纸上层析 Paper Chromatography
1 纸上层析 Paper Chromatography
目录 纸色谱法的基本理论 二几种特殊类型的纸色谱法 三应用举例
2 目录 • 一 纸色谱法的基本理论 • 二 几种特殊类型的纸色谱法 • 三 应用举例
基本原理 固定相滤纸上的吸附水 (或用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇处理) 流动相—溶剂 (乙醇、丙醇、丙酮及与水不相溶的溶剂) 原理:根据溶质A在流动相与固定相(纸纤维中吸着 的水分)中的分配系数不同,流动相因毛细现象 沿纸上升,KD大的前进慢,KD小的上升快,因而 溶质得到分离。 A 固定相 (但也有人认为属离子交换 A 色谱和吸附色谱或三者皆有) 流动相
3 原理：根据溶质A在流动相与固定相（纸纤维中吸着 的水分）中的分配系数不同，流动相因毛细现象 沿纸上升，KD大的前进慢，KD小的上升快，因而 溶质得到分离。 D [A] [A] K = 固定相 流动相 固定相——滤纸上的吸附水 (或用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇处理) 流动相——溶剂 （乙醇、丙醇、丙酮及与水不相溶的溶剂） （但也有人认为属离子交换 色谱和吸附色谱或三者皆有） 一 . 基本原理
纸色谱示意图 比移值R1= 层析纸 溶剂故8y R 起始线 (原点)R+>0.02,A、B可分离 展开剂 层析缸 与标样比较可定性鉴定
4 纸色谱示意图 Rf > 0.02，A、B可分离. 1 2 f 1 f 2 f x R y x R y x R y = = = 比移值 溶剂前沿 起始线 （原点） 展开剂 y x2 x1 层析缸 层 析 纸 与标样比较可定性鉴定
二.影响R的因素 1.展开剂种类 氨基酸的R值 天 冬甘白谷丝组 氨氨氨氨氨氨 酸酸酸酸酸酸 展开剂 正丁醇+吡啶+水0200290.600.200.33024 正丁醇+醋酸+水0.230.230.700.280.220.11 12:3:5
5 氨基酸的Rf值 展开剂 正丁醇+吡啶+水 0.20 0.29 0.60 0.20 0.33 0.24 1 : 1 : 1 正丁醇+醋酸+水 0.23 0.23 0.70 0.28 0.22 0.11 12 : 3 : 5 天 冬 氨 酸 甘 氨 酸 白 氨 酸 谷 氨 酸 丝 氨 酸 组 氨 酸 1. 展开剂种类 二. 影响Rf的因素
2.滤纸的性质 粘稠展开剂(正丁醇等)---7速滤纸 黏度小的展开剂(石油醚等)-慢速滤纸 3.温度的影响 影响分配系数的变化,而且展开剂组成也受温度影响 而有一定程度改变,但影响较小。一般不需要特别的 恒温装置 4.展开方式 上行-慢(常用) 下行--快(适用于比移值小的溶质)
6 2. 滤纸的性质 粘稠展开剂(正丁醇等) ------ 快速滤纸 黏度小的展开剂(石油醚等) ------慢速滤纸 4 . 展开方式 上行 ---- 慢(常用) 下行---- 快( 适用于比移值小的溶质) 3. 温度的影响 影响分配系数的变化，而且展开剂组成也受温度影响 而有一定程度改变，但影响较小。一般不需要特别的 恒温装置
纸色谱法的基本操作 3.1纸的准备 3.2点样 3.3展开 3.4显色及定位 3.5定量
7 三. 纸色谱法的基本操作 3.1 纸的准备 3.2 点样 3.3 展开 3.4 显色及定位 3.5 定量
3.1纸的准备 般纸色谱法使用的滤纸应具备以下条件: (1)滤纸中应不含有水或有机溶剂能溶解的杂质 (2)滤纸被溶剂浸润时,不应有机械折痕和损伤。即 应具有一定的强度 ·(3)滤纸对溶剂的渗透速度应适当,渗透速度太快时 易引起斑点拖尾,影响分离效果,速度太慢时,耗费时 间太长。 ·(4)纸质应均一,否则会影响实验结果的重复性,特 别是定量实验中这点更是重要
8 3.1 纸的准备 一般纸色谱法使用的滤纸应具备以下条件： • （1） 滤纸中应不含有水或有机溶剂能溶解的杂质。 • （2） 滤纸被溶剂浸润时，不应有机械折痕和损伤。即 应具有一定的强度。 • （3） 滤纸对溶剂的渗透速度应适当，渗透速度太快时 易引起斑点拖尾，影响分离效果，速度太慢时，耗费时 间太长。 • （4） 纸质应均一，否则会影响实验结果的重复性，特 别是定量实验中这点更是重要
3.2点样 层析纸按需要剪裁成长条形(或筒型) 用微量注射器或玻 璃毛细管吸取一定 量试样点在原点上。 试样点的直径一般 应小于5mm。可并 排点多个试样同时 展开
9 层析纸按需要剪裁成长条形（或筒型） 3.2 点样 用微量注射器或玻 璃毛细管吸取一定 量试样点在原点上。 试样点的直径一般 应小于5mm。可并 排点多个试样同时 展开
3.3展开 将滤纸浸于层析缸中的展开剂中,使展开 剂通过滤纸的毛细作用上升(或下降), 实现试样的分离 展开时必须在密闭的容器中进行。 除展开剂不得浸泡到点样线 端一元展开 二元展开(双向展开) 多段展开
10 展开时必须在密闭的容器中进行。 3.3 展开 展开剂不得浸泡到点样线 一元展开 二元展开（双向展开） 多段展开 将滤纸浸于层析缸中的展开剂中，使展开 剂通过滤纸的毛细作用上升（或下降）， 实现试样的分离