝集的依据 2 生理1:20伤1:20痢 生理 1:20伤 1:20痢 盐水 血清 血清 盐水 血清 血清 伤寒沙伤寒沙 伤寒沙 痢疾志痢疾志 痢疾志 门菌 门菌 门菌 贺菌 贺菌 贺菌
【方法】 1. 取洁净玻片2张，各用记号笔划分三等份。 2. 在玻片的左上角分别标记1和2。 3. 按下列要求依次加入反应物。各种加量均为20微升 4. 转动玻片，充分混匀1-2min后观察反应结果并作出解释。 解释说明出现凝集和不出现凝集的依据。 ● ● ● ● 1 2 生理 1：20伤 1：20痢 盐水 血清 血清 + + + 伤寒沙 伤寒沙 伤寒沙 门菌 门菌 门 菌 生理 1：20伤 1：20痢 盐水 血清 血清 + + + 痢疾志 痢疾志 痢疾志 贺菌 贺菌 贺 菌
二、试管凝集反应 实验原理】 将待检血清作对倍稀释后,加入等量的已知颗粒性抗原与待检 血清混合,抗原与不同稀释度的抗体在试管內直接结合而出现 的凝集现象称为试管凝集反应。此法是一种半定量法。 常用已知抗原(如细菌悬液,RBC悬液)来测定被检血清中 相应抗体的水平(效价或滴度) 用于检测被检血清中是否存在和已知抗原相应的抗体 及抗体的效价:如;患者血清中免疫性抗体检测。 例如孕妇血清中免疫性gG检测,用于新生儿溶血病的诊断、 病毒感染后,患者抗病毒抗体产生情况的观察
二、试管凝集反应 【实验原理】 将待检血清作对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检 血清混合，抗原与不同稀释度的抗体在试管内直接结合而出现 的凝集现象称为试管凝集反应。此法是一种半定量法。 常用已知抗原(如细菌悬液，RBC悬液)来测定被检血清中 相应抗体的水平(效价或滴度)。 用于检测被检血清中是否存在和已知抗原相应的抗体 及抗体的效价：如；患者血清中免疫性抗体检测。 例如 孕妇血清中免疫性IgG检测，用于新生儿溶血病的诊断、 病毒感染后，患者抗病毒抗体产生情况的观察