第三章基因工程 普通棉花 抗虫棉花
非转基因番木瓜 转基因番木瓜 第三章 基因工程
3.1 重组DNA技术的基本工具
3.1 重组DNA技术的基本工具
三种“分子工具” “分子手术刀 “分子运编车 “分子手术刀 “分子缝合针 ▲时3-！重组DNA技术所需的三种基本工具示意图 “分子缝合针” “分子运输车
三种“分子工具” “分子手术刀” “分子缝合针” “分子运输车
一、限制性核酸内切酶—一分子手术刀 1.主要来源：主要从原核生物中分离纯化 2、种类：数干种 3、特点：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列 (特异性) 4、作用部位：特定切点上的磷酸二酯键
2、种类： 数千种 3、特点：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列 （特异性） 4、作用部位: 特定切点上的磷酸二酯键 ⒈主要来源： 主要从原核生物中分离纯化 一、限制性核酸内切酶 ——分子手术刀
限制酶 0 A 5 0=P-0 CH. 0 酸 4 0H日2 磷酸二酯键 5 G CH, 磷酸 OH H
限制酶 G 1’ 3’ 2’ 4’ 5’ 1’ 3’ 2’ 4’ 5’ A 磷酸二酯键 T G C C G T A A
5、两种常用的限制酶：EcoR I和SmaI EcoR I:大肠杆菌（Escherichia coli)R型 菌株中分离出的第一个限制酶； ·SmaI:粘质沙雷氏菌(Serratia narces5cens)中分离出的第一个限制酶
5、两种常用的限制酶： • EcoRⅠ：大肠杆菌（Escherichia coli）R型 菌株中分离出的第一个限制酶； • SmaⅠ：粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）中分离出的第一个限制酶。 EcoRⅠ和SmaⅠ
EcoRI限制酶的切割： 只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 被限制晦开的D州A两条单鞋的切口，带有儿个伸出的核苷酸 他们之间可正好互补配对，这荐的切口黏性末端。 黏性末端 G引AAT --1-----11 C TT A G 黏性末端
黏性末端 黏性末端 EcoRI 限制酶的切割: 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸， 他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开
Smal限制酶的作用 只能识别CCCGGG序列，并在c和G之间切开。 平末端 G 0-6 在C和G 之间切 开 中轴线
中轴线 SmaI 限制酶的作用 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两 条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 在C和G 之间切 开
G G G/b G 平末端 平末端
平末端 平末端
6、结果：产生黏性末端或平末端 FcoR I (在G与A之间切割】 A TT C T AA 钻性末端 中轴线 SmaI (在G与C之间切制) 一亚 中轴线 平末端 ▲图3-3限制酶切割DNA分子产生两种不同末端的示意图（箭头表示酶的切制位置）
6、结果：产生黏性末端或平末端